河北省中醫(yī)院骨傷科（石家莊 050011）

王 鵬 喬 鋼△ 賈露露△△ 國(guó)延軍 牟成林 趙 建 崔書(shū)國(guó) 杜景華

神經(jīng)根型頸椎病是因椎間盤(pán)突出、退變、節(jié)段性不穩(wěn)定、骨質(zhì)增生或骨贅形成等在椎管內(nèi)或椎間孔處壓迫、刺激頸神經(jīng)根導(dǎo)致，在各型頸椎病中發(fā)病率最高，約占60% ～70%，［1］而其急性期根性疼痛尤為突出。筆者通過(guò)大量臨床實(shí)踐自擬通陽(yáng)利濕方經(jīng)驗(yàn)用藥，取得較好臨床療效，但其機(jī)制尚不完全明了。本研究擬對(duì)大鼠頸神經(jīng)根性疼痛的行為學(xué)等變化進(jìn)行觀察，探討通陽(yáng)利濕方對(duì)神經(jīng)根型頸椎病急性期大鼠模型根性疼痛的治療作用及機(jī)制。

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 選取健康成年雄性SPF級(jí)Spra gue－Dawley（SD）大鼠60只，體質(zhì)量 （210±10）g，由河北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供 （合格證編號(hào):1212144）。籠內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)大鼠顆粒飼料飼養(yǎng)，室溫 （24±2）℃，相對(duì)濕度70%左右，定時(shí)通風(fēng)換氣，照明:白天/黑夜各12 h循環(huán)。

1.2 試驗(yàn)藥品 通陽(yáng)利濕方，藥物組成:桂枝9 g，黃芪30 g，葛根15 g，白芍25 g，白術(shù)12 g，茯苓15 g，豬苓12 g，澤瀉10 g，苦杏仁6 g，香薷9 g，葶藶子10 g，車(chē)前子15 g，薏苡仁30 g，延胡索10 g，川芎9 g，酒大黃3 g，羌活9 g，姜黃10 g，威靈仙9 g。中藥配方顆粒購(gòu)于廣東一方制藥有限公司，批號(hào):1308151。

1.3 儀器 ZH－YLS－3E電子壓痛儀。

2 方法

2.1 神經(jīng)根型頸椎病急性期大鼠模型的建立參照謝煒［2］、于林［3］、趙偉宏［4］椎管插線法。具體造模方法如下:用10%水合氯醛按0.3mL/100 g劑量麻醉腹腔注射麻醉大鼠，麻醉成功后，剪毛，取俯臥位固定，常規(guī)消毒后，手指觸及下頸部最高棘突 （T2），以此為基準(zhǔn)，向上于頸部正中線做4 cm左右切口，切開(kāi)皮膚、皮下組織，逐層鈍性分離頸后部肌群，直至C4～T2左側(cè)椎弓充分暴露，剝離干凈其表面肌肉、韌帶等組織，使用顯微鑷輕輕挑開(kāi) C5～6、C6～7、C7～ T1椎間隙的黃韌帶及結(jié)締組織，用止血鉗輕輕鉗開(kāi)C6、C7左側(cè)錐弓板及部分關(guān)節(jié)突，開(kāi)窗暴露脊髓，用眼科神經(jīng)剝離子把脊髓輕柔推至右側(cè)，再用顯微外科鑷子將2根各8 mm長(zhǎng)、直徑0.55 mm尼龍漁線 （漁線經(jīng)過(guò)酒精浸泡，無(wú)菌干燥后使用）分別沿脊髓縱軸向頭尾兩端插入至C5～7、C6～T1左側(cè)神經(jīng)根處，兩根漁線在C6、C7神經(jīng)根處重疊，牢固嵌入骨性椎管內(nèi)，以加強(qiáng)對(duì)下位左側(cè)頸神經(jīng)根C6、C7的卡壓損傷，避免大鼠自我修復(fù)過(guò)快。插線時(shí)精細(xì)操作，漁線避免過(guò)度向下壓迫，以免碰破椎靜脈叢后致椎管內(nèi)大出血。置線成功后，逐層關(guān)閉創(chuàng)口，間斷縫合。術(shù)后常規(guī)予手術(shù)大鼠肌內(nèi)注射慶大霉素預(yù)防創(chuàng)口感染。術(shù)中麻醉意外致死亡2只，手術(shù)損傷致死亡4只，術(shù)后5天內(nèi)死亡4只。剩余50只大鼠于術(shù)后即表現(xiàn)出顯著的患肢疼痛相關(guān)行為，5天時(shí)進(jìn)入病變平臺(tái)期，無(wú)脫失，無(wú)自愈。

2.2 實(shí)驗(yàn)分組 入組大鼠于術(shù)后第5天進(jìn)行評(píng)價(jià)，篩選條件如:①步態(tài)評(píng)分，2～3分;②未見(jiàn)脊髓壓迫癥狀，共有40只大鼠符合條件入組。隨機(jī)編號(hào)，分為2個(gè)組:對(duì)照組、治療組，每組20只。

