劉曉哲

（河南省南陽(yáng)市藥品檢驗(yàn)所， 河南 南陽(yáng) 473059）

多波長(zhǎng) RP-HPLC法同時(shí)測(cè)定肥兒丸中木香烴內(nèi)酯、 去氫木香內(nèi)酯、 去氫二異丁香酚

劉曉哲

（河南省南陽(yáng)市藥品檢驗(yàn)所， 河南 南陽(yáng) 473059）

目的 建立同時(shí)測(cè)定肥兒丸 （煨肉豆蔻、木香等） 中木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯、去氫二異丁香酚的方法。方法 采用 HPLC法， C18色譜柱； 以乙腈-水 （70 ∶30） 為流動(dòng)相； 體積流量 1.0 mL/min； 檢測(cè)波長(zhǎng) 225 nm （ 木香烴內(nèi)酯、 去氫木香內(nèi)酯）， 274 nm （去氫二異丁香酚）。 結(jié)果 根據(jù)回歸方程， 3 種成分線性范圍分別為木香烴內(nèi)酯10.834 ～216.68 μg/mL， r2=0.999 6； 去氫木香內(nèi)酯 9.506 ～190.12 μg/mL， r2=0.999 4； 去氫二異丁香酚 5.782 ～115.64 μg/mL， r2=0.998 9。 平均回收率分別為木香烴內(nèi)酯 98.4%， RSD為 0.66% （n=6）； 去氫木香內(nèi)酯 99.1%，RSD為 1.16% （n=6）； 去氫二異丁香酚 98.1%， RSD為 1.25% （n=6）。 結(jié)論 該方法經(jīng)濟(jì)適用， 操作簡(jiǎn)便、 準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可用于肥兒丸的質(zhì)量控制。

高效液相色譜；肥兒丸；木香烴內(nèi)酯；去氫木香內(nèi)酯；去氫二異丁香酚

肥兒丸收載于 《中國(guó)藥典》 2010 年版一部［1］，由煨肉豆蔻、 木香、六神曲 （炒）、 炒麥芽、 胡黃連、檳榔、使君子仁共七味藥組成，處方來(lái)源于《太平惠民和劑局方》 卷十，具有健胃消積、驅(qū)蟲(chóng)的功效。臨床上用于小兒消化不良，蟲(chóng)積腹痛，面黃肌瘦，食少腹脹泄瀉諸癥。方中肉豆蔻具有溫中行氣，澀腸止瀉的功能；木香具有行氣止痛，健脾消食的功效。 目前該制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)［1］只有幾味藥的顯微及薄層鑒別，尚無(wú)對(duì)藥味進(jìn)行定量的方法。有報(bào)道，用高效液相色譜法測(cè)定肥兒丸中肉桂酸［2］， 但同時(shí)測(cè)定肥兒丸中木香烴內(nèi)酯、 去氫木香內(nèi)酯、去氫二異丁香酚尚未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)以去氫二異丁 香酚［3-9］、 木香烴 內(nèi)酯、 去氫木香內(nèi)酯［10-15］為指標(biāo)成分， 采 用多波 長(zhǎng) RP-HPLC法同時(shí)測(cè)定，該方法操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，為肥兒丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提升提供了依據(jù)。

1 儀器與試藥

Agilent1200 液相色譜儀， 配有 1200 系統(tǒng) （ 四元泵、自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱、可變波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器） ， Agilent色 譜 化 學(xué) 工 作 站； Sartorious BP211D電子天平；WT-1200 超聲波清洗器 （濟(jì)寧萬(wàn)通超聲儀器設(shè)備廠）。

去氫二異丁香酚 （ 批號(hào) 111838-201102）、 木香烴內(nèi)酯 （批號(hào) 111524-201107）、去氫木香內(nèi)酯（批號(hào) 111525-201008） 對(duì)照品均購(gòu)自于中國(guó)食品藥品檢定研究院。

肥兒丸 （北京同仁堂股份有限公司同仁堂制藥廠，批 號(hào) 0013317、 1013040、1013255）；方中七味藥材為市售并經(jīng)本所中藥室鑒定。

乙腈為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 乙腈-水 （70 ∶30） 為流動(dòng)相， 采用等度洗脫； Welchrom C18色譜柱 （4.6 mm×250 mm， 5 μm）； 柱溫為室溫； 體積流量 1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為 225 nm （0 ～12.5 min） （木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯）， 274 nm （12.5 ～50 min） （去氫二異丁香酚）；進(jìn)樣量10 μL。色譜圖見(jiàn)圖 1。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 分別精密稱取減壓干燥至恒重的木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯、去氫二異丁香酚對(duì)照品適量， 置同一量瓶中， 加 70%乙腈配制成質(zhì)量濃度分別為 0.541 7、0.475 3、 0.289 1 mg/mL的混合對(duì)照品貯備溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 取肥兒丸樣品，剪碎，混勻， 取約1 g， 精密稱定， 置具塞錐形瓶中， 精密加70%的乙腈25mL， 密塞， 稱定質(zhì)量，浸泡過(guò)夜， 超聲提取 30 min， 放冷至室溫， 再稱定質(zhì)量，用 70%的乙腈溶液補(bǔ)足減失的質(zhì)量， 搖勻，用0.45 μm微孔濾膜濾過(guò)， 取續(xù)濾液， 作為樣品溶液。

