李長玲，黃翔鵠，江 東，蔡欣維

廣東海洋大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院，湛江 524088

集約化養(yǎng)殖導(dǎo)致池塘環(huán)境的自身污染和生態(tài)失衡，致使水產(chǎn)養(yǎng)殖動物疾病頻繁爆發(fā)，尤其是對蝦養(yǎng)殖越來越困難。為了提高對蝦養(yǎng)殖的成功率，在養(yǎng)殖過程中大量使用化學(xué)藥物來控制疾病的發(fā)生，一些含Cu和Zn等重金屬的化學(xué)藥物由于能殺死有害藻類和控制病原菌增殖而被大量使用，導(dǎo)致養(yǎng)殖環(huán)境的重金屬污染[1-3]，養(yǎng)殖廢水排放致使海洋環(huán)境也受到重金屬的嚴(yán)重污染[4]。水生生物對重金屬具有富集性，以各種方式存在的重金屬在進(jìn)入養(yǎng)殖環(huán)境后會在生物體中存留和積累，并在各生物群落間遷移，通過食物鏈濃縮，從而對生物生長和發(fā)育產(chǎn)生不良影響[5-6]。有研究報道，重金屬脅迫能夠誘導(dǎo)生物體產(chǎn)生堿基改變、DNA 單雙鏈斷裂和染色體改變等DNA 損傷[7-9]；水中的Cu和Zn能夠使對蝦體內(nèi)磷酸酶活性減弱，減少對蝦蛻皮次數(shù)，降低對蝦養(yǎng)殖存活率，產(chǎn)品質(zhì)量下降，甚至造成食品安全隱患[2]。雙齒許水蚤(Pseudodiaptomusdubia)屬于橈足亞綱(Copepoda)、哲水蚤目(Calanoida)、偽鏢水蚤科(Pseudoiaptomidae)、許水蚤屬(Pseudodiaptomus)，是對蝦養(yǎng)殖池塘中常見的浮游動物種類，在蝦池食物鏈中占有重要的位置[10]。關(guān)于雙齒許水蚤發(fā)育生物學(xué)和攝食的研究有相關(guān)報道[11-13]，而對重金屬富集的研究未見報道。本文通過對雙齒許水蚤Cu和Zn富集的動力學(xué)及不同溫度和鹽度條件對富集效果影響的研究，探明雙齒許水蚤對重金屬污染物的富集規(guī)律，為對蝦健康養(yǎng)殖提供理論依據(jù)。

1 材料與方法(Materials and methods)

1.1 材 料

1.1.1 實驗用海水

海水取自湛江市東風(fēng)碼頭海區(qū)，新鮮海水經(jīng)沉淀砂濾、靜置1 d，用350目的篩絹過濾，煮沸消毒冷卻后使用。

1.1.2 雙齒許水蚤采集與純化培養(yǎng)

試驗用的雙齒許水蚤來自湛江市東海島中聯(lián)養(yǎng)殖有限公司對蝦養(yǎng)殖基地的精養(yǎng)蝦池，用浮游生物網(wǎng)采捕，樣品帶回實驗室暫養(yǎng)于容積為50 L塑料桶中馴化培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度條件為28 ℃、光照度為60 μmol·m-2·s-1(L:D=12:12)、鹽度為27，餌料為蛋白核小球藻(Chlorellapyrenoidosa)。

1.2 方 法

1.2.1 富集動力學(xué)實驗

準(zhǔn)確稱取0.3928 g的CuSO4·5H2O、0.4378 g的ZnSO4·7H2O，分別溶解于少量的1 M(mol·L-1)稀硫酸中，再定容成1 L，獲得100 mg·L-1的Cu、Zn標(biāo)準(zhǔn)貯備液溶液。分別量取4 mL Cu、Zn標(biāo)準(zhǔn)貯備液于500 mL三角瓶中，加入經(jīng)處理的海水至400 mL，使實驗水體Cu2+、Zn2+濃度分別為1 mg·L-1。根據(jù)預(yù)實驗結(jié)果，在此實驗濃度下雙齒許水蚤能正常生存。每實驗組設(shè)置3個平行，每瓶加入2 000只雙齒許水蚤。實驗條件為溫度28 ℃，光照度60 μmol·m-2·s-1(L:D=12:12)，鹽度28。動力學(xué)實驗取樣時間為0、2、4、6、8、12、24、36、48 h；實驗過程中每隔2 h搖瓶一次，取樣前搖勻，采用過濾的方法收集樣品，樣品用烘箱在60 ℃的條件下烘干保存。

