曹穎 王紅 劉俊紅 韓俊泉 劉斌 李棣華 呂沅姍

如意金黃散出自明代陳實(shí)功編著的《外科正宗》，由大黃、黃柏、姜黃、白芷、天花粉、天南星、陳皮、甘草、蒼術(shù)、厚樸組成，為2010年版《中華人民共和國(guó)藥典》(一部)收錄的品種，具有活血散瘀、消腫止痛之功效，臨床用于治療瘡瘍腫痛、丹毒流注、跌打損傷等證［2］。如意金黃散經(jīng)劑改制備為外用膏劑的金黃膏，應(yīng)用于臨床多年，療效確切。本實(shí)驗(yàn)以黃柏中小檗堿為指標(biāo)成分，考察了金黃散全方組及缺姜黃、白芷組和缺姜黃、白芷、天南星、陳皮、厚樸組膏劑中鹽酸小檗堿的體外經(jīng)皮滲透行為，并探討其不同藥對(duì)配伍對(duì)其透皮效果的影響。

1 材料與方法

1.1 滲透屏障

雄性wistar 大鼠200～250 g，8 只，2012年3月27日購(gòu)進(jìn)，7 周齡，由中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院衛(wèi)生學(xué)環(huán)境醫(yī)學(xué)研究所動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。將大鼠麻醉后固定四肢，剪去腹部正中線兩側(cè)的鼠毛，再用電動(dòng)剃須刀剃凈絨毛后迅速剝皮，小心剔除皮下脂肪及組織，用濾紙擦拭干凈，得離體鼠皮作為滲透屏障，放入冰箱(－20℃)冷凍保存，共16 塊。

1.2 藥物和試劑

鹽酸小檗堿對(duì)照品，購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào):110713-200911。

金黃膏及缺藥膏劑，天津市中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院制劑室提供。金黃散全方組組成為大黃160 g、黃柏160 g、姜黃160 g、白芷160 g、天花粉320 g、天南星64 g、陳皮64 g、甘草64 g、蒼術(shù)64 g、厚樸64 g;缺藥方A 組，缺姜黃、白芷;缺藥方B 組，缺姜黃、白芷、天南星、陳皮、厚樸。

甲醇、乙腈為色譜純，購(gòu)自天津市康科德科技有限公司，磷酸、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉為分析純。

1.3 儀器

TK-12B 型透皮擴(kuò)散試驗(yàn)儀(上海鍇凱科技貿(mào)易有限公司)，SSI PC2000 型高效液相色譜儀(美國(guó)科學(xué)系統(tǒng)公司)，EZChrom Elite Client/Server 色譜工作站。

1.4 色譜條件

色譜柱:Apollo C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流動(dòng)相:A 相為乙腈，B 相為0.1%磷酸水，二元梯度洗脫:0～5 分鐘，20～40A;5～20 分鐘，40～40A，流速1.0 ml/min，進(jìn)樣量為20 μl，檢測(cè)波長(zhǎng):346 nm，柱溫:30℃。該色譜條件下，理論板數(shù)按鹽酸小檗堿峰計(jì)算不低于150000。

1.5 對(duì)照品溶液

精密稱定鹽酸小檗堿，加入容量瓶，用乙腈配制成濃度為0.290 mg/ml 的溶液，作為儲(chǔ)備液。

1.6 供試液

由體外透皮試驗(yàn)所得接受液，加入梨形蒸餾瓶，分別于70℃水浴減壓濃縮至干，精密吸取1 ml乙腈溶解，0.45 μm 微孔濾膜，作為供試液。

1.7 滲透擴(kuò)散裝置及實(shí)驗(yàn)方法

將鼠皮從冰箱取出，放至室溫，在接收池中放入磁力攪拌子，將鼠皮固定于擴(kuò)散池與接收池之間，真皮面向接收池。試驗(yàn)時(shí)，將精密稱量的膏劑涂于處理好的鼠皮角質(zhì)層，注滿接收液(30%乙醇/磷酸鹽緩沖溶液，pH=6.8)，液面恰與皮膚真皮層接觸，排除氣泡。開(kāi)動(dòng)磁力攪拌器和恒溫水浴，磁力攪拌轉(zhuǎn)速設(shè)定為400 r/min，水浴溫度(37±0.5)℃，擴(kuò)散池容積6 ml，擴(kuò)散面積為2.92 cm2。于32 小時(shí)內(nèi)的3、5、7、9、24、32 小時(shí)分段取樣，補(bǔ)充相應(yīng)的空白接受液，根據(jù)濃度吸取不同體積注入色譜儀，按照上述色譜條件測(cè)定小檗堿含量，