2.3 陰性樣品溶液的制備 分別取不加煨肉豆蔻、木香的空白樣品按照供試品溶液項(xiàng)下的制備方法，制成陰性對(duì)照品溶液，即得。

2.4 線性關(guān)系考察 精密量取木香烴內(nèi)酯、 去氫木香內(nèi)酯、 去氫二異丁香酚對(duì)照品貯備液 1、 2、5、10、20 mL置 50 mL量瓶中， 用 70%乙腈稀釋至刻度， 制成標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。 按照 “2.1” 項(xiàng)色譜條件測(cè)定， 分別進(jìn)樣5 μL， 測(cè)得峰面積的積分值。以對(duì)照品質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果：木香烴內(nèi)酯回歸方程為A=12.495C-18.258， 相關(guān)系數(shù) r2=0.999 6， 進(jìn)樣量在 10.834 ～216.68 μg/mL范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好線性； 去 氫 木 香 內(nèi) 酯 回 歸 方 程 為 A=21.12C-30.361， 相關(guān)系數(shù) r2=0.999 4， 進(jìn)樣量在 9.506 ～190.12 μg/mL范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好線性； 去氫二異丁香酚回歸方程為 A=93.274C+61.402， 相關(guān)系數(shù)r2=0.998 9， 進(jìn)樣量在 5.782 ～115.64 μg/mL范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好線性。

圖1 對(duì)照品 （A）、 供試品 （B）、 缺煨肉豆蔻陰性供試品 （C）、 缺木香陰性供試品 （D） HPLC色譜圖Fig.1 HPLC chromatogram s of reference substances（ A） 、 sam Ple（ B） 、 negative sam Ple w ithou t roasted M yristicae Semen（ C） and negative samPle without Aucklandiae Radix （ D）

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一肥兒丸供試品溶液 （批號(hào) 0013317）， 按照 “2.1” 項(xiàng)下色譜條件， 分別于0、 2、 4、 6、 8 h 進(jìn)樣， 測(cè)定峰面積值， 計(jì)算得木香烴內(nèi)酯 RSD為 0.91%、去氫木香內(nèi)酯 RSD為0.83%、 去氫二異丁香酚 RSD為 1.37%， 證明該溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.6 精密度試驗(yàn) 取同一肥兒丸供試品溶液 （批號(hào) 0013317），按照 “2.1” 項(xiàng)下色譜條件， 連續(xù)進(jìn)樣 6 次， 進(jìn)樣量 10 μL， 測(cè)定峰面積， 計(jì)算得木香烴內(nèi) 酯 RSD為 0.86%、 去 氫 木 香 內(nèi) 酯 RSD為0.62%、 去氫二異丁香酚為 0.99%， 表明該方法精密度良好。

2.7 重 復(fù) 性 試 驗(yàn) 取 同 一 批 肥 兒 丸 （ 批 號(hào)0013317） 6 份， 按照供試品溶液制備項(xiàng)下方法平行制備6 份供試品溶液， 按照 “2.1” 項(xiàng)下色譜條件測(cè)定， 進(jìn)樣量 10 μL， 將測(cè)得的木香烴內(nèi)酯、 去氫木香內(nèi)酯、去氫二異丁香酚的峰面積分別代入“2.4” 項(xiàng)下的回歸方程計(jì)算。 結(jié)果含木香烴內(nèi)酯平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 0.393 mg/g， RSD為 0.81%； 去氫木香內(nèi)酯平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 0.285 mg/g，RSD為0.94%； 去氫二異丁香酚平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 0.199 mg/g， RSD為 1.17%。 表明該 方法有 較 好的重復(fù)性。

2.8 加樣回收試驗(yàn) 稱取已知含有量的肥兒丸（批號(hào) 0013317） 6 份， 精密稱取 0.5 g（約相當(dāng)于木香烴 內(nèi) 酯 0.196 mg/g； 去 氫 木 香 內(nèi) 酯 0.143 mg/g； 去氫二異丁香酚 0.099 mg/g）， 分別置 25 mL量瓶中，精密加入對(duì)照品溶液 （木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯、去氫二異丁香酚的質(zhì)量濃度分別為0.054 17、 0.047 53、 0.028 91 mg/mL） 3 mL， 加入 70%乙腈 20 mL， 放置過(guò)夜， 超聲提取 30 min，放冷至室溫， 用 70%乙腈稀釋至刻度， 搖勻， 用0.45 μm微孔濾膜濾過(guò)， 作為樣品溶液。 按照“2.1” 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定， 將測(cè)得的木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯、去氫二異丁香酚的峰面積分別代入 “2.4”項(xiàng)下的回歸方程計(jì)算。 結(jié)果見(jiàn)表1～3。

