林紅華 江秀紅 黃瑜

（1.福建省農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢驗(yàn)檢測中心福州350003；2.福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所福州350013）

液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)在禽產(chǎn)品安全檢測中的應(yīng)用

陳瑞清1林紅華1江秀紅1程龍飛2黃瑜2

（1.福建省農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢驗(yàn)檢測中心福州350003；2.福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所福州350013）

概述高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)應(yīng)用于禽產(chǎn)品中磺胺類、氟喹諾酮類、硝基呋喃類代謝物和四環(huán)素類藥物殘留的檢測方法。

高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用禽產(chǎn)品藥物殘留

近年來，因獸藥殘留問題而引起食物中毒和影響畜禽產(chǎn)品出口的事件越來越多，獸藥殘留不僅直接對人體產(chǎn)生急慢性毒性作用，也引起耐藥性傳遞，間接危害人類健康，畜禽產(chǎn)品中的獸藥殘留對人的潛在危害愈來愈引起人們的重視。因此，將現(xiàn)代檢測技術(shù)引入禽產(chǎn)品安全監(jiān)測體系，對保證禽產(chǎn)品安全，維護(hù)人類身體健康具有重要意義。目前農(nóng)業(yè)部對禽產(chǎn)品的例行監(jiān)控檢測項(xiàng)目有磺胺類藥物、氟喹諾酮類藥物、硝基呋喃類代謝物和四環(huán)素類藥物等，常用檢測方法有微生物法、高效液相色譜法、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法等，由于獸藥殘留分析目標(biāo)物濃度低、樣品基質(zhì)復(fù)雜、干擾因素多等因素，而液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（HPLC-MS/MS）聯(lián)用技術(shù)由于具有高選擇性、高靈敏度、定量準(zhǔn)確性高等優(yōu)勢而愈來愈受到廣泛應(yīng)用。為此，筆者就近年來HPLC-MS/MS聯(lián)用技術(shù)在禽產(chǎn)品安全檢測方面的應(yīng)用進(jìn)行綜述。

1 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)概述

20世紀(jì)90年代以來，隨著液相色譜技術(shù)和質(zhì)譜技術(shù)的不斷發(fā)展，液相色譜與高選擇性、高靈敏度的串聯(lián)質(zhì)譜的聯(lián)用得到了極大的重視和發(fā)展，其主要原理是被測組分經(jīng)過液相分離后，進(jìn)入質(zhì)譜系統(tǒng)，在離子源將分析物由液態(tài)轉(zhuǎn)換為氣態(tài)帶電離子，即準(zhǔn)分子離子，經(jīng)一級質(zhì)量分析器（MS1）根據(jù)質(zhì)核比（m/z）進(jìn)行分離，得到的母離子進(jìn)入碰撞室進(jìn)行誘導(dǎo)解離，產(chǎn)生的特征碎片離子在二級質(zhì)量分析器（MS2）進(jìn)行分離，然后到達(dá)檢測器并記錄信息而實(shí)現(xiàn)對樣品進(jìn)行定性和定量的一種分析方法。通常用已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣，以標(biāo)準(zhǔn)溶液中被測組分峰面積為縱坐標(biāo)、被測組分濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，用單點(diǎn)或工作曲線即可實(shí)現(xiàn)對樣品中被測組分的準(zhǔn)確定量。

液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)通過選擇監(jiān)測MS1和MS2，可以有效降低本底噪音的干擾，在很大程度上提高了檢測靈敏度，且分析目標(biāo)化合物的范圍大，成為獸藥殘留檢測的優(yōu)選方法。目前抗生素、抗寄生蟲藥物、鎮(zhèn)靜劑、激素類、解熱鎮(zhèn)痛類等絕大多數(shù)種類的獸藥都可以采用HPLC-MS/MS法進(jìn)行定性、定量殘留檢測。

2 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)在禽產(chǎn)品安全檢測中的應(yīng)用概況

