崔金鑫 田志高

（張家港出入境檢驗(yàn)檢疫局，江蘇張家港 215600）

犬瘟熱病毒檢測(cè)技術(shù)淺述

崔金鑫 田志高

（張家港出入境檢驗(yàn)檢疫局，江蘇張家港 215600）

犬瘟熱（CD）由犬瘟熱病毒（CDV）感染引起，是臨床上犬科等多種動(dòng)物的常見疾病之一，傳染性強(qiáng)，致死率高，發(fā)病急，危害較大。目前國(guó)內(nèi)外已有多種有效的檢測(cè)方法，主要分為病原學(xué)、血清學(xué)和分子生物學(xué)三類。本文對(duì)犬瘟熱病毒的檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行了綜述。

犬瘟熱病毒；檢測(cè)；技術(shù)

犬瘟熱臨床癥狀主要有典型的雙相熱、呼吸道和消化道卡他性炎癥以及神經(jīng)癥狀等[1]，對(duì)養(yǎng)殖業(yè)、寵物業(yè)和野生動(dòng)物保護(hù)業(yè)的危害有目共睹，有效的檢測(cè)手段是防控該病的一個(gè)必要條件。本文對(duì)犬瘟熱病毒的各種檢測(cè)方法進(jìn)行簡(jiǎn)要的綜述，為廣大獸醫(yī)工作者選擇有效檢測(cè)方法提供參考。

1 病原學(xué)檢測(cè)方法

1.1 病毒分離鑒定

病原分離鑒定通常是疾病確診的根本方法，近年來(lái)，不少學(xué)者成功在CDV細(xì)胞培養(yǎng)分離上取得了成功。該方法準(zhǔn)確可靠，但目前主要用于實(shí)驗(yàn)室研究，臨床使用受限較多。CDV環(huán)境生存能力很弱，且在感染中后期受抗體影響較大，因此，在自然感染的病例中該病毒的分離成功率很低。

1.2 包涵體檢查

包涵體是CDV感染細(xì)胞所產(chǎn)生的特征性病理變化，通過(guò)診斷病理學(xué)可以檢查到包涵體的存在，從而證實(shí)CDV的感染[2]。鑒于其他一些病毒也會(huì)產(chǎn)生包涵體，僅靠該方法不能確診，需與其他方法配合。

1.3 電鏡檢查和動(dòng)物接種試驗(yàn)

CDV的電鏡檢查較為困難，該病毒顆粒與同科病毒在形態(tài)結(jié)構(gòu)上難以區(qū)分，同時(shí)其采樣獲取較為困難。常國(guó)權(quán)等[3]采取糞便作為病料，分別使用免疫電鏡技術(shù)和離子捕獲電鏡技術(shù)對(duì)病料做出了檢查，取得了一定效果。目前，該方法通常作為一種輔助方法，不作為CDV檢測(cè)的常規(guī)手段。

動(dòng)物接種試驗(yàn)作為一種病原學(xué)診斷方法，在某些病原的診斷上有重要的作用，CDV目前尚無(wú)理想的動(dòng)物接種試驗(yàn)診斷效果的報(bào)道。

2 血清學(xué)檢測(cè)方法

2.1 血清中和試驗(yàn)

血清中和試驗(yàn)是常用的CDV抗體標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法，該方法既可以檢測(cè)待檢血清中的CDV抗體，又可以測(cè)定CDV抗體的效價(jià)，具有敏感性高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好等特點(diǎn)。該方法首次由國(guó)外學(xué)者Lo JP等應(yīng)用到CDV的檢測(cè)中來(lái)，現(xiàn)已得到了較為廣泛的使用。由于該方法作出診斷時(shí)間較長(zhǎng)，不能滿足臨床上快速診斷的要求，目前多用于實(shí)驗(yàn)室研究。

2.2 免疫組化技術(shù)

免疫組化技術(shù)通常用于檢測(cè)CDV在動(dòng)物機(jī)體內(nèi)各組織器官的分布情況，多在動(dòng)物死亡后的病理檢查中使用，敏感性和穩(wěn)定性較高。有學(xué)者用PAP檢測(cè)犬CDV抗體，發(fā)現(xiàn)該試驗(yàn)特異性與中和試驗(yàn)相似。

2.3 免疫熒光技術(shù)

免疫熒光技術(shù)結(jié)合了抗原抗體反應(yīng)的特異性和染色技術(shù)的快速性，目前是國(guó)際通用的CDV診斷方法，同時(shí)適用于體外細(xì)胞培養(yǎng)物和組織臟器中CDV的檢測(cè)。袁書智等[4]分別在犬瘟熱病犬死亡前后用直接FA染色法檢測(cè)CDV抗原，結(jié)果表明該方法可作為CDV是否感染的指標(biāo)。

