吳文輝，馮 健，耿媛媛，趙 玲，胡昌江*

(1.成都中醫(yī)藥大學(xué)，四川 成都 610075；2.四川新綠色藥業(yè)科技發(fā)展股份有限公司，四川 成都 611930)

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十四個(gè)產(chǎn)地淫羊藿中淫羊藿苷含量測(cè)定

吳文輝1,2，馮 健2，耿媛媛1，趙 玲1，胡昌江1*

(1.成都中醫(yī)藥大學(xué)，四川 成都 610075；2.四川新綠色藥業(yè)科技發(fā)展股份有限公司，四川 成都 611930)

目的：比較14個(gè)產(chǎn)地淫羊藿中淫羊藿苷的含量。方法：采用高效液相色譜法(HPLC)，以Phenomenex C18柱( 250mm×4.6mm, 5μm) 為分析柱，流動(dòng)相為乙腈-水(30∶70) ，檢測(cè)波長(zhǎng)為270nm，流速為1.00mL/min，柱溫為30℃，進(jìn)樣量為10μL。結(jié)果：14個(gè)產(chǎn)地淫羊藿中淫羊藿苷含量范圍為1.871 6～11.422 2mg/g。結(jié)論：14個(gè)產(chǎn)地中僅有6個(gè)產(chǎn)地淫羊藿中淫羊藿苷含量符合《中國(guó)藥典》標(biāo)準(zhǔn)，合格率為42.9%。

淫羊藿；淫羊藿苷；藥物含量測(cè)定

淫羊藿為小檗科植物淫羊藿EpimediumbrevicornuMaxim.、箭葉淫羊藿Epimediumsagittatum(Sieb.et Zucc.)Maxim.、柔毛淫羊藿Epimediumpubescens.Maxim.或朝鮮淫羊藿EpimediumkoreanumNakai的干燥葉。其為中醫(yī)臨床常用藥，具有補(bǔ)腎陽(yáng)、強(qiáng)筋骨、祛風(fēng)濕的功效，主要用于腎陽(yáng)虛衰、陽(yáng)痿遺精、筋骨痿軟、風(fēng)濕痹痛、麻木拘攣的治療[1]。淫羊藿屬植物在中國(guó)有40余種，廣泛分布于除新疆、西藏、內(nèi)蒙古、河北、山東以外的各個(gè)省份，藥材主產(chǎn)區(qū)種類復(fù)雜[2]。中醫(yī)臨床使用過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，在相同用量下，某些產(chǎn)地淫羊藿療效偏低，而某些產(chǎn)地淫羊藿療效甚好。故有必要對(duì)市面上不同產(chǎn)地的淫羊藿進(jìn)行對(duì)比，為其臨床合理用藥提供參考依據(jù)。

1 儀器與試藥

Agilengt 1200 型高效液相色譜儀；Agilengt1200 化學(xué)工作站；BP-211D 型電子天平( 德國(guó)Satorius ) ；KQ3200B 型超聲波清洗器(昆山市儀器有限公司)；BJA-500型高速多功能粉碎機(jī)(浙江愛(ài)雪廚房設(shè)備有限公司)。

淫羊藿苷對(duì)照品(批號(hào)為110737-200415，中國(guó)食品藥品檢定研究院) ；淫羊藿藥材購(gòu)自成都荷花池中藥材市場(chǎng)，經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院胡昌江教授鑒定為小檗科植物淫羊藿EpimediumbrevicornuMaxim.、箭葉淫羊藿Epimediumsagittatum(Sieb.et Zucc.)Maxim.、柔毛淫羊藿Epimediumpubescens.Maxim.或朝鮮淫羊藿EpimediumkoreanumNakai的干燥葉。乙腈( 色譜純，迪馬公司)，水為樂(lè)百氏純凈水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性

色譜柱：Phenomenex C18柱(250mm×4.6mm,5μm)，流動(dòng)相：乙腈-水(30∶70) ，檢測(cè)波長(zhǎng)：270nm，流速：1.0mL/min，柱溫：30℃。在上述色譜條件下，淫羊藿苷和樣品中其他組分色譜峰可基線分離，淫羊藿苷與相鄰色譜峰的分離度 R > 1.50，按淫羊藿苷色譜峰計(jì)算，理論塔板數(shù)( N) >1 500[3-6]。對(duì)照品溶液和供試品溶液色譜見(jiàn)圖1。