1.2.2 溫度和鹽度實驗

溫度梯度設(shè)為10、15、20、25、30、35、40 ℃，實驗鹽度為28；鹽度梯度設(shè)為5、10、15、20、25、30、35，實驗溫度為28 ℃。實驗在500 mL三角瓶中進(jìn)行，實驗體積為400 mL，每瓶加入2 000只雙齒許水蚤，置于光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，光照度設(shè)為60 μmol·m-2·s-1(L:D=12:12)，每組設(shè)置3個平行。實驗時間為24 h，每隔2 h搖瓶一次。樣品收集方法同上。

1.2.3 樣品的處理和測定

樣品的消化和測定均按照GB17378.6-2007《海洋監(jiān)測規(guī)范》規(guī)定的方法。樣品中重金屬含量用Hitachi火焰原子吸收分光光度計(型號：Z-5000)進(jìn)行測定。測定過程用Cu標(biāo)準(zhǔn)溶液和Zn標(biāo)準(zhǔn)溶液(國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì))制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出雙齒許水蚤體內(nèi)重金屬的含量。測定結(jié)果以浮游生物中微量元素標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行質(zhì)量控制。

1.2.4 動力學(xué)參數(shù)計算

雙齒許水蚤對重金屬的富集和排出是同時進(jìn)行的過程，可利用雙箱動力學(xué)模型進(jìn)行富集和排出動力學(xué)參數(shù)計算[14]，公式如下：

(1)

(2)

(3)

最大富集量CAmax=BCF×Cw

(4)

其中，K1為生物吸收速率常數(shù)；K2為生物排出速率常數(shù)；Cw為水體污染物濃度(mg·L-1)；CA為生物體內(nèi)污染物濃度(mg·g-1)；C0為生物體內(nèi)污染物初始濃度(mg·g-1)；t為實驗進(jìn)行的時間(h)；t*為富集階段結(jié)束時實驗進(jìn)行的時間(h) 。

1.2.5 生物體內(nèi)重金屬濃度的計算

換算公式[14]：

(5)

式中，X為樣品中的重金屬含量(mg·g-1)；Cl為樣品液中的重金屬含量(mg·L-1)；C0為空白液中的重金屬含量(mg·L-1)；V為樣品消化液定量總體積，即25 mL；d為稀釋倍數(shù)；m為樣品質(zhì)量(g)。

2 結(jié)果(Results)

2.1 雙齒許水蚤對Cu和Zn的富集動力學(xué)

雙齒許水蚤對Cu的富集過程可分為快速、慢速和平衡3個階段，快速富集過程在8 h以前，實驗24 h時其富集達(dá)到平衡(圖1)。

雙齒許水蚤對Zn的富集過程同樣可分為快速、慢速和平衡3個階段，快速富集過程在8 h以前，實驗24 h時其富集達(dá)到富集平衡(圖2)。雙齒許水蚤對Zn快速富集和慢速富集階段的富集量與富集時間近似于線性關(guān)系，分別對其進(jìn)行線性擬合，得線性方程分別為y=0.1914x+0.1705(R2=0.9926)、y=0.0388x+1.3549 (R2=0.9953)。

雙齒許水蚤對Cu和Zn的富集速率常數(shù)表現(xiàn)為k1(Cu)= 0.077

圖1 雙齒許水蚤富集Cu的動力學(xué)曲線Fig. 1 Accumulation dynamics curve of Cu by Pseudodiaptomus dubia

圖2 雙齒許水蚤富集Zn的動力學(xué)曲線Fig. 2 Accumulation dynamics curve of Zn by Pseudodiaptomus dubia

表1 雙齒許水蚤富集Cu和 Zn的動力學(xué)參數(shù)Table 1 Accumulation kinetic parameters of Cu and Zn by Pseudodiaptomus dubia

2.2 溫度對雙齒許水蚤富集Cu和Zn影響

溫度對雙齒許水蚤富集Cu的富集量有顯著影響(F=8.15，p<0.05)，當(dāng)溫度10 ℃、35 ℃和40 ℃時，雙齒許水蚤對Cu的富集均表現(xiàn)出低富集量，當(dāng)溫度為15 ℃時，其富集量比溫度10 ℃時的富集量提高了29.09%(圖3)。多重比較顯示，溫度為15～30 ℃各實驗組的雙齒許水蚤對Cu的富集量顯著高于其他實驗組，雙齒許水蚤富集Cu的最適溫度范圍為15～30 ℃。

