殷 曉,張春梅,李新崗,黃 建,王長(zhǎng)柱,練春蘭
(1 西北農(nóng)林科技大學(xué) a 林學(xué)院 陜西省林業(yè)綜合重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,b 園藝學(xué)院,陜西 楊凌 712100;2 東京大學(xué) 亞洲自然環(huán)境科學(xué)中心,日本 東京188-0002)
棗(ZiziphusjujubaMill.)是原產(chǎn)于我國(guó)的特有果樹,栽培歷史悠久,約有900個(gè)品種[1-2]。長(zhǎng)期的栽培與馴化,使其變異類型極其豐富,已形成區(qū)域性品種和品種群[2-3]。晉陜黃河峽谷一帶是我國(guó)栽培棗的原產(chǎn)地和栽培中心[2-4],也是我國(guó)優(yōu)良制干棗的主要栽培區(qū)[2,5],一直保存著栽培棗的很多原生類型,以及酸棗到棗的中間過渡類型[2,4]。在我國(guó)棗的起源地和栽培中心,研究棗的遺傳結(jié)構(gòu)對(duì)于探明我國(guó)棗品種群的形成和發(fā)展具有重要意義。
關(guān)于棗分子水平的研究,過去主要采用RAPD[6-17]、AFLP[14-15,18-27]、SRAP[6,19,28]、ISSR[29-31]等技術(shù)探討了棗和酸棗的分類地位[6-7,10,12,16,28]、品種鑒定[13,15,17-20]、種質(zhì)的親緣關(guān)系[7-9,16,18,23-26,28,30]、親本鑒定[21-22]、遺傳圖譜[4,28]和遺傳多樣性[11,19,29,31]等。隨著分子技術(shù)的發(fā)展,由于SSR標(biāo)記具有多態(tài)性高、重復(fù)性好、共顯性遺傳、特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)[32],在很大程度上替代了傳統(tǒng)的酶標(biāo)記以及RAPD、AFLP等方法,已廣泛應(yīng)用于遺傳結(jié)構(gòu)和種質(zhì)鑒定研究中[33-35]。近年來,有學(xué)者利用SSR標(biāo)記構(gòu)建了棗指紋圖譜[36]并進(jìn)行了親本鑒定[37],但利用SSR標(biāo)記對(duì)棗品種群遺傳結(jié)構(gòu)進(jìn)行研究尚未見報(bào)道。品種群(Cultivar group)是親緣關(guān)系相近的一類品種的集合[1]。一般認(rèn)為,棗由酸棗演化而來[2,4],在同一演化路線上的品種遺傳背景比較一致,分析品種間的遺傳關(guān)系,找出基本品種,以此劃分品種群,對(duì)于指導(dǎo)棗資源利用和育種實(shí)踐具有重要意義[13,20]。
為進(jìn)一步闡明棗的遺傳結(jié)構(gòu)與品種群分化,本研究針對(duì)我國(guó)栽培棗的原產(chǎn)地和栽培中心——陜北棗區(qū),選取4個(gè)區(qū)域(縣)8個(gè)品種群54份棗種質(zhì)為研究對(duì)象,利用SSR分子標(biāo)記研究了棗在起源地的遺傳結(jié)構(gòu)與親緣關(guān)系,以期揭示棗品種群的分化情況,為棗資源利用和分子輔助育種提供參考。
在陜北黃河峽谷由南向北選取延川、清澗、米脂和佳縣4個(gè)地理區(qū)域(縣),采集陜北原產(chǎn)的團(tuán)棗、木棗、牙棗、脆棗、疙瘩棗、狗頭棗、腰腰棗和辣節(jié)節(jié)棗等8個(gè)棗品種群的54份樣品(表1),樣樹樹齡40年以上,間隔距離500 m以上,并進(jìn)行GPS定位。參照《中國(guó)果樹志·棗卷》[2]和《中國(guó)棗種質(zhì)資源》[1],記錄其形態(tài)特征和生物學(xué)特性。2012-06(花期)采集棗葉片樣品,硅膠干燥后于室溫密封保存[38],葉片用于DNA提取。
用改良CTAB法[39]提取棗基因組DNA。利用QIAGEN TissueLyser Ⅱ高通量組織研磨儀(德國(guó))破碎葉片,60 ℃溫浴30 min,先用氯仿/異戊醇(體積比24∶1)抽提,再用等體積異丙醇抽提,用預(yù)冷的體積分?jǐn)?shù)80%乙醇沉淀DNA,然后用滅菌超純水過夜溶解。樣品經(jīng)NanoVue Plus超微量分光光度計(jì)(美國(guó))檢測(cè)后保存于-30 ℃冰箱待用。
表1 陜北原產(chǎn)8個(gè)棗品種群的樣品來源與用途