2.4 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)結(jié)合抗原抗體反應(yīng)的特異性和酶促反應(yīng)的高敏感性，建立起準(zhǔn)確率高、敏感性好、特異性強(qiáng)的抗原抗體檢測(cè)技術(shù)。同時(shí)，ELISA具有良好的商品化產(chǎn)品，可批量快速檢測(cè)。因此，該方法目前在臨床實(shí)踐中得到了大量應(yīng)用。

2.5 膠體金免疫層析

膠體金免疫層析技術(shù)是一種基于單克隆抗體建立起來(lái)的技術(shù)，該方法操作簡(jiǎn)單，可批量快速檢測(cè)，但具有一定的假陽(yáng)性率，這點(diǎn)值得注意。該方法在臨床應(yīng)用上擁有很好的推廣前景，如果在敏感度上再加以改進(jìn)，相信會(huì)得到更好的發(fā)展。

2.6 瓊脂免疫擴(kuò)散試驗(yàn)和凝集試驗(yàn)

瓊脂免疫擴(kuò)散法是利用抗原抗體反應(yīng)建立起來(lái)的一種簡(jiǎn)單快捷的檢測(cè)方法。該方法在敏感度上雖有一定局限性，但操作簡(jiǎn)單，不需要復(fù)雜設(shè)備技術(shù)，適合在廣大基層單位進(jìn)行推廣。

凝集試驗(yàn)是一種操作簡(jiǎn)單、快速的血清學(xué)檢測(cè)手段，該方法也是基于抗原抗體反應(yīng)建立。該方法要求條件較低，診斷時(shí)間短，利用糞便或尿液檢測(cè)抗原能夠不受免疫接種的影響，在臨床上應(yīng)用具有很大的優(yōu)勢(shì)。

3 分子生物學(xué)檢測(cè)方法

3.1 核酸雜交技術(shù)

核酸雜交技術(shù)通過(guò)檢查兩種核酸分子堿基排列有無(wú)互補(bǔ)關(guān)系或互補(bǔ)程度來(lái)判斷二者關(guān)系，從而達(dá)到檢測(cè)特有核酸序列的目的。王宏俊等[5]建立了一種核酸探針檢測(cè)CDV的方法，結(jié)果顯示該方法的特異性和敏感性均較好。

3.2 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)

目前在CDV的檢測(cè)中，國(guó)內(nèi)外學(xué)者較多地使用了PCR技術(shù)。劉大飛等[6]建立了檢測(cè)CDV和其他幾種犬病毒的多重PCR方法，該方法縮短了臨床上檢測(cè)病料的時(shí)間，敏感性和特異性較好。PCR因其特異性強(qiáng)、敏感性高以及檢測(cè)快速的優(yōu)勢(shì)，在實(shí)驗(yàn)研究中得到了廣泛應(yīng)用。

3.3 環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增和基因芯片

環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)是日本學(xué)者Notomi等開發(fā)的一種恒溫核酸擴(kuò)增方法，該方法特異性高、簡(jiǎn)單快捷，避免了常規(guī)核酸擴(kuò)增方法的繁瑣擴(kuò)增、檢測(cè)程序?；蛐酒夹g(shù)是最近發(fā)展很好的一種新型分子生物學(xué)技術(shù)，該方法快速、準(zhǔn)確、敏感，可以批量檢測(cè)，具有很好的應(yīng)用前景。這兩種方法要求較高，目前主要用于實(shí)驗(yàn)室研究，在臨床上推廣尚需時(shí)日。

[1] 陳溥言.獸醫(yī)傳染病學(xué)[M].北京: 中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2006，415-419.

[2] 賀永明，劉艷紅，劉淑芳.犬瘟熱臨床診治[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2007，35（ 13） : 3930．

[3] 常國(guó)權(quán)，楊盛華.用離子捕獲電鏡技術(shù)快速檢測(cè)犬瘟熱病毒[J].畜牧與獸醫(yī)，1994，26（6）: 243-244.

[4] 袁書智，夏咸柱.犬瘟熱熒光抗體技術(shù)的應(yīng)用研究[J].中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào)，1994，14（2） :146-150.

[5] 王宏俊，丁少忠.核酸探針檢測(cè)犬瘟熱病毒方法的建立和初步應(yīng)用[J].中國(guó)獸藥雜志，2006，40（5）: 19-22.

[6] 劉大飛，姜一曈，戚亭，等.同時(shí)檢測(cè)犬瘟熱病毒、犬細(xì)小病毒I型和II型犬腺病毒多重PCR方法的建立[J].中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2012，34（11）: 911-914.

崔金鑫（1988-），研究生，張家港出入境檢驗(yàn)檢疫局，動(dòng)物傳染病防治；田志高，張家港出入境檢驗(yàn)檢疫局。