溫度對雙齒許水蚤富集Zn的富集量有顯著影響(F=7.67，p<0.05)，當(dāng)溫度10 ℃和40 ℃時，雙齒許水蚤對Zn的富集均表現(xiàn)出低富集量，當(dāng)溫度為15 ℃時，其富集量相對于溫度10 ℃時的富集量提高了27.46%(圖4)。多重比較顯示，溫度為15～35 ℃各實驗組的雙齒許水蚤對Zn的富集量顯著高于其他實驗組，雙齒許水蚤富集Zn的最適溫度范圍為15～35 ℃。

2.3 鹽度對雙齒許水蚤富集Cu和Zn影響

在實驗鹽度范圍內(nèi)，鹽度對雙齒許水蚤富集Cu的富集量沒有顯著影響(F=2.25，p>0.05)，各實驗組雙齒許水蚤富集Cu的富集量平均為0.34 mg·g-1，均表現(xiàn)出較高的富集量(圖5)。

圖3 不同溫度下雙齒許水蚤對Cu的富集量Fig. 3 The accumulation of Cu by Pseudodiaptomus dubia at different temperature

圖4 不同溫度下對雙齒許水蚤對Zn的富集量Fig. 4 The accumulation of Zn by Pseudodiaptomus dubia at different temperature

鹽度對雙齒許水蚤富集Zn的富集量有顯著影響(F=16.00，p<0.01)，隨著鹽度的增加，雙齒許水蚤對Zn的富集量呈現(xiàn)出先增加后減小的趨勢。當(dāng)鹽度達(dá)到25時，富集量達(dá)到最大，為2.54 mg·g-1；鹽度增加到40，富集量下降到最低，為1.07 mg·g-1(圖6)。多重比較結(jié)果顯示，鹽度為10～35范圍的各實驗組的富集量均顯著高于其他實驗組，雙齒許水蚤富集Zn的適鹽度范圍為10～35。

圖5 不同鹽度下雙齒許水蚤對Cu的富集量Fig. 5 The accumulation of Cu by Pseudodiaptomus dubia at different salinity

圖6 不同鹽度下雙齒許水蚤對Zn的富集量Fig. 6 The accumulation of Zn by Pseudodiaptomus dubia at different salinity

3 討論(Discussion)

3.1 雙齒許水蚤對Cu和Zn的富集及其動力學(xué)

浮游動物主要通過3種途徑富集重金屬：(1)從周圍水環(huán)境中直接富集重金屬，富集量在不同動物和金屬種類間存在較大差異，如浮游動物體內(nèi)的Zn有90%都來自周圍水環(huán)境，但是通過這種方式對Cd和Se的積累卻很少；(2)食物同化，即食物鏈傳遞，食物同化在很大程度上依賴于食物種類或食物中金屬含量和形態(tài)；(3)生殖傳遞，通過這種方式傳遞的只有少數(shù)特定的金屬，如生命活動必需金屬，如硒、鋅等，非必需金屬，如汞/甲基汞等，傳遞給下一代的能力很強，而對于Cd卻不能通過此種方式遷移[15-17]。本實驗研究表明，雙齒許水蚤直接從水環(huán)境中富集Cu和Zn，達(dá)到富集平衡時的富集量分別為0.454 mg·g-1和2.412 mg·g-1，對Zn的最大富集量大于Cu，這與大型溞(Daphniamagna)對Zn最大富集量大于Cu的結(jié)果相似[15]。生物富集速率常數(shù)k1代表了生物吸收金屬的快慢程度，水環(huán)境中金屬濃度一定的條件下，BCF可以表示生物對金屬的富集能力。郭遠(yuǎn)明[14]研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)環(huán)境周圍的金屬離子濃度相同時，單齒螺(Monodontalabio)對Cu和Pb的富集動力學(xué)參數(shù)k1(Cu)>k1(Pb)，表明單齒螺對Cu的富集比Pb快，而BCF(Cu)