選取7個(gè)高多態(tài)性棗SSR引物(BFU0308、BFU0377、BFU0561、BFU0574、BFU1157[36]和自主開發(fā)的Zjuju001和Zjuju021(GenBank序列號(hào)分別為KC117400和KC117409))進(jìn)行PCR。PCR反應(yīng)體系為10 μL,內(nèi)含20~30 ng基因組DNA,2×QIAGEN Multiplex PCR Master Mix(德國(guó))5 μL,反向引物和帶熒光標(biāo)記的正向引物分別為3.2和0.8 pmol。按照QIAGEN Multiplex PCR Kit試劑盒(德國(guó))的說明,PCR反應(yīng)程序如下:95 ℃預(yù)變性15 min;94 ℃ 30 s,57 ℃ 90 s,72 ℃ 60 s,30個(gè)循環(huán);60 ℃ 30 min。擴(kuò)增產(chǎn)物由東京大學(xué)森林分子生態(tài)學(xué)研究室ABI 3130XL測(cè)序儀(美國(guó))采用毛細(xì)管電泳檢測(cè),用GeneMapper 4.0軟件記錄和分析原始數(shù)據(jù)。
利用GenAlEx 6.5軟件分析供試棗的遺傳多樣性[40],計(jì)算稀有等位基因數(shù)(Nr)、等位基因數(shù)(Na)、有效等位基因數(shù)(Ne)、觀測(cè)雜合度(Ho)、期望雜合度(He)、Shannon’s信息指數(shù)(I)、固定系數(shù)(F)、近交系數(shù)(Fis,F(xiàn)it,F(xiàn)st)、基因流(Nm)和Nei’s遺傳距離(D)等參數(shù)。
根據(jù)地理區(qū)域(縣)與品種群間的Nei’s遺傳距離,分別用NTSYSpc-2.10軟件[41]中的類平均聚類法(UPGMA)繪制樹狀圖,分析地理區(qū)域(縣)與品種群間的分化程度。
原始數(shù)據(jù)經(jīng)Flexibin軟件[42]轉(zhuǎn)化為0/1矩陣后,利用NTSYS軟件計(jì)算種間Nei’s遺傳距離,再用MEGA 5.1軟件[43]的鄰近距離法(NJ)構(gòu)建親緣關(guān)系圖。
經(jīng)檢測(cè),用7對(duì)引物從陜北54份棗種質(zhì)中共獲得42個(gè)等位基因,其中引物BFU0308擴(kuò)增的多態(tài)性位點(diǎn)最多(10個(gè)),BFU0561擴(kuò)增的多態(tài)性位點(diǎn)最少(3個(gè)),平均每個(gè)位點(diǎn)等位基因數(shù)為6。
由表2可知,按地理區(qū)域(縣)劃分,從延川、清澗、米脂和佳縣每個(gè)區(qū)域的棗種質(zhì)中分別可觀察到6,1,1和4個(gè)稀有等位基因。有效等位基因數(shù)(Ne)為2.464~3.479;Shannon’s信息指數(shù)(I)為1.036~1.336;期望雜合度(He)為0.589~0.694,平均觀測(cè)雜合度(0.909)大于平均期望雜合度(0.634);固定指數(shù)(F)為-0.587~-0.253。
表2 基于地理區(qū)域的陜北棗種質(zhì)的遺傳多樣性
由表3可以看出,按品種群劃分,團(tuán)棗、木棗、狗頭棗和辣節(jié)節(jié)棗每個(gè)品種群內(nèi)分別可觀察到3,2,1和4個(gè)稀有等位基因。各品種棗的有效等位基因數(shù)(Ne)為1.849~3.496;Shannon’s信息指數(shù)(I)為0.567~1.284;期望雜合度(He)為 0.380~0.706,平均觀測(cè)雜合度(0.922)大于平均期望雜合度(0.555);固定指數(shù)(F)為-1.000~-0.352。其中,狗頭棗品種群的Ne、He和I指標(biāo)均最小,說明其遺傳多樣性較低,可能與其栽培地域狹窄(僅在延川)、變異類型少有關(guān)。
表3 基于品種群的陜北棗種質(zhì)的遺傳多樣性
由分子方差檢驗(yàn)(AMOVA)檢驗(yàn)結(jié)果(表4)可知,地理區(qū)域(縣)內(nèi)變異(97%)和品種群內(nèi)變異(91%,88%)均遠(yuǎn)大于群間分化(3%,9%,12%);品種群內(nèi)變異(91%,88%)小于地理區(qū)域(縣)內(nèi)變異(97%)。地理區(qū)域(縣)與品種群的Fis和Fit值均為負(fù)值;品種群的Fis值(-0.514,-0.522)小于地理種群(-0.387),F(xiàn)it值(-0.308,-0.268)大于地理區(qū)域(縣)(-0.328)。品種群Fst值(0.136,0.167)大于地理區(qū)域(縣)(0.042)。品種群間平均基因流(1.584,1.250)均小于地理區(qū)域間平均基因流(5.653)。
表4 陜北棗種質(zhì)群體分化的AMOVA檢驗(yàn)結(jié)果
圖1為4個(gè)地理區(qū)域(縣)棗種質(zhì)的Nei’s遺傳距離UPGMA聚類圖。由圖1可知,在遺傳距離為0.13處4個(gè)地理區(qū)域(縣)種質(zhì)被劃分為2個(gè)地理群。無定河(黃河分支)上游的清澗和米脂棗種質(zhì)遺傳距離最近(0.05),首先聚為一支,然后在遺傳距離約為0.09處與佳縣聚為第Ⅰ類;第Ⅱ類只有延川一個(gè)區(qū)域,與其他區(qū)域親緣關(guān)系較遠(yuǎn), 這與該組中含有狗頭棗品種群有關(guān)(圖2)。