1.8 主要指標(biāo)

將金黃散全方組、缺藥方A 組、缺藥方B 組藥膏分別作透皮吸收試驗(yàn)，所加藥膏量根據(jù)鹽酸小檗堿含量確定，保證其基本一致。按1.7 項(xiàng)下方法試驗(yàn)，按下式計(jì)算不同膏劑不同時(shí)間段鹽酸小檗堿的單位面積累積透過(guò)量Q。其中Q=(Mn+∑Mp)/A，式中Q 為t 時(shí)刻的累積透過(guò)量(μg/cm2)，Mn 為第n個(gè)取樣點(diǎn)測(cè)得的藥物透過(guò)量(μg)，∑Mp 為之前測(cè)得的藥物透過(guò)量之和(μg);A(2.92 cm2)為皮膚擴(kuò)散面積。每組平行做3 次，求Q 的平均值。

1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

用Excel 統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)，以經(jīng)皮累計(jì)滲透量Q 對(duì)時(shí)間t 進(jìn)行回歸得線性方程，根據(jù)方程求出穩(wěn)態(tài)透皮速率J(μg/cm2·h)和透皮時(shí)滯tlag(小時(shí))。

2 結(jié)果

三組膏劑不同時(shí)刻各自平行做3 次測(cè)量，檢測(cè)經(jīng)皮累計(jì)滲透量Q，求平均值，結(jié)果見(jiàn)表1。然后以經(jīng)皮累計(jì)滲透量Q 對(duì)t 進(jìn)行回歸得線性方程，根據(jù)方程求出穩(wěn)態(tài)透皮速率J(μg/cm2·h)和透皮時(shí)滯tlag(小時(shí))，見(jiàn)表2。

通過(guò)觀察三組膏劑的穩(wěn)態(tài)透皮速率J、透皮時(shí)滯tlag、32 小時(shí)內(nèi)鹽酸小檗堿累積透過(guò)量Q/32h，可以看出缺藥方A 組和缺藥方B 組的穩(wěn)態(tài)透皮速率、透皮時(shí)滯、32 小時(shí)內(nèi)小檗堿單位面積累積透過(guò)量及透過(guò)率都較全方高。金黃散全方組的穩(wěn)態(tài)透皮速率及32 小時(shí)內(nèi)鹽酸小檗堿累積透過(guò)量都低于缺姜黃、白芷的缺藥方A 組，說(shuō)明姜黃、白芷對(duì)小檗堿的皮膚滲透有抑制作用，缺藥方A 組和缺藥方B 組的穩(wěn)態(tài)透皮速率及32 小時(shí)內(nèi)鹽酸小檗堿累積透過(guò)量差別不大，有天南星、陳皮、厚樸的缺藥方A 組的透皮時(shí)滯低于缺藥方B 組，說(shuō)明天南星、陳皮、厚樸對(duì)小檗堿的皮膚滲透有一定促進(jìn)作用。