3.2 溫度對雙齒許水蚤富集重金屬的影響

浮游動物對金屬富集受到各種環(huán)境因素的影響，如酸堿度、硬度、金屬離子濃度和溫度[16,18]。溫度對浮游動物、淡水蚌、海水貝類和蝦類等水生動物富集金屬均有影響[19-20]。溫度不僅會影響水生動物生理和新陳代謝，而且對富集或排除污染物的路徑和效率有很大影響。Tsui等[21]研究發(fā)現(xiàn)，溫度會影響大型溞對環(huán)境中Hg的富集，該水蚤在14 ℃下對汞和甲基汞的富集率比在24 ℃分別降低了32%、73%。Heugens等[18]研究發(fā)現(xiàn)，在沒有進(jìn)行馴化的情況下，溫度從10 ℃上升到26 ℃，浮游動物對Cd富集顯著增加。此外，溫度對重金屬離子的吸收還與金屬或生物種類有關(guān)，如隨著溫度增加，淡水等足類動物對Cd和Cu富集增加，而對Pb和Zn的富集并沒有增加[22]。本實驗結(jié)果顯示，當(dāng)溫度為10～15 ℃時，雙齒許水蚤對Cu和Zn的富集量顯著上升(p<0.05)，與溫度成正相關(guān)，與Heugens等[18]人的研究結(jié)果一致。雙齒許水蚤對Cu和Zn富集的最適溫度范圍為15～30 ℃。亞熱帶地區(qū)對蝦養(yǎng)殖池塘的溫度范圍一般在20～30 ℃，因此，在我國華南地區(qū)對蝦養(yǎng)殖池塘中雙齒許水蚤對Cu和Zn有較強富集能力。

3.3 鹽度對雙齒許水蚤富集重金屬的影響

鹽度變化會影響水生生物正常的生命活動，也能使水體金屬形態(tài)和離子間的相互作用發(fā)生變化，從而影響金屬的生物可利用性[23]。Phillips等[24]研究發(fā)現(xiàn)，不同鹽度對貽貝(Mytilusedulis)累積Zn沒有影響，而隨著鹽度的升高而降低，貽貝對Pb的累積會增加，對Cd和Cu的累積反而降低。Denton等[23]研究表明鹽度對棘刺牡蠣(Saccastreaechinata)累積Cd和Pb有顯著的影響，低鹽度組牡蠣的Cd和Pb含量明顯地高于高鹽度組。Isaac等[25]研究發(fā)現(xiàn)，隨著水環(huán)境中Na+濃度的增加，競爭富集顯著降低大型溞對Ag+的富集量。本實驗結(jié)果表明，在一定濃度范圍內(nèi)，鹽度對雙齒許水蚤Cu的富集沒有顯著影響，但均有較強的富集能力；鹽度對雙齒許水蚤Zn的富集影響顯著，其富集強度與鹽度成正相關(guān)，富集適宜的鹽度范圍為10～35，當(dāng)鹽度為40時，雙齒許水蚤對Zn2+富集顯著下降，這與Isaac[20]的研究結(jié)果一致。對蝦養(yǎng)殖的鹽度范圍為10～30，在此條件下，池塘中浮游動物對重金屬具有較強的富集能力。

3.4 雙齒許水蚤在蝦池水質(zhì)調(diào)控中的應(yīng)用

雙齒許水蚤是廣東沿海對蝦養(yǎng)殖池塘中常見的一種浮游動物優(yōu)勢，作為對蝦養(yǎng)殖池塘食物鏈中的重要的中間類群，對于保持池塘生物種群動態(tài)平衡、改善養(yǎng)殖水質(zhì)起著重要作用[11]。溫度和鹽度均是引起橈足類生理活動變化重要的因素，有研究表明，溫度為25～30 ℃時，雙齒許水蚤的攝食率和孵化率均處于最佳狀態(tài)；雙齒許水蚤最佳的攝食鹽度為25～30，但鹽度對孵化率沒有顯著影響[12-13]。亞熱帶地區(qū)蝦池的溫度和鹽度均能滿足雙齒許水蚤生存的需求，且在溫度為15～30 ℃，鹽度為10～30條件下，雙齒許水蚤對Cu和Zn均有較高的富集量。在對蝦養(yǎng)殖期間，當(dāng)養(yǎng)殖環(huán)境受到重金屬污染時，幼蝦攝食富集重金屬的雙齒許水蚤，這些金屬就可以傳遞到對蝦體內(nèi)，并在體內(nèi)積累，造成食品安全隱患。因此，被重金屬污染的養(yǎng)殖水體，可通過循環(huán)過濾的方式去除雙齒許水蚤等浮游動物，減少對蝦對浮游動物的攝食和蝦體中重金屬的積累，從而降低食品安全隱患。這些研究成果對對蝦的健康養(yǎng)殖具有重要的理論意義和應(yīng)用價值。