8個(gè)棗品種群的UPGMA聚類結(jié)果如圖2所示。由圖2可以看出,在遺傳距離為0.99處8個(gè)棗品種群被分成2個(gè)類群。第Ⅰ類群為團(tuán)棗-木棗類群,包括團(tuán)棗、木棗、疙瘩棗、腰腰棗、牙棗和脆棗5個(gè)品種群。第Ⅰ類群又可分為3個(gè)亞類,其中親緣關(guān)系最近的是木棗品種群與疙瘩棗品種群,其相聚后再與腰腰棗品種群聚在一起,然后又與牙棗聚成一支,形成木棗品種亞類(第1亞類);第1亞類與第2亞類團(tuán)棗品種群親緣關(guān)系較近;第3亞類為脆棗品種群,單獨(dú)為一支,與第1亞類和第2亞類親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。第Ⅱ類群為狗頭棗品種亞群,包括延川狗頭棗和辣節(jié)節(jié)棗品種群。
圖1 基于Nei’s遺傳距離的陜北棗種質(zhì)地理區(qū)域聚類圖
由54份陜北棗種質(zhì)的NJ聚類樹(圖3)可以看出,供試材料被分為2大類群。第Ⅰ類群共45份種質(zhì),又可分為2個(gè)亞群,一支包括延川-清澗-米脂團(tuán)棗品種群(5個(gè)延川團(tuán)棗、3個(gè)清澗團(tuán)棗和2個(gè)米脂團(tuán)棗)、佳縣團(tuán)棗品種群(JXTZ03,JXTZ04和JXTZ05)、木棗品種群(9個(gè)佳縣木棗、5個(gè)延川木棗、3個(gè)清澗木棗和2個(gè)米脂木棗)、疙瘩棗品種群(YCGD14和JXGD18)、脆棗品種群(YCCZ12和JXCZ17)、牙棗品種群(MZYZ07,JXYZ15和JXYZ16)和腰腰棗品種群(JXYY19和JXYY20);另一支包括過渡類型的泥河溝酸團(tuán)棗(JXTZ01)和小會(huì)酸團(tuán)棗(JXTZ02)以及米脂木棗2號(hào)(MZMZ04)和狗牙棗1號(hào)(MZYZ06)。第Ⅱ類群共9份種質(zhì),包括全部的延川狗頭棗品種群(5個(gè))、延川脆棗(YCCZ13)和吊牙棗(YCYZ11)、清澗團(tuán)棗4號(hào)(QJTZ04)以及辣節(jié)節(jié)棗(YCLJ20)。其中,除了清澗團(tuán)棗4號(hào)(QJTZ04)外,延川、清澗和米脂的團(tuán)棗幾乎都聚在一起;佳縣棗種質(zhì)全部在第Ⅰ類群,且各品種群親緣關(guān)系很近;狗頭棗品種群與其他棗品種群親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。
圖3 基于Nei’s遺傳距離的陜北54份棗種質(zhì)親緣關(guān)系聚類圖品種編號(hào)同表1
遺傳多樣性是物種遺傳潛力和應(yīng)對(duì)環(huán)境變化能力的重要指標(biāo),遺傳多樣性喪失常常導(dǎo)致物種的適合度下降[44]。平均期望雜合度受取樣的影響較小,因此常用它來度量群體的遺傳多樣性,其高低可反映群體的遺傳一致性程度[45]。本研究中各地理區(qū)域樣本的期望雜合度在0.589~0.694,平均期望雜合度為0.634,表明陜北棗在長(zhǎng)期馴化與特殊生態(tài)環(huán)境下發(fā)生了中度雜合;其平均Shannon’s信息指數(shù)為1.141,說明所分析的棗品種群具有高遺傳多樣性與高變異性;固定系數(shù)與近交系數(shù)均為負(fù)值,表明供試品種在陜北棗區(qū)很少發(fā)生近交[46]。閆超等[47]對(duì)280個(gè)棗品種的結(jié)實(shí)特性研究后發(fā)現(xiàn),棗樹結(jié)實(shí)多種多樣,且供試品種異花授粉均可結(jié)實(shí),結(jié)實(shí)率顯著高于自花授粉;其中,陜北品種(牙棗和狗頭棗)均為異花授粉,且自花不育。這更好地解釋了棗具有較高的雜合性。
本研究中,4個(gè)地理區(qū)域8個(gè)棗品種群均觀察到了不同數(shù)量的稀有等位基因,其中可能存在與優(yōu)良性狀相關(guān)的遺傳變異和獨(dú)特基因型。佳縣棗品種的Ne、He和I均最小,而延川最大,說明延川棗種質(zhì)遺傳多樣性最高,這與延川包含與其他品種群親緣關(guān)系較遠(yuǎn)的狗頭棗有關(guān)。佳縣棗種質(zhì)遺傳多樣性最低,其原因一方面可能是佳縣多為木棗品種群,而木棗品種群內(nèi)多樣性相對(duì)于不同品種群間多樣性?。涣硪环矫?,佳縣是最具代表性的栽培棗原產(chǎn)地,這里保存著原始品種類型[2-4],表型差異明顯,但現(xiàn)存的千年古棗樹(如JXMZ12,果實(shí)圓型,果皮黑紅,風(fēng)味偏酸)與其分化的木棗(如JXMZ11,果實(shí)錐型,風(fēng)味偏酸;JXMZ07,早熟;JXMZ08,抗裂;JXMZ09,晚熟)親緣關(guān)系很近,說明原生木棗品種群的遺傳變異不大。
