趙 輝， 武曉紅， 蒲曉輝

（河南大學(xué)藥學(xué)院， 河南 開封 475004）

HPLC法同時測定天舒膠囊中阿魏酸和天麻素

趙 輝， 武曉紅， 蒲曉輝*

（河南大學(xué)藥學(xué)院， 河南 開封 475004）

目的 建立用高效液相色譜同時測定天舒膠囊中阿魏酸和天麻素的方法。 方法 采用 Thermo C18色譜柱 （250 mm×4.6 mm， 5 μm）； 流動相為甲醇-1%冰醋酸， 梯度洗脫； 體積流量為 1.0 mL/min； 檢測波長為 270 nm； 柱溫為30 ℃。 結(jié)果 天麻素、 阿魏酸分別在 10.125 ～162.0 μg/mL（r=0.999 7）、 5.375 ～86.0 μg/mL（r=0.999 8）范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。 平均回收率分別為 98.58%、 99.01% （n=9）， RSD分別為 1.75%、 1.90%。 結(jié)論 該方法簡便，穩(wěn)定準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可用于天舒膠囊的質(zhì)量控制。

高效液相色譜法；天舒膠囊；天麻素；阿魏酸

天舒膠囊由川芎、天麻兩味中藥組成，具有活血平肝， 通絡(luò)止痛之功效［1］。 多用于血管神經(jīng)性頭痛即偏頭痛［2-7］，對急 性缺血性腦 血管病 也有較好的防治作用［8］。 川芎主要成分為阿魏酸，有抗血小板凝集、抗血栓、抗菌、消炎、抗腫瘤、抗突變、增加免疫力、清除亞硝酸鹽、氧自由基、過氧化亞硝基等功能并具有增強人體精子活力和運動性等藥理作用［9-10］。 天麻素作為天麻的主要活性成分之一，不僅可以治療眩暈、頭痛，也可作為高血壓的輔助治療［11］， 在防治中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病等方面也發(fā)揮著 重 要 作用［12-14］。 因 此 本實 驗 以 阿魏 酸 和天麻素作為指標(biāo)成分，用高效液相色譜法進行測定，該方法簡便，穩(wěn)定準(zhǔn)確，重復(fù)性好。

1 儀器與材料

1.1 儀器 Waters高效液相色譜儀， UV1600 紫外分光光度儀 （北京瑞利分析儀器公司），pHS23C型精密 pH計 （上海雷磁儀器廠） ， SB2200 型超聲儀 （上海超聲儀器廠）。

1.2 試劑與試藥 甲醇 （色譜純）； 阿魏酸對照品 （中國藥品生物制品檢定所，批號 0773-9910），天麻素對照品 （中國藥品生物制品檢定所，110807-200205）； 娃哈哈純凈水； 磷酸 （分析純）；天舒膠囊 （批號 100901、 100902、100903） 每粒0.34g，江蘇康緣藥業(yè)生產(chǎn)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 Thermo C18色譜柱 （250 mm×4.6 mm，5 μm）； 以甲醇 （A） -1%冰醋酸溶液 （B）為流動相，梯度洗脫 ［0 ～10 min （13%A）， 10 ～15 min （13% ～40%A）， 15 ～35 min （40% ～70% A）， 35 ～40 min （ 70% ～13%A）， 40 ～43 min（13%A）］； 檢測波長為 270 nm；柱溫為 30 ℃；體積流量為 1.0 mL/min。 理論塔板數(shù)按天麻素和阿魏酸計算均不低于 2 500。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液 精密稱取天麻素與阿魏酸對照品適量，加 70%甲醇，制成每 1 mL含天麻素與阿魏酸分別為 81.0 μg和 43.0 μg的混合對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液 精密稱取天舒膠囊內(nèi)容物約0.5 g， 加 70%甲醇 50 mL， 精密稱定。 超聲提取30 min， 放冷， 用 70%甲醇補足質(zhì)量， 離心， 用微孔濾膜 （0.22 μm） 過濾， 即得。

2.2.3 陰性對照液的制備 取不加天麻、川芎藥材的供試品， 按 “2.2.2” 項下方法制備陰性對照溶液。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗 取上述對照品溶液、 供試品溶液、陰性對照品溶液， 按 “2.1”項下色譜條件進行分析， 記錄色譜圖， 見圖1。 理論塔板數(shù)按天麻素和阿魏酸計算均不低于2 500， 峰分離良好，陰性對照無干擾。