2.3 藥物干預(yù) 兩組均于術(shù)后第6天開(kāi)始灌胃，以14天為1個(gè)療程，治療1個(gè)療程。

2.3.1 治療組:用藥劑量按“動(dòng)物體表面積比率換算等劑量方法”，由正常成人每日常用劑量換算得出，相當(dāng)于成人20 g/70 kg·d－1，以1.79 g/kg·d－1劑量計(jì)算，將通陽(yáng)利濕方顆粒加生理鹽水配成濃度為62.65 g/kg的溶液，每只大鼠灌胃量為3 mL，連續(xù)灌胃14 d（2次/d）。

2.3.2 對(duì)照組:取與治療組等量的生理鹽水，連續(xù)灌胃14 d（2次/d）。

2.4 觀察指標(biāo) 在9:00～11:00期間，分別觀察并記錄治療前后的數(shù)據(jù)，即術(shù)后第5天 （灌胃前1天即治療前），術(shù)后第20天 （灌胃結(jié)束第1天即治療后）的數(shù)據(jù)。

2.4.1 自發(fā)痛評(píng)估:將大鼠置于觀察箱中，待其安靜30 min后，記錄5 min內(nèi)左前肢離地的累積時(shí)間 （s），取3次的平均值。

2.4.2 步態(tài)評(píng)估:觀察大鼠行走及休息時(shí)的姿勢(shì)，參考Kawakami和Dubuisson法對(duì)其因疼痛攣縮造成的步態(tài)障礙進(jìn)行評(píng)估。1分=左前足無(wú)畸形、正常步態(tài);2分=左前足內(nèi)收、蜷縮畸形;左前足輕觸玻璃臺(tái)面，輕微持重或不持重，走時(shí)跛行;3分=左前足內(nèi)收、蜷縮畸形;左前足抬起，走動(dòng)時(shí)不觸臺(tái)面。

2.4.3 痛閾值改變:用電子壓痛儀壓迫大鼠左前掌中央部位，以大鼠掙扎、嘶叫時(shí)的壓力作為該大鼠的痛閾值。

2.4.4 游泳時(shí)間測(cè)定:大鼠于 （43±0.5）℃、水深35 cm的恒溫水槽中游泳，當(dāng)大鼠出現(xiàn)自然下沉?xí)r從水槽取出，大鼠入水至自然下沉的時(shí)間間隔記為大鼠游泳時(shí)間。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件分析，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用（±s）描述，治療前后不同時(shí)間段的組內(nèi)數(shù)據(jù)比較用兩組配對(duì)t檢驗(yàn)，P＜0.01為差異有非常顯著性;組間比較采用兩組獨(dú)立t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有顯著性。

3 結(jié)果

3.1 治療前后自發(fā)痛變化 治療組大鼠術(shù)后第20天 （治療后）左前肢離地的累積時(shí)間較術(shù)后第5天 （治療前）降低，差異有非常顯著性 （P＜0.01），對(duì)照組則差異不大 （P＞0.05）;治療組治療后左前肢的離地時(shí)間縮短明顯，與對(duì)照組相比差異有顯著性 （P＜0.05）。詳見(jiàn)表1。

表1 治療前后自發(fā)痛比較（±s）

表1 治療前后自發(fā)痛比較（±s）

注:與治療前相比，*P＜0.01;與對(duì)照組相比，△P＜0.05

組別 例數(shù) 治療前 治療后 治療前后的差值治療組 20 132.55±9.76 74.70±15.50＊△57.85±13.76對(duì)照組 20 133.80±12.78 117.05±21.5716.75±12.92

3.2 治療前后步態(tài)評(píng)分變化 治療組大鼠術(shù)后第20天 （治療后）左前足步態(tài)評(píng)分較術(shù)后第5天（治療前）減少，差異有非常顯著性 （P＜0.01），對(duì)照組治療后與治療前差異不大 （P＞0.05）;治療組治療后左前足步態(tài)評(píng)分減少明顯，與對(duì)照組相比差異有顯著性 （P＜0.05）。詳見(jiàn)表2。

表2 治療前后步態(tài)評(píng)分比較（±s）

表2 治療前后步態(tài)評(píng)分比較（±s）

注:與治療前相比，*P＜0.01;與對(duì)照組相比，△P＜0.05

組別 例數(shù) 治療前 治療后 治療前后的差值治療組 20 2.55±0.31 1.24±0.18＊△1.31±0.38對(duì)照組 20 2.55±0.22 2.21±0.230.34±0.30

3.3 對(duì)大鼠痛閾值的影響 造模后，患側(cè)痛閥值較健側(cè)明顯降低，但治療組大鼠術(shù)后第20天（治療后）左下肢痛閾值較術(shù)后第5天 （治療前）顯著提高，差異有非常顯著性 （P＜0.01），對(duì)照組治療后與治療前差異不大 （P＞0.05）;治療組治療后左下肢痛閾值增加明顯，與對(duì)照組相比差異有顯著性 （P＜0.05）。詳見(jiàn)表3。