遺傳結(jié)構(gòu)主要通過物種種群內(nèi)和種群間的遺傳分化來體現(xiàn)。遺傳分化系數(shù)是反映各亞群間遺傳分化的重要指標(biāo)[45]。本研究中,品種地理區(qū)域間Fst為 0.042,說明4個(gè)區(qū)域間基本不存在遺傳分化;而7個(gè)棗品種群和4個(gè)棗品種群間的Fst分別為0.136和0.167,說明品種群間有中度到高度分化。AMOVA結(jié)果也表明,地理區(qū)域內(nèi)與品種群內(nèi)變異均遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于區(qū)域間和品種群間分化,但品種群內(nèi)部變異較地理區(qū)域內(nèi)變異小。這與棗品種廣泛的基因交流(如品種混植)有關(guān),使其均質(zhì)化[48];也可能是由于資源一致性生境造成的[2]。這種現(xiàn)象在遠(yuǎn)交的木本植物中比較普遍,如油橄欖[33]、葡萄[34],其遺傳變異主要存在于居群內(nèi)。本研究聚類結(jié)果表明,棗品種的遺傳相似性與地理區(qū)域無明顯關(guān)系,這也是地理區(qū)域間基因流較高的一個(gè)證據(jù)。
本研究中,品種群間平均基因流(7品種群和4品種群Nm分別為1.584和1.250)較小,這很好地印證了品種群間的中高度分化,各品種群在果實(shí)形狀、大小、品質(zhì)、豐產(chǎn)性、耐貯性和抗裂性等重要農(nóng)藝性狀上存在很大差異,如脆棗和狗頭棗多為大果形,牙棗為小果形;脆棗和牙棗雖品質(zhì)明顯優(yōu)于團(tuán)棗和木棗,但耐貯性明顯低于團(tuán)棗和木棗;脆棗皮薄肉脆,抗裂性差、裂果嚴(yán)重,而牙棗抗裂性強(qiáng);脆棗為鮮食品種,其他多為鮮食、制干兼用品種。品種群UPGMA聚類結(jié)果表明,狗頭棗品種群與其他品種群,特別是木棗品種群的親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。前人對(duì)狗頭棗和早熟木棗的染色體核型進(jìn)行了分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn),狗頭棗核型為2n=2x=24=10m+10sm+4st,不對(duì)稱性系數(shù)高達(dá) 64.54%;早熟木棗核型為2n=2x=24=12m+12sm,說明佳縣的早熟木棗更原始[49-50]。
棗種質(zhì)NJ聚類結(jié)果表明,疙瘩棗、牙棗、腰腰棗與木棗品種群的親緣關(guān)系很近,極有可能是從原始品種木棗中產(chǎn)生的不同性狀變異株系形成的,如第Ⅰ類群中木條棗(YCMZ08,延川眼岔寺)、木疙瘩棗(YCGD14,劉高山村,晚熟,果實(shí)方形,果皮黑紅)與抗裂木棗(QJMZ05,馬牙棗,抗裂)遺傳距離幾乎為0,而果形有差異,又與長(zhǎng)腰腰棗(即驢奶頭棗(JXYY20),果實(shí)大,長(zhǎng)卵形,品質(zhì)中上等,質(zhì)地較致密,制干,抗裂果)聚在一起,品質(zhì)口感不同,但都不易裂果;螅鎮(zhèn)抗裂木棗(JXMZ14,果實(shí)小,兼用,抗裂果)與牛奶脆棗(YCCZ12,果實(shí)大,品質(zhì)上等,質(zhì)地致密細(xì)脆,鮮食,易裂果)果實(shí)品質(zhì)與抗裂性不同,但遺傳相似性極高。
棗因基因突變和自然雜交等產(chǎn)生了很多變異類型,然后通過自然選擇和人為選擇等因素逐漸形成區(qū)域性棗品種群,這為良種優(yōu)選奠定了基礎(chǔ)。如與其他團(tuán)棗距離較遠(yuǎn)的沙團(tuán)棗(JXTZ04),平均單果質(zhì)量13.0 g,品質(zhì)上等,耐貯藏,豐產(chǎn)性高,抗裂果,是鮮食品種中的優(yōu)良種質(zhì);狗頭棗屬兼用中晚熟大果型品種,品質(zhì)上等,耐貯藏,豐產(chǎn)性高,不抗裂果,都聚在第Ⅱ類群,但延川莊頭的狗頭棗3號(hào)(YCGT17)與其他4個(gè)狗頭棗親緣關(guān)系較遠(yuǎn),其原因還有待進(jìn)一步比較研究。另外,本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)同物異名現(xiàn)象,如第Ⅰ類群中狗牙棗1號(hào)(MZYZ06,卯疙瘩村,果形小)與米脂木棗2號(hào)(MZMZ04,高家渠村,果形小)遺傳距離為0,且表型差異小;過渡類型泥河溝酸團(tuán)棗(JXTZ01,泥河溝)與小會(huì)酸團(tuán)棗(JXTZ02,小會(huì)坪),均為喬木型酸棗到棗的過渡類型,果型、枝、葉與栽培棗相似,果實(shí)風(fēng)味偏酸,核大;第Ⅱ類群中,吊牙棗(YCYZ11)與脆棗(YCCZ13)的果實(shí)均脆甜,性狀比較相近。