圖1 HPLC譜圖Fig.1 HPLC chromatograms

2.4 線性關(guān)系考察 分別精密量取天麻素、 阿魏酸混合對照品溶液用 70%甲醇稀釋至含天麻素10.125、20.25、 40.5、81.0、 162.0 μg/mL， 阿魏酸 5.375、 10.75、 21.5、 43.0、 86.0 μg/mL的系列混合對照品溶液，注入高效液相色譜儀進行測定，記錄峰面積。以峰面積為縱坐標(biāo)，對照品質(zhì)量濃度 （μg/mL） 為橫坐標(biāo)進行線性回歸。 天麻素和阿魏酸的回歸方程分別為 Y=3 378.1X-14 796，r=0.999 7； Y=40 694X+25 749， r=0.999 8。 結(jié)果表明天麻素在 10.125 ～162.0 μg/mL、 阿魏酸在 5.375 ～86.0 μg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗 取混合對照品 （天麻素 40.5 μg/mL， 阿魏酸 21.5 μg/m L）， 重復(fù)進樣 6 次， 按“2.1”項下色譜條件測定， 結(jié)果天麻素和阿魏酸峰面積的 RSD分別為 0.73%、 0.67%。

2.6 穩(wěn)定性試驗 取樣品適量 （批號 100901），按 “2.2.2” 項下的方法制備供試品溶液， 分別在0、 2、 4、 6、 8、12 h 進行測定， 結(jié)果天麻素、 阿魏酸峰面積的 RSD分別為 1.16%， 1.35%， 表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 加樣回收率試驗 取已知含有量的樣品 （批號 100901）， 精密稱定， 精密加入 2 m L高中低不同質(zhì)量濃度的混合對照品各 3 份， 按 “2.2.2” 項下供試品溶液制備方法制備 9 份樣品， 按 “2.1”項下色譜條件測定， 計算回收率， 結(jié)果見表1。

表 1 加樣回收率試驗結(jié)果 （n=9）Tab.1 Results of recovery tests（n=9）

2.8 樣品測定 取樣品適量， 精密稱定， 按“2.2.2” 項下方法制備供試品溶液， 按 “2.1” 項下色譜條件進行測定，記錄色譜圖，計算天麻素、阿魏酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)， 結(jié)果見表2。

表2 樣品測定結(jié)果 （n=3）Tab.2 Determ ination results of sam Ples（ n=3）

3 討論

《中國藥典》 2010 年版中收載的天舒膠囊其指標(biāo)性成分天麻素和阿魏酸是分別測定的，其中流動相體系不同，溶液的配制方法不同，比較繁瑣。本實驗設(shè)計了梯度洗脫同時測定兩個指標(biāo)性成分的量，操作簡單，結(jié)果可靠，分析速度快。

3.1 檢測波長的選擇 分別對天麻素和阿魏酸對照品溶液在 190 ～400 nm波長內(nèi)進行掃描，結(jié)果天麻素在 270 nm處有最大吸收、 阿魏酸在 322 nm處有最大吸收并且在 270 nm處有較大吸收。通過對兩波長下的高效液相色譜圖比較， 發(fā)現(xiàn)在 270 nm處天麻素和阿魏酸色譜峰分離良好，且靈敏度較高， 故選擇270 nm作為檢測波長。

3.2 流動相的選擇 由于天麻素和阿魏酸兩種成分極性差異較大，因此采用梯度洗脫并考察了不同的 流 動 相［15-19］： 甲 醇-磷 酸 鹽 緩 沖 溶 液、 甲 醇-0.01%磷酸溶液、 乙腈-0.05% 磷酸溶 液、 甲 醇-1%冰醋酸溶液。 結(jié)果表明采用甲醇-1%冰醋酸系統(tǒng)為流動相時，天麻素和阿魏酸峰峰形較好，且保留時間適中，無干擾峰， 故本實驗采用甲醇-1%冰醋酸溶液作為流動相。

3.3 樣品提取方法的選擇與優(yōu)化 考察了多種提取方法，如超聲提取、回流提取、索氏提取。結(jié)果表明，超聲提取操作簡單，提取時間短，提取率高。又分別對提取溶劑［15，18，20-21］（ 純甲醇、 80%甲醇、 70% 甲 醇、50% 甲 醇、 75% 乙 醇、 50% 乙醇）、 提 取 時 間 （ 20 min、 30 min、 40 min、 50 min、 60 min） 進行了篩選。 結(jié)果表明， 采用 70%甲醇超聲提取 30 min 為最佳提取條件， 提取完全，提取率高。

［ 1 ］ 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典： 2010 年版一部［S］.北京： 中國醫(yī)藥科技出版社， 2010.

［2］ 范秀鳳，郭 澄.天舒膠囊治療偏頭痛的作用機制與臨床應(yīng)用［J］.中國藥師， 2011， 14（10）： 1529-1531.

［ 3 ］ 馬春林.天舒膠囊治療瘀血型頭痛療效觀察［J］.廣西中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報， 2012， 15（4）： 23-24.