2.1 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)在磺胺類藥物檢測中的應(yīng)用磺胺類藥物（Sulfonamides，SAs）屬于人工合成的抗菌藥物，由于具有抗菌譜廣、抗菌活性強(qiáng)、口服吸收好、價格低廉等特點(diǎn)廣泛用于預(yù)防和治療動物和人類的多種感染性疾病。SAs都是以對氨基苯磺酰胺為基本結(jié)構(gòu)的衍生物，對位游離氨基為抗菌活性所必需的基團(tuán)，抗菌作用范圍廣，對許多革蘭氏陽性菌和一些革蘭氏陰性菌有抑制作用，甚至對衣原體屬和某些原蟲都有效，為廣譜抑菌劑。但廣泛和大量使用會導(dǎo)致其在動物性食品中的殘留，嚴(yán)重危害人類的健康，主要引起泌尿系統(tǒng)損傷，破壞人體的造血機(jī)能，具有致腫瘤傾向和變態(tài)反應(yīng)，為此農(nóng)業(yè)部為加強(qiáng)獸藥殘留監(jiān)控，于2002年在農(nóng)業(yè)部235號公告中規(guī)定其總殘留量為100μg/kg。

董丹等[1]以穩(wěn)定同位素13C6-磺胺二甲基嘧啶為內(nèi)標(biāo)，采用ESI+多反應(yīng)監(jiān)測法，成功建立雞肉中17種磺胺類藥物液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜殘留測定法；龐國芳等[2]應(yīng)用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，采用外標(biāo)法成功對禽組織中16種磺胺類藥物進(jìn)行定量分析測定；劉佳佳等[3]利用高效液相色譜-電噴霧串聯(lián)四極桿質(zhì)譜（HPLC-MS/MS）聯(lián)用技術(shù)，建立了一種在28 min內(nèi)快速分離和測定雞肉、豬肉、牛肉、羊肉、蜂蜜、牛乳中24種磺胺類藥物殘留的方法。我國于2006年頒布了相應(yīng)的國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 20759-2006《畜禽肉中十六種磺胺類藥物殘留量的測定高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》，農(nóng)業(yè)部也于2008年頒布了行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《農(nóng)業(yè)部1025號公告-23-2008動物源食品中磺胺類藥物殘留檢測液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》，現(xiàn)行農(nóng)業(yè)部推薦的磺胺類例行監(jiān)控檢測方法就是采用這個行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。

2.2 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)在氟喹諾酮類藥物檢測中的應(yīng)用氟喹諾酮類藥物（quinolones, QNs），又稱吡酮酸或吡啶酮酸類，是在喹諾酮環(huán)結(jié)構(gòu)的6位引入氟、7位引入哌嗪環(huán)而得到的一類衍生物，是一類較新的合成抗菌藥物，是繼磺胺類藥物之后人類在合成抗生素方面最重要的突破。自20世紀(jì)60年代美國Sterling-Winthrop研究所Lesher等發(fā)現(xiàn)第一個喹諾酮類抗菌藥萘啶酸以來，氟喹諾酮類藥物已廣泛應(yīng)用于臨床。氟喹諾酮類對G-桿菌包括綠膿桿菌均有良好抗菌作用，對G+球菌也具一定抗菌活性，臨床用于治療尿路、腸道、呼吸道以及皮膚軟組織、腹腔、骨關(guān)節(jié)等感染，取得良好療效，不良反應(yīng)輕微。目前常用的氟喹諾酮類藥物主要有恩諾沙星、環(huán)丙沙星、諾氟沙星、培氟沙星（Pefloxacin，甲氟哌酸）、依諾沙星（Enoxacin，氟啶酸）、氧氟沙星（Ofloxacin，氟嗪酸）。近幾年，又有多種氟化喹諾酮類新品種不斷被研制并上市。如洛美沙星、氟羅沙星和二氟沙星等。其主要特點(diǎn)是長效，抗菌譜進(jìn)一步擴(kuò)大，增強(qiáng)了對G+球菌和厭氧菌以及衣原體、支原體的抗菌作用，以及具有吸收更好、組織濃度更高、不良反應(yīng)更少等優(yōu)點(diǎn)。氟喹諾酮類藥物的作用機(jī)制為抑制細(xì)菌的DNA旋轉(zhuǎn)酶，從而影響DNA的正常形態(tài)與功能，阻礙DNA的正常復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)運(yùn)與重組，從而產(chǎn)生快速殺菌作用。目前QNs殘留最受關(guān)注的危害就是動物的耐藥菌株，特別是腸道細(xì)菌通過食物鏈向人類傳播，從而間接危害人類健康。