同一區(qū)域的棗種質(zhì)并沒有聚在一起,而是按照品種群聚類。棗品種間同時(shí)存在同源同型(表型相似,親緣關(guān)系近)、同源異型(表型不同,親緣關(guān)系近)與異源同型(表型相似,親緣關(guān)系遠(yuǎn)),說明棗品種的演化有多條路線,同一演化路線上的品種遺傳背景比較一致,不同演化路線上的品種也會(huì)出現(xiàn)相似的表型特征。花粉形態(tài)[51]、同工酶[52]和RAPD[8]研究也證明了這一點(diǎn)。由于本研究所用標(biāo)記及部分群體內(nèi)供試樣品較少,為探究中國(guó)棗品種群的遺傳結(jié)構(gòu),還有待于大范圍、跨區(qū)域采樣,并將SSR標(biāo)記與更先進(jìn)的葉綠體基因測(cè)序技術(shù)結(jié)合起來進(jìn)行研究。
[參考文獻(xiàn)]
[1] 劉孟軍,汪 民.中國(guó)棗種質(zhì)資源 [M].北京:中國(guó)林業(yè)出版社,2009:59-147.
Liu M J,Wang M.Germplasm resources of Chinese jujube [M].Beijing:China Forestry Publishing House,2009:59-147.(in Chinese)
[2] 曲澤洲,王永蕙.中國(guó)果樹志·棗卷 [M].北京: 中國(guó)林業(yè)出版社,1993:1-65.
Qu Z Z,Wang Y H.China fruit’s monograph:Chinese jujube volume [M].Beijing:China Forestry Publishing House,1993:1-65.(in Chinese)
[3] 曲澤洲.我國(guó)古代的棗樹栽培 [J].河北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),1963,2(2):1-18.
Qu Z Z.Ancient cultivation of Chinese jujube in China [J].Journal of Hebei Agricultural University,1963,2(2):1-18.(in Chinese)
[4] 曲澤洲,王永蕙,周吉柱,等.關(guān)于棗樹的起源問題:再談酸棗的演變和棗樹的起源問題 [J].河北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),1987,10(Suppl.):1-9.
Qu Z Z,Wang Y H,Zhou J Z,et al.Discussion on the origin of Chinese jujube [J].Journal of Hebei Agricultural University,1987,10(Suppl.):1-9.(in Chinese)
[5] 李新崗,黃 建,高文海.我國(guó)制干棗優(yōu)生區(qū)研究 [J].果樹學(xué)報(bào),2005,22(6):620-625.
Li X G,Huang J,Gao W H.A study on high-quality production region of dry Chinese jujube in China [J].Journal of Fruit Science,2005,22(6):620-625.(in Chinese)
[6] 李 莉.RAPD及SRAP標(biāo)記在中國(guó)棗屬植物系統(tǒng)分類學(xué)中的應(yīng)用研究 [D].河北保定:河北農(nóng)業(yè)大學(xué),2007.
Li L.Study on systematic taxonomy of Chinese Ziziphus by RAPD and SRAP markers [D].Baoding,Hebei:Hebei Agricultural University,2007.(in Chinese)
[7] 李 莉,彭建營(yíng),白瑞霞.中國(guó)棗屬植物親緣關(guān)系的RAPD分析 [J].園藝學(xué)報(bào),2009,36(4):475-480.
Li L,Peng J Y,Bai R X.Studies on the phylogenetic relationships of Chinese Ziziphus by RAPD technique [J].Acta Horticulturae Sinicia,2009,36(4):475-480.(in Chinese)
[8] 李瑞環(huán),李新崗,黃 建,等.棗和酸棗親緣關(guān)系的RAPD分析 [J].果樹學(xué)報(bào),2012,29(3):366-373.