［4］ 孫曉江， 趙玉武， 沈 潔， 等.天舒膠囊治療偏頭痛的療效觀察［J］.臨床神經(jīng)病學(xué)雜志， 2009， 22（5）： 367.

［5］ 謝 靜， 波 勝， 婁季宇.天舒膠囊治療偏頭痛50 例療效分析［J］.中國實用神經(jīng)疾病雜志， 2012， 15 （23）：64-65.

［6］ 宋 丹，朱蘊秋， 閆 豐， 等.天舒膠囊治療血液透析頭痛 23 例分析 ［ J］.實用臨床 醫(yī)藥雜志， 2010， 14 （19）：52-53.

［7］ 邱昭安.天舒膠囊治療單硝酸異山梨酯致頭痛冠心病患者82 例 效 果 分 析 ［ J］.中 國 民 族 民 間 醫(yī) 藥， 2009， 18（6）： 37.

［8］ 毛倫林，毛曉薇， 顧幀茂， 等.天舒膠囊對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的保護作用［J］.中國實驗方劑學(xué)雜志，2012， 18（15）： 144-149.

［9］ 王 振，劉新泳，王 靜，等.川芎嗪阿魏酸類化合物藥理作用 的研究 進 展 ［ J］.齊 魯 藥 事， 2011， 30 （11 ）：665-667.

［10］ 袁 卓， 張軍平， 楊 萃.阿魏酸對血管內(nèi)皮細胞生長因子誘導(dǎo)的血管平滑肌細胞遷移的影響［J］.中國中西醫(yī)結(jié)合雜志， 2012， 32（2）： 229-233.

［11］ 張奮國.天麻素治療眩暈癥及偏頭痛療效觀察［J］.中醫(yī)中藥， 2012， 10（7）： 248-249.

［12］ 梁紅冬.阿魏酸的合成及抗氧化性能的研究［J］.化學(xué)與生物工程， 2012， 29（1）： 60-62.

［13］ 吳思鳳.淺談天麻素藥理作用及臨床應(yīng)用分析［J］.中醫(yī)臨床研究， 2011， 3（22）： 93.

［14］ 龔其海， 石京山， 楊丹莉， 等.天麻素在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的藥理作用及其機制［J］.中國新藥與臨床雜志， 2011， 30（3）： 176-179.

［15］ 劉玉紅， 易進海， 陳 燕， 等.RP-HPLC法同時測定天麻中游離天麻素、 巴利森苷和總天麻素［J］.中成藥， 2012，34（1）： 182-184.

［16］ 黃 嬌， 姜登軍.反相 HPLC法測定重慶不同產(chǎn)地野生天麻和栽培天麻的天麻素含量［J］.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2012，40（9）： 5196-5198.

［17］ 劉玉紅， 易進海， 陳 燕， 等.RP-HPLC法測定天麻藥材中游離天麻素和總天麻素的含量［J］.藥物分析雜志，2010， 30（1）： 30-32.

［18］ 黃 敏， 冉懋雄， 徐文芬， 等.HPLC測定川天康膠囊中阿魏酸和天麻素的含量［ J］.中成藥， 2000， 22 （8）：543-546.

［19］ 魏元鋒， 張 寧， 馮 怡.HPLC-DAD法同時測定大川芎復(fù)方釋藥系統(tǒng)中阿魏酸與天麻素的含量［J］.中國中醫(yī)藥信息雜志， 2009， 16（7）： 46-48.

［20］ 張冠東 郝旭亮 李青山.高效液相色譜法測定羅丹調(diào)脂膠囊中天麻素的含量［J］.中國藥物與臨床， 2012， 12（4）：454-455.

［21］ 馬宏達， 李 陽， 趙慶春， 等.高效液相色譜法測定天寧顆粒 中 阿 魏 酸 含 量 ［ J］.醫(yī) 藥 導(dǎo) 報， 2012， 31 （7 ）：918-920.

Determ ination of gastrodin and ferulic acid in Tianshu CaPsules by HPLC

ZHAO Hui， WU Xiao-hong， PU Xiao-hui*
（College of Pharmacy， Henan University， Kaifeng 475004， China）

HPLC； Tianshu Capsules； gastrodin； ferulic acid

R927.2

： A

： 1001-1528（2014）01-0111-04

10.3969/j.issn.1001-1528.2014.01.027

2013-02-26

趙 輝 （1978—） ， 女， 碩士生， 主要從事藥物新劑型及質(zhì)量分析研究。 Tel： （0371） 23880680， E-mail： tzz1113@163.com

*通信作者： 蒲曉輝 （1980—）， 男， 博士， 碩士生導(dǎo)師。