表3 治療前后痛閾值比較（±s）

表3 治療前后痛閾值比較（±s）

注:與治療前相比，*P＜0.01;與對(duì)照組相比，△P＜0.05

組別 例數(shù) 治療前左下肢 右下肢治療后左下肢 右下肢治療組 20 497.85±61.66 743.05±61.96 572.95±79.68＊△845.90±98.72對(duì)照組 20 514.65±89.69 720.05±68.22 520.80±112.51775.90±69.30

3.4 游泳時(shí)間測(cè)定 治療組和對(duì)照組大鼠游泳時(shí)間均較造模前的正常時(shí)間縮短，但治療組大鼠術(shù)后第20天 （治療后）游泳時(shí)間較術(shù)后第5天 （治療前）增加，差異有非常顯著性 （P＜0.01），對(duì)照組治療后與治療前變化不大 （P＞0.05）;治療組治療后游泳時(shí)間增加明顯，與對(duì)照組相比差異有顯著性 （P＜0.05）。詳見(jiàn)表4。

表4 治療前后游泳時(shí)間比較（±s），s

表4 治療前后游泳時(shí)間比較（±s），s

注:與治療前相比，*P＜0.01;與對(duì)照組相比，△P＜0.05

組別 例數(shù) 治療前 治療后 治療前后的差值治療組 20 336.70±27.11 380.65±53.98＊△43.80±52.78對(duì)照組 20 349.25±51.96 359.25±50.6510.00±6.53

4 討論

目前國(guó)內(nèi)頸神經(jīng)根型疼痛動(dòng)物模型的造模方法主要有2種:①椎管插線法;②福爾馬林定量濾紙片法。福爾馬林定量濾紙片法較難對(duì)兩種刺激在實(shí)驗(yàn)中各自的作用進(jìn)行定量研究，易造成實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏倚，可控性因素低，所以選用單一發(fā)病機(jī)制的椎管插線法制備模型。［5］本實(shí)驗(yàn)對(duì)照組4組數(shù)值治療前后的組內(nèi)比較差異有一些變化，提示本實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ痛嬖谝欢ǖ淖杂浴?/p>

筆者通過(guò)大量臨床觀察發(fā)現(xiàn)神經(jīng)根型頸椎病急性期多可對(duì)應(yīng)中醫(yī)濕阻陽(yáng)遏型，自擬通陽(yáng)利濕方對(duì)癥治療。方中君藥黃芪、桂枝補(bǔ)氣通陽(yáng)。白芍、葛根舒太陽(yáng)之經(jīng)氣;白術(shù)、薏苡仁、茯苓、豬苓、澤瀉、車(chē)前子、葶藶子共用，溫腎陽(yáng)、健脾陽(yáng)以氣化運(yùn)水;苦杏仁、香薷啟肺上源，提壺揭蓋;延胡索、川芎，調(diào)達(dá)肝氣，使疏泄正常，以上皆為臣藥。佐藥酒大黃，制羌活、黃芪之燥熱。威靈仙通行十二經(jīng)，羌活入膀胱經(jīng)上部，姜黃行肢臂，為使藥。諸藥合用，可通三焦陽(yáng)氣，化積聚水濕，共彰通陽(yáng)利濕之效。

本實(shí)驗(yàn)表明，通過(guò)上述藥理作用，通陽(yáng)利濕方可以明顯提高模型大鼠壓足痛閾值，促進(jìn)模型動(dòng)物行為學(xué)改變的恢復(fù)，可能具有神經(jīng)保護(hù)作用，符合中醫(yī)理論對(duì)于“濕阻陽(yáng)遏”的治療原則，為臨床推廣應(yīng)用提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)，但其具體作用機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

［1］ 中國(guó)康復(fù)醫(yī)學(xué)會(huì)頸椎病專(zhuān)業(yè)委員會(huì).頸椎病診治與康復(fù)指南（2010版）［R］.北京:中國(guó)康復(fù)醫(yī)學(xué)會(huì)，2010.

［2］ 謝煒，趙偉宏，于林，等.川芍提取物對(duì)神經(jīng)根型頸椎病模型大鼠根性疼痛的保護(hù)作用研究 ［J］.廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào)，2008，24（5）:498－499

［3］ 于林.葛根提取物對(duì)神經(jīng)根型頸推病根性疼痛治療作用及機(jī)制研究［D］.廣州:南方醫(yī)科大學(xué)，2008.

［4］ 趙偉宏.川芍提取物對(duì)神經(jīng)根型頸推病根性疼痛治療作用及機(jī)制研究［D］.廣州:南方醫(yī)科大學(xué)，2008.

［5］ 蔣詩(shī)超，房敏，程英武，等.神經(jīng)根型頸椎病動(dòng)物模型國(guó)內(nèi)研究進(jìn)展及評(píng)價(jià)［J］.中華中醫(yī)藥雜志，2012，27（12）:3 052－3 056

（2014－04－03 收稿）