Li R H,Li X G,Huang J,et al.Genetic relationship of Chinese jujube (Ziziphusjujuba) and sour jujube (Z.spinosa) based on RAPD markers [J].Journal of Fruit Science,2012,29(3):366-373.(in Chinese)
[9] 劉冬芝,時(shí) 燕,趙登超,等.大酸棗與酸棗、棗親緣關(guān)系的RAPD分析 [J].西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2010,19(4):160-164.
Liu D Z,Shi Y,Zhao D C,et al.RAPD analysis on relationship of Dasuanzao,ZiziphusspinosaandZiziphusjujuba[J].Acta Agriculturae Boreali-occidentalis Sinica,2010,19(4):160-164.(in Chinese)
[10] 劉 平,彭建營(yíng),彭士琪,等.應(yīng)用RAPD標(biāo)記技術(shù)探討棗與酸棗的分類學(xué)關(guān)系 [J].林業(yè)科學(xué),2005,41(2):182-185.
Liu P,Peng J Y,Peng S Q,et al.Study on systematic relationships ofZiziphusjujubaandZiziphusspinosausing RAPD technique [J].Scientia Silvae Sinicae,2005,41(2):182-185.(in Chinese)
[11] 劉 平,彭建營(yíng),彭士琪,等.贊皇大棗的群體遺傳多樣性評(píng)價(jià) [J].果樹學(xué)報(bào),2006,23(5):685-689.
Liu P,Peng J Y,Peng S Q,et al.Genetic diversity evaluation ofZiziphusjujubacv Zanhuangdazao [J].Journal of Fruit Science,2006,23(5):685-689.(in Chinese)
[12] 彭建營(yíng),束懷瑞,彭士琪.用RAPD技術(shù)探討中國(guó)棗的種下劃分 [J].植物分類學(xué)報(bào),2002,40(1):89-94.
Peng J Y,Shu H R,Peng S Q.To address the problem of infraspecific classification ofZiziphusjujubaMill.using RAPD data [J].Acta Phytotaxonomica Sinicia,2002,40(1):89-94.(in Chinese)
[13] 彭建營(yíng),束懷瑞,孫仲序,等.中國(guó)棗種質(zhì)資源的RAPD分析 [J].園藝學(xué)報(bào),2000,27(3):171-176.
Peng J Y,Shu H R,Sun Z X,et al.RAPD analysis of germplasm resources on Chinese date [J].Acta Horticulturae Sinica,2000,27(3):171-176.(in Chinese)
[14] 齊 靖,董 禎,毛永民,等.棗高密度遺傳圖譜的構(gòu)建與樹干直徑的QTL分析 [J].林業(yè)科學(xué),2009,45(8):44-49.
Qi J,Dong Z,Mao Y M,et al.Construction of a dense genetic linkage map and QTL analysis of trunk diameter in Chinese jujube [J].Scientia Silvae Sinicae,2009,45(8):44-49.(in Chinese)
[15] 宋 婉.中國(guó)棗優(yōu)良品種DNA指紋圖譜的研究 [D].北京:北京林業(yè)大學(xué),1999.
Song W.Study on DNA fingerprinting of superior cultivars of Chinese date (ZizyphusjujubaMill.) [D].Beijing:Beijing Forestry University,1999.(in Chinese)
[16] 趙 錦,劉孟軍. 棗樹品種、品系及其近緣種的RAPD分析 [J].中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué),2003,36(5):590-594.
Zhao J,Liu M J.RAPD analysis on the cultivars, strains and related species of Chinese jujube (ZiziphusjujubaMill.) [J].Scientia Agricultura Sinica,2003,36(5):590-594.(in Chinese)
[17] 趙 錦,劉孟軍.贊皇大棗優(yōu)良品系及贊新大棗的RAPD分析 [J].林業(yè)科學(xué),2003,39(3):153-156.
Zhao J,Liu M J.RAPD analysis on the outstanding clones of Zanhuangdazao and Zanxindazao [J].Scientia Silvae Sinicae,2003,39(3):153-156.(in Chinese)
[18] 白瑞霞.AFLP技術(shù)在棗種質(zhì)資源鑒別和分類研究中的應(yīng)用 [D].河北保定:河北農(nóng)業(yè)大學(xué),2005.
Bai R X.Study on identification and classification ofZiziphusjujubagermsplasm resources using AFLP molecular markers [D].Baoding,Hebei:Hebei Agricultural University,2005.(in Chinese)
[19] 白瑞霞.棗種質(zhì)資源遺傳多樣性的分子評(píng)價(jià)及其核心種質(zhì)的構(gòu)建 [D].河北保定:河北農(nóng)業(yè)大學(xué),2008.
Bai R X.Studies on genetic diversity and core collection construction ofZiziphusjujubagermsplasm resources using AFLP and SRAP markers [D].Baoding,Hebei:Hebei Agricultural University,2008.(in Chinese)
[20] 馬慶華,申連英,王貴禧,等.應(yīng)用AFLP技術(shù)分析冬棗優(yōu)良單株選擇的遺傳基礎(chǔ) [J].植物遺傳資源學(xué)報(bào),2009,10(4):504-510.