QNs在體內(nèi)分布廣泛，一般肝、腎組織濃度最高，肌肉、血漿中濃度最低。組織中QNs殘留物主要是原形藥物，故一般選擇原形藥物作標(biāo)示殘留。彭濤等[4]采用反相高效液相色譜-四級桿串聯(lián)質(zhì)譜（RP-HPLC-MS/MS）技術(shù)，電噴霧電離（ESI）、正離子多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）模式、外標(biāo)法定量同時成功測定了雞肉中的5種喹諾酮藥物殘留。目前仍無禽產(chǎn)品中氟喹諾酮類藥物殘留液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法的國家或農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，農(nóng)業(yè)部禽產(chǎn)品中氟喹諾酮類藥物殘留例行監(jiān)控檢測方法仍采用液相色譜法監(jiān)測。

2.3 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)在硝基呋喃類代謝物檢測中的應(yīng)用硝基呋喃類抗生素（Nitrofurans，NFs）主要指呋喃唑酮、呋喃西林、呋喃妥因和呋喃它酮等，曾被廣泛應(yīng)用于畜禽傳染病的預(yù)防和治療，是一類人工合成抗菌藥。其殘留代謝物有“三致”的潛在危害，歐盟1997年開始將其列為禁用藥物，我國于2002年也規(guī)定在動物食用組織中不得檢出，2006年日本肯定列表把它列為禁用藥。因該類藥物在體內(nèi)代謝快，無法檢測原型藥物，而其代謝產(chǎn)物可穩(wěn)定存在數(shù)月，因此，常以代謝物作為該類藥物殘留的標(biāo)示物，目前研究較多的NFs代謝物有呋喃唑酮代謝物AOZ，呋喃它酮代謝物AMOZ，呋喃西林代謝物SEM和呋喃妥因代謝物AHD。

林黎明等[5]采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)以內(nèi)標(biāo)法成功對4種硝基呋喃類代謝產(chǎn)物AOZ、AMOZ、SEM和AHD進(jìn)行定量測定并研究了硝基呋喃在雞飼養(yǎng)過程中的殘留規(guī)律。國家先后頒布了《GB/T 20752-2006豬肉、牛肉、雞肉、豬肝和水產(chǎn)品中硝基呋喃類代謝物殘留量的測定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》和《GB/T 21311-2007動物源性食品中硝基呋喃類藥物代謝物殘留量檢測方法高效液相色譜/串聯(lián)質(zhì)譜法》兩個國家標(biāo)準(zhǔn)，農(nóng)業(yè)部于2006年頒布了行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《農(nóng)業(yè)部781號公告-4-2006動物源食品中硝基呋喃類代謝物殘留量的測定高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》并推薦用于禽產(chǎn)品中硝基呋喃類代謝物殘留量的例行監(jiān)測。

2.4 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)在四環(huán)素類藥物檢測中的應(yīng)用四環(huán)素類藥物是由放線菌產(chǎn)生的一類抗生素，基本框架為并四苯，由四個環(huán)構(gòu)成，因此而得名，包括天然的四環(huán)素（Tetracycline，TC）、土霉素（Oxytetracycline，OTC）、金霉素（Chlortetracycline，CTC）以及半合成的強(qiáng)力霉素、去甲金霉素等，屬于廣譜抗生素，對G+和G-菌以及衣原體、霉形體、立克次氏體等都有抑殺作用，在畜禽生產(chǎn)中被廣泛用作藥物添加劑用于促進(jìn)動物生長、防治腸道感染等，但易引起局部刺激、二重感染、過敏反應(yīng)、交叉耐藥性以及對肝臟損害等，從而給人們身體健康帶來隱患。我國農(nóng)牧發(fā)[2002]235號文《動物性食品中獸藥最高殘留限量》中對不同組織中的四環(huán)素類藥物最大殘留量作了相應(yīng)的規(guī)定。