圖1 淫羊藿HPLC色譜

2.2 供試品制備

取淫羊藿苷對(duì)照品適量，精密稱定，置于100mL棕色量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液( 每1mL 含淫羊藿苷對(duì)照品0.106 4mg) 。取淫羊藿粉末(過(guò)三號(hào)篩)約0.2g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇20mL，稱定重量，超聲處理1h，再稱定重量，用稀乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm) 濾過(guò)，即為供試品[7-10]。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 線性關(guān)系考察 按照上述色譜條件，配置不同濃度的淫羊藿苷對(duì)照品溶液，分別為21.28、42.56、63.84、85.12、106.40、127.68μg/mL，分別吸取10μL注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積。以峰面積值(A)對(duì)進(jìn)樣量(C)進(jìn)行線性回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程A=2 287.7X-8.533 3(r=0.999 9) 。結(jié)果表明，淫羊藿苷進(jìn)樣量在0. 212 8～1.276 8mg進(jìn)樣量范圍內(nèi)與峰面積積分呈良好的線性關(guān)系。

2.3.2 精密度試驗(yàn) 精密吸取上述對(duì)照品溶液10μL，重復(fù)進(jìn)樣5次，結(jié)果表明淫羊藿苷的色譜峰峰面積RSD 為1.63%，表明儀器的精密度良好。

2.3.3 重現(xiàn)性試驗(yàn) 取同一批樣品5份，分別按照供試品溶液制備方法制備，取供試品溶液進(jìn)樣10μL，測(cè)定峰面積，計(jì)算淫羊藿苷含量。結(jié)果測(cè)得淫羊藿苷含量RSD為1.02%，表明該方法重現(xiàn)性良好。

2.3.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液，分別于0、2、4、6、8h 進(jìn)樣10μL，測(cè)定峰面積，計(jì)算淫羊藿苷含量。結(jié)果測(cè)得淫羊藿苷含量RSD 為1.10%，表明供試品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.5 加樣回收率試驗(yàn) 取9份已知淫羊藿苷含量的樣品(淫羊藿苷含量為5.388 9mg/g)，精密稱定，分為3組，每組3份，分別添加樣品淫羊藿苷含量50%、100%、150%的對(duì)照品溶液( 淫羊藿苷為0.112 5mg/mL的乙醇溶液)。按上述方法制備供試品溶液，進(jìn)樣10μL，測(cè)定峰面積，計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 淫羊藿苷加樣回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果 (n=6)

2.4 樣品含量測(cè)定

取14個(gè)產(chǎn)地淫羊藿樣品，按照上述方法制備供試品溶液，分別進(jìn)樣10μL，測(cè)定峰面積，每個(gè)產(chǎn)地測(cè)定平行2次，計(jì)算淫羊藿苷平均含量，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 淫羊藿14個(gè)產(chǎn)地中淫羊藿苷含量

3 討論

本實(shí)驗(yàn)采用HPLC法測(cè)定了14個(gè)產(chǎn)地淫羊藿中淫羊藿苷的含量，結(jié)果表明該法精密度、重現(xiàn)性、穩(wěn)定性均較好。《中國(guó)藥典》2010版淫羊藿含量測(cè)定項(xiàng)下規(guī)定本品按干燥品計(jì)算，含淫羊藿苷(C33H40O15)不得少于0.50%[1]。但結(jié)果表明14 個(gè)產(chǎn)地中僅有6個(gè)產(chǎn)地淫羊藿符合《中國(guó)藥典》含量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)，合格率為42.9%。因此在臨床選用中藥時(shí)，為保證臨床效果，應(yīng)盡量選用道地藥材。

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(責(zé)任編輯：尹晨茹)

Determination of the Icariin in 14 Areas of the Epimedium

Wu Wenhui1,2,Feng Jian2,Geng Yuanyuan1,Zhao Ling1,Hu Changjiang1*

(1.Chengdu University of TCM,Chengdu 610075,China;2.Neo-Green Pharmaceutical Co.Ltd.,Chengdu 611930,China)

Objective:Comparison of the icariin in 14 areas of the Epimedium.Methods:Using high performance liquid chromatography (HPLC), the analytical columnPhenomenex C18column (250mm×4. 6mm, 5μm), mobile phase acetonitrile water (30∶70), the detection wavelength was 270nm; the flow rate was 1.0mL/min; column temperature is 30℃.Results:The content of icariin in 14 varieties of 1.871 6～11.422 2mg/g.Conclusion:Epimedium 14 origin in only 6 different regions with "standard" Chinese Pharmacopoeia 2010 edition content.

Epimedium; Icariin; Area

2014-05-21

國(guó)家中醫(yī)藥管理局行業(yè)專項(xiàng)(No. 20110700717)

吳文輝(1986-)，男，成都中醫(yī)藥大學(xué)博士研究生，研究方向?yàn)橹兴幣谥婆c臨床。

胡昌江(1952-)，男，成都中醫(yī)藥大學(xué)教授，博士生導(dǎo)師。E-mail：hhccjj@hotmail.com。

R284.1

A

1673-2197(2014)18-0008-02