Ma Q H,Shen L Y,Wang G X,et al.Analysis of genetic background for the selection of advanced trees of Dongzao (ZizyphusjujubaMill.cv Dongzao) by AFLP markers [J].Journal of Plant Genetic Resources,2009,10(4):504-510.(in Chinese)
[21] 鹿金穎.棗自然授粉實(shí)生后代雜種鑒定及遺傳變異研究 [D].河北保定:河北農(nóng)業(yè)大學(xué),2003.
Lu J Y.Study on identification of hybrids and hereditary variation of natural pollinated Chinese jujube seedlings [D].Baoding,Hebei:Hebei Agricultural University,2003.(in Chinese)
[22] 鹿金穎,毛永民,申蓮英,等.用AFLP分子標(biāo)記鑒定冬棗自然授粉實(shí)生后代雜種的研究 [J].園藝學(xué)報(bào),2005,32(4):680-684.
Lu J Y,Mao Y M,Shen L Y,et al.Application of AFLP markers for identification of hybrids from open pollinated Dongzao (ZizyphusjujubaMill.) progenies [J].Acta Horticulturae Sinica,2005,32(4):680-684.(in Chinese)
[23] 喬 勇,趙 錦,楊海旭,等.21個(gè)棗品種(系)的AFLP指紋分析 [J].植物遺傳資源學(xué)報(bào),2009,10(2):205-210.
Qiao Y,Zhao J,Yang H X,et al.AFLP analysis on 21 cultivars and strains of Chinese jujube [J].Journal of Plant Genetic Resources,2009,10(2):205-210.(in Chinese)
[24] 王永康,田建保,王永勤,等.棗樹品種品系的AFLP分析 [J].果樹學(xué)報(bào),2007,24(2):146-150.
Wang Y K,Tian J B,Wang Y Q,et al.AFLP analysis of jujube cultivars and strains [J].Journal of Fruit Science,2007,24(2):146-150.(in Chinese)
[25] 魏天軍,李彥龍,李百云.寧夏棗樹品種品系的AFLP分析 [J].中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào),2010,26(10):239-241.
Wei T J,Li Y L,Li B Y.AFLP analysis on jujube cultivars and strains in Ningxia Autonomous Region [J].Chinese Agricultural Science Bulletin,2010,26(10):239-241.(in Chinese)
[26] 文亞峰,何 鋼. 適合我國(guó)南方地區(qū)栽培的棗優(yōu)良品種親緣關(guān)系研究 [J].果樹學(xué)報(bào),2007,24(5):640-643.
Wen Y F,He G.Genetic relationships among jujube cultivars suitable for cultivation in South China [J].Journal of Fruit Science,2007,24(5):640-643.(in Chinese)
[27] 申連英.棗(ZiziphusjujubaMill.)遺傳連鎖圖譜構(gòu)建及性狀的QTL定位研究 [D].河北保定:河北農(nóng)業(yè)大學(xué),2005.
Shen L Y.Construction of genetic linkage map and mapping QTLs for some traits in Chinese jujube (ZiziphusjujubaMill.) [D].Baoding,Hebei:Hebei Agricultural University,2005.(in Chinese)
[28] 李 莉,彭建營(yíng),白瑞霞.中國(guó)棗屬植物親緣關(guān)系的SRAP分析 [J].中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué),2009,42(5):1713-1719.
Li L,Peng J Y,Bai R X.Analysis on the genetic relationships of Chinese Ziziphus with SRAP markers [J].Scientia Agricultura Sinica,2009,42(5):1713-1719.(in Chinese)
[29] 李海濤.河南棗主栽品種及灰棗群體遺傳變異分析 [D].河南鄭州:河南農(nóng)業(yè)大學(xué),2008.
Li H T.Analysis of genetic variation in Henan main cultivatedZiziphusjujubavarieties and Z.‘huizao’ population [D].Zhengzhou,Henan:Henan Agricultral University,2008.(in Chinese)
[30] 李繼東,李海濤,馮建燦,等.河南主栽棗品種遺傳關(guān)系的ISSR分析 [J].河南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2012,46(1):36-39.
Li J D,Li H T,Feng J C,et al.Analysis on the genetic relationship of major jujube cultivars in Henan by ISSR markers [J].Journal of Henan Agricultral University,2012,46(1):36-39.(in Chinese)
[31] 梁?jiǎn)?靈寶大棗遺傳多樣性的表型與ISSR分析 [D].河南鄭州:河南農(nóng)業(yè)大學(xué),2010.
Liang Q W.Analysis of genetic diversity inZiziphusjujuba‘Lingbaodazao’ based on morphological and ISSR methods [D].Zhengzhou,Henan:Henan Agricultral University,2010.(in Chinese)
[32] Ellegren H.Microsatellites:Simple sequences with complex evolution [J].Nat Rev Genet,2004,5(6):435-445.