2.9 樣品測(cè)定 取肥兒丸 3 批， 按 “2.2.2” 項(xiàng)下的制備方法制備樣品溶液，按照 “2.1” 項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，將測(cè)得的木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯、 去氫二異丁香酚的峰面積分別代入 “2.4” 項(xiàng)下的回歸方程計(jì)算，結(jié)果見(jiàn)表4。

表1 木香烴內(nèi)酯的加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果Tab.1 Results of recovery tests for costunolide

表2 去氫木香內(nèi)酯的加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果Tab.2 Results of recovery tests for dehydrocostus lactone

表3 去氫二異丁香酚的加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果Tab.3 Resu lts of recovery tests for dehydrodiisoeugenol

表 4 肥兒丸中有效成分的測(cè)定結(jié)果 （n=3）Tab.4 Determ ination of active com Ponents in Feier Pills（n=3）

3 討論

3.1 提取方法的選擇 使用乙醇、 甲醇、 乙腈、70%乙腈冷浸過(guò)夜后超聲提取 30 min、 60min 幾種方法進(jìn)行提取比較，結(jié)果顯示 70%乙腈冷浸過(guò)夜的方法有利于樣品很好溶散，目標(biāo)成分有效溶出，故選擇 70%乙腈冷浸過(guò)夜后超聲 30 min 提取。

3.2 流動(dòng)相的選擇 分別采用乙腈-水 （70 ∶30）、乙腈-0.3%磷酸溶液 （70 ∶30） 及甲醇-水 （70 ∶30） 為流動(dòng)相， 結(jié)果分離效果均良好。 因乙腈-水（70 ∶30） 簡(jiǎn)便易行，故選乙腈-水為流動(dòng)相。

3.3 吸收波長(zhǎng)的選擇 用紫外分光光度計(jì)分別對(duì)對(duì)照品溶液進(jìn)行 200 ～300 nm波長(zhǎng)范圍的掃描， 木香烴內(nèi)酯、 去氫木香內(nèi)酯在 225 nm處有最大吸收；去氫二異丁香酚在 274 nm波長(zhǎng)處有最大吸收。為了使被檢測(cè)成分更好地檢出， 利用 Agilent 1200 紫外檢測(cè)器可變波長(zhǎng)功能， 選擇 225 nm作為木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯的檢測(cè)波長(zhǎng)， 274 nm作為去氫二異丁香酚的檢測(cè)波長(zhǎng)。

3.4 對(duì)待側(cè)成分干擾的考察 取不加煨肉豆蔻、木香的空白樣品按照供試品溶液項(xiàng)下的方法，制成溶液，按 “2.1” 項(xiàng)下色譜條件測(cè)定， 均不干擾木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯、去氫二異丁香酚的測(cè)定；取煨肉豆蔻、木香的藥材按照供試品溶液項(xiàng)下的方法，分別制成木香樣品溶液和煨肉豆蔻樣品溶液， 按 “2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定， 木香樣品溶液除木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯未檢出其他色譜峰，煨肉豆蔻樣品溶液除去氫二異丁香酚，其他色譜峰均與木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯、去氫二異丁香酚分離良好，不干擾目標(biāo)成分的測(cè)定。

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Sim ultaneous determ ination of costunolide， dehydrocostus lactone， dehydrodiisoeugenol in Feier Pills by m ultiwavelength RP-HPLC

LIU Xiao-zhe
（Nanyang Institute for Drug Control， Nanyang 473059， China）

AIM To establish a method for simultaneously determining the levels of costunolide， dehydrocostus lactone， and dehydrodiisoeugenol in Feier Pills（ Myristicae Semen， Aucklandiae Radix， etc.） .METHODS The quantitative analysiswas carried outon a column of Kromasil C18by HPLC， by using amobile phase of acetonitrile-water under a flow rate of1.0 mL/min.225 nm for costunolide and dehydrocostus lactone， 274 nm for dehydrodiisoeugenol as the detection wavelength.RESULTS The linear ranges of costunolide， dehydrocostus lactone， and dehydrodiisoeugenol fell within the ranges of 10.834-216.68 μg/m L， 9.506-190.12 μg/mL，5.782-115.64 μg/mL， respectively.The three components showed good linear correlations（r2= 0.999 6， 0.999 4， 0.998 9）.The recoverieswere98.4%for costunolide， 99.1%for dehydrocostus lactone，98.1%for dehydrodiisoeugenol， respectively.The relative standard deviations were 0.66%， 1.16%， and 1.25%， respectively.CONCLUSION The method is simple， economical， accurate， reproducible and convenient for the quality control over Feier Pills.

HPLC； Feier Pills；costunolide； dehydrocostus lactone； dehydrodiisoeugenol

R927.2

： A

： 1001-1528（2014）01-0098-04

10.3969/j.issn.1001-1528.2014.01.024

2013-01-07

劉曉哲 （1966—）， 女， 副主任藥師， 研究方向： 藥品檢驗(yàn)。 Tel： 13683779534