3 討論

金黃膏中的姜黃，辛、苦，溫，歸肝、脾經(jīng)，活血行氣，通經(jīng)止痛可用于治療氣滯血瘀痛癥和風(fēng)濕痹痛，其中姜黃素有抗炎作用，對(duì)細(xì)菌有抑制作用，為臣藥;白芷，辛，溫，歸肺、胃、大腸經(jīng)，解表散寒，祛風(fēng)止痛，通鼻竅，燥濕止帶，消腫排膿，可用于治療風(fēng)寒感冒，頭痛，牙痛，風(fēng)濕痹痛，鼻淵，帶下癥，瘡癰腫毒，皮膚風(fēng)濕瘙癢，為臣藥;天南星，苦、辛、溫。歸肺、肝、脾經(jīng)，燥濕化痰，祛風(fēng)解痙，外敷散結(jié)消腫止痛，用于治療濕痰，寒痰證，風(fēng)痰眩暈，中風(fēng)，癲癇，破傷風(fēng)，癰疽腫毒，蛇蟲咬傷;陳皮，辛、苦，溫。歸脾、肺經(jīng)，理氣健脾，燥濕化痰，用于治療脾胃氣滯證，嘔吐，呃逆，濕痰、寒痰咳嗽，胸痹;厚樸，苦、辛，溫。歸脾、胃、肺、大腸經(jīng)，燥濕消痰，下氣除滿，用于治療濕阻中焦，脘腹脹滿，食積氣滯，腹脹便秘，痰飲喘咳，此三藥皆辛苦溫，辛以散結(jié)，苦以燥濕，溫以通滯，共為佐藥［3］。

姜黃、白芷對(duì)小檗堿皮膚滲透的抑制作用實(shí)則說(shuō)明了此藥對(duì)對(duì)金黃膏發(fā)揮療效起到了促進(jìn)作用。陳實(shí)功的如意金黃散的組成用于陽(yáng)證、熱證瘡瘍，從組方看辛溫的藥反而味和量都大。中藥講究君臣佐使，使藥作為引經(jīng)藥，使藥效直達(dá)病所，所以分析辛溫的姜黃和白芷這一組藥為“如意金黃散”的透皮促滲之藥［4］。同時(shí)根據(jù)四氣五味理論，姜黃、白芷同為辛溫之品，具發(fā)散、行氣之功，可散邪于表，給邪出路。

對(duì)姜黃、白芷藥理作用的研究證明具有鎮(zhèn)痛、抗炎的作用［5-6］，透皮給藥而發(fā)揮作用。一般的透皮給藥系統(tǒng)，是指藥物以一定的速率透過(guò)皮膚，經(jīng)毛細(xì)血管吸收進(jìn)入全身血液循環(huán)達(dá)到有效濃度，產(chǎn)生療效，起到全身治療作用。還有一種情況，有些藥物與角質(zhì)層親和力大或能與角質(zhì)層發(fā)生特異結(jié)合，在皮膚內(nèi)積聚儲(chǔ)存，形成“儲(chǔ)庫(kù)效應(yīng)”，向皮膚深部擴(kuò)散的比較緩慢。其藥理作用在局部發(fā)揮的比較明顯，在全身的治療作用不明顯。金黃膏應(yīng)用于臨床多年，對(duì)于陽(yáng)證、熱證的治療效果顯著。如果小檗堿也有這種可能性，大部分積聚在皮膚，發(fā)揮抑菌消炎作用，一小部分透過(guò)皮膚向深部擴(kuò)散，對(duì)全身起到治療作用，恰好與金黃膏的適應(yīng)癥相吻合。因此，實(shí)驗(yàn)說(shuō)明姜黃、白芷對(duì)小檗堿的滲透有抑制作用，正是其“儲(chǔ)庫(kù)效應(yīng)”和散邪于表，給邪出路的體現(xiàn)。

表1 三種膏劑不同時(shí)刻鹽酸小檗堿單位面積累積透過(guò)量平均值(單位:μg/cm2)

表2 三種膏劑鹽酸小檗堿單位面積累積透過(guò)量與時(shí)間相關(guān)線性方程及參數(shù)(n=3)

天南星、陳皮、厚樸對(duì)小檗堿皮膚滲透的促進(jìn)作用，證實(shí)了此藥對(duì)在金黃膏配伍中，用苦寒之品佐以辛溫之藥以達(dá)到溫散走竄的促滲作用。合理的配伍，既能達(dá)到治病作用又能滲透入內(nèi)，從局部影響全身的作用，即整體就是其透皮系統(tǒng)。

［1］李建波，張莉，張潔.藥對(duì)配伍理論及相關(guān)研究概述［J］.中醫(yī)雜志，2013，54(15):1335-1340.

［2］國(guó)家藥典委員會(huì)編.中華人民共和國(guó)藥典(一部)［M］.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:720.

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