劉艷華等[6]采用外標(biāo)法成功建立了一種專屬、靈敏的可同時測定雞肉中土霉素、四環(huán)素和金霉素殘留的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用檢測方法；郭黎明等[7]采用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜在正離子模式下通過多反應(yīng)監(jiān)測方式同時測定了雞肝臟組織中3種四環(huán)素類藥物、10種磺胺類藥物和8種喹諾酮類藥物的殘留，該方法21種藥物的檢出限均為2μg/kg，定量限均為5μg/kg，方法回收率在66.8%～128.5%。農(nóng)業(yè)部于2008年頒布了行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《農(nóng)業(yè)部1025號公告-12-2008雞肉、豬肉中四環(huán)素類藥物殘留檢測液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》，并推薦用于雞肉組織中四環(huán)素類藥物的殘留監(jiān)測。

3 結(jié)語

液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)結(jié)合了色譜的高分離性能和質(zhì)譜的高選擇性、高靈敏度、極強(qiáng)的專屬性等優(yōu)點(diǎn)，可同時準(zhǔn)確測定多種組分，可實(shí)現(xiàn)禽產(chǎn)品多殘留痕量檢測；同時，隨著人們對禽產(chǎn)品安全的不斷關(guān)注與重視，我國也將重新修訂現(xiàn)已滯后的禽產(chǎn)品獸藥殘留限量標(biāo)準(zhǔn)?？梢灶A(yù)見，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)將是禽產(chǎn)品安全檢測的最主要分析手段，未來的串聯(lián)質(zhì)譜儀將更快、更靈敏、更準(zhǔn)確，在禽產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)管中更能發(fā)揮積極的保駕護(hù)航作用。

[1]董丹,邵兵,吳永寧,等.液相色譜-電噴霧串聯(lián)四極桿質(zhì)譜法測定雞肉中17種磺胺類藥物的殘留[J].色譜,2005,23 (4):404-407.

[2]龐國芳,曹彥忠,張進(jìn)杰,等.液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜同時測定家禽組織中16種磺胺殘留[J].分析化學(xué),2005,33(9):1252-1256.

[3]劉佳佳,佘永新,劉洪斌,等.高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時測定動物源性食品中24種磺胺類藥物殘留[J].分析試驗(yàn)室,2011,30(2):9-13.

[4]彭濤,雍煒,安娟,等.反相高效液相色譜/質(zhì)譜法同時測定雞肉中5種喹諾酮藥物殘留[J].分析化學(xué),2006,34(特刊): 10-14.

[5]林黎明,林回春,劉心同,等.固相萃取高效液相色譜-質(zhì)譜法測定動物組織中硝基呋喃代謝產(chǎn)物[J].分析化學(xué), 2005,33(5):707-710.

[6]劉艷華,張純萍,門立強(qiáng),等.液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定雞肌肉組織中的四環(huán)素類藥物殘留[J].色譜,2006,24(2):171-173.

[7]郭黎明,朱奎,江海洋,等.超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜同時測定雞肝中殘留的四環(huán)素類、磺胺類和喹諾酮類藥物[J].色譜,2009,27(4):412-416.

The applications of HPLC-MS/MS in the safety testing of poultry products

Chen Ruiqing1Lin Honghua1Jiang Xiuhong1Cheng Longfei2Huang Yu2
（1.Fujian inspection and testing centre for agricultural product quality and safety,Fuzhou 350003; 2.Animal husbandry and veterinary research institute,Fujian academy of agricultural sciences,Fuzhou 350013）

The determination methods based on performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry（HPLC-MS/MS）have been summarized for the analysis of drugs residue about sulfa fluoroquinolone nitrofurans metabolites and tetracycline in the poultry products.

HPLC-MS/MS poultry products drug residue

A

1003-4331（2014）04-0024-03

福建省農(nóng)業(yè)五新工程項(xiàng)目[閩發(fā)改投資（2012）931號]資助。