[33] Belaj A,Muoz-Diez C,Baldoni L,et al.Genetic diversity and population structure of wild olives from the north-western Mediterranean assessed by SSR markers [J].Ann Bot-london,2007,100(3):449-458.
[34] De Andrés M T,Benito A,Perez-Rivera G,et al.Genetic diversity of wild grapevine populations in Spain and their genetic relationships with cultivated grapevines [J].Mol Ecol,2012,21(4):800-816.
[35] Lü J,Qi J J,Shi Q X,et al.Genetic diversity and population structure of cucumber (CucumissativusL.) [J].PLoS One,2012,7(10):e46919.
[36] 麻麗穎,孔德倉(cāng),劉華波,等.36份棗品種SSR指紋圖譜的構(gòu)建 [J].園藝學(xué)報(bào),2012,39(4):647-654.
Ma L Y,Kong D C,Liu H B,et al.Construction of SSR fingerprint on 36 Chinese jujube cultivars [J].Acta Horticulturae Sinica,2012,39(4):647-654.(in Chinese)
[37] 王斯琪,唐詩哲,孔德倉(cāng),等.利用SSR標(biāo)記進(jìn)行棗樹子代苗父本鑒定 [J].園藝學(xué)報(bào),2012,39(11):2133-2141.
Wang S Q,Tang S Z,Kong D C,et al.Application of SSR markers for the identification of paternal parent for the seedlings of Chinese jujube [J].Acta Horticulturae Sinica,2012,39(11):2133-2141.(in Chinese)
[38] Chase M W,Hills H H.Silica gel:An ideal material for field preservation of leaf samples for DNA studies [J].Taxon,1991:215-220.
[39] Lian C L,Zhou Z H,Hogetsu T.A simple method for developing microsatellite markers using amplified fragments of inter-simple sequence repeat (ISSR) [J].J Plant Res,2001,114(3):381-385.
[40] Peakall R,Smouse P E.GenAlEx 6.5:Genetic analysis in Excel·Population genetic software for teaching and research-an update [J].Bioinformatics,2012,28(19):2537-2539.
[41] Rohlf F J.NTSYSpc,Numerical taxonomy and multivariate analysis system:Version 2.2 [M].New York:Exeter Software,2005.
[42] Amos W,Hoffman J,Frodsham A,et al.Automated binning of microsatellite alleles:Problems and solutions [J].Mol Ecol Notes,2007,7(1):10-14.
[43] Tamura K,Peterson D,Peterson N,et al.MEGA5:Molecular evolutionary genetics analysis using maximum likelihood,evolutionary distance,and maximum parsimony methods [J].Mol Biol Evol,2011,28(10):2731-2739.
[44] Grant V.The evolutionary process:A critical study of evolutionary theory [M].New York:Columbia University Press,1991.
[45] Frankham R,Briscoe D A,Ballou J D.Introduction to conservation genetics [M].New York:Cambridge University Press,2002:29-62.
[46] Wright S.The interpretation of population structure by F-statistics with special regard to systems of mating [J].Evolution,1965,19:395-420.
[47] 閆 超,劉 平,劉孟軍,等.棗樹的結(jié)實(shí)特性影響因素 [J].林業(yè)科學(xué),2010,46(4):78-86.
Yan C,Liu P,Liu M J,et al.The influencing factors of the fruiting characteristics ofZiziphusjujuba[J].Scientia Silvae Sinicae,2010,46(4):78-86.(in Chinese)
[48] Wright S.Evolution in mendelian populations [J].Genetics,1931,16(2):97-159.
[49] 李 寧.陜北地區(qū)棗樹POD同功酶和核型研究 [D].甘肅蘭州:甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué),2008.
Li N.Studies on peroxidase isozyme and karyotype of jujube varieties in Northern Shaanxi [D].Lanzhou,Gansu:Gansu Agricultural University,2008.(in Chinese)
[50] 齊向英,李 寧,陳宗禮.狗頭棗染色體數(shù)目與核型分析 [J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2008,36(26):11305-11306.
Qi X Y,Li N,Chen Z L.Chromosome number and karyotype analysis of Chinese date Goutouzao [J].Journal of Anhui Agricultural Science,2008,36(26):11305-11306.(in Chinese)
[51] 彭建營(yíng),王永蕙,彭士琪.用花粉形態(tài)鑒定棗品種和酸棗類型 [J].河北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),1992,15(Suppl.):31-34.
Peng J Y,Wang Y H,Peng S Q.Appraisal jujube and wild jujube cultivar type by pollen morphology [J].Journal of Agricultural University of Hebei,1992,15(Suppl.):31-34.(in Chinese)
[52] 王秀伶,邵建柱,張學(xué)英,等.POD同工酶在酸棗、棗分類中的應(yīng)用 [J].武漢植物學(xué)研究,1999,17(4):307-313.
Wang X L,Shao J Z,Zhang X Y,et al.A study on the classification of jujube and wild jujube by peroxidase isozyme [J].Journal of Wuhan Botanical Research,1999,17(4):307-313.(in Chinese)