參考文獻(xiàn)：

[1] 黃翔鵠, 魏少紅, 周美華. 條紋小環(huán)藻對Cu2+, Zn2+耐受力和吸附作用的研究[J]. 臺灣海峽, 2011, 30(1): 36-42

Huang X H, Wei S H, Zhou M H. Absorption and toleration of Cu2+and Zn2+byCyclotellastriata[J]. Journal of Oceanography in Taiwan Strait, 2011, 30(1): 36-42 (in Chinese)

[2] 江東, 李長玲, 黃翔鵠. 波吉卵囊藻(Oocystisborgei)對Cu2+、Zn2+吸附研究[J]. 廣東海洋大學(xué)學(xué)報, 2011, 31(6): 60-65

Jiang D, Li C L, Huang X H. Assimilation of Cu2+and Zn2+in a micro-alga (Oocystisborgei) [J]. Journal of Zhanjiang Ocean University, 2011, 31(6): 60-65 (in Chinese)

[3] 張怡, 夏繼剛, 曹振東, 等. 銅對中華倒刺鲃幼魚的急性致毒效應(yīng)[J]. 重慶師范大學(xué)學(xué)報, 2013, 30(4): 15-21

Zhang Y, Xia J G, Cao Z D, et al. Acute toxic effects of Cu2+on juvenile Qingbo,Spinibarbussinensis[J]. Journal of Chongqing Normal University (Natural Science Edition), 2013, 30(4): 15-21 (in Chinese)

[4] 張瑞, 張帆, 劉付程, 等. 海州灣潮灘重金屬污染的歷史記錄[J]. 環(huán)境科學(xué), 2013, 34(3): 1044-1054

Zhang R, Zhang F, Liu F C, et al. History of heavy metal pollution from tidal flat in Haizhou Bay [J]. Environmental Science, 2013, 34(3): 1044-1054 (in Chinese)

[5] 郭遠(yuǎn)明, 劉琴, 顧捷, 等. 4種海洋貝類對海水中銅(Cu)的富集能力[J]. 水產(chǎn)學(xué)報, 2012, 36(5): 708-713

Guo Y M, Liu Q, Gu J, et al. The research of copper enrichment in four types of shellfish [J]. Journal of Fisheries of China, 2012, 36(5): 708-713 (in Chinese)

[6] 霍禮輝, 林志華, 尤仲杰, 等. 泥蚶不同組織器官對重金屬( Cu, Pb, Cd)的富集規(guī)律[J]. 海洋環(huán)境科學(xué), 2012, 31(3): 395-399

Huo L H, Lin Z H, You Z J, et al. Accumulation mechanism of heavy metals (Cu, Pb, Cd) in different tissues ofTegillarcagranosa[J]. Marine Environmental Science, 2012, 31(3): 395-399 (in Chinese)

[7] 陳慧男, 胡大鵬, 陳琛, 等. 分子標(biāo)志物在監(jiān)測植物重金屬污染中的應(yīng)用[J]. 杭州師范大學(xué)學(xué)報: 自然科學(xué)版, 2013, 12(4): 319-322

Chen H N, Hu D P, Chen C, et al. The application of molecular markers in monitoring plants suffering heavy metal pollution [J]. Journal of Hangzhou Normal University (Natural Sciences Edition), 2013, 12(4): 319-322 (in Chinese)

[8] Monteiro V, Cavalcante D G, Vilela M B, et al. In vivo and invitro exposures for the evaluation of the genotoxic effects of lead on the Neotropical freshwater fishProchiloduslineatus[J]. Aquatic Toxicology, 2011, 104(3-4): 291-298

[9] 唐建勛, 唐奕揚, 孫紅祥, 等. 重金屬Cu2+, Pb2+單因子及聯(lián)合毒性對泥鰍卵細(xì)胞DNA的損傷效應(yīng)[J]. 水生生物學(xué)報, 2013, 37(3): 501-506

Tang J X, Tang Y Y, Sun H X, et al. Effects of Cu2+and Pb2+(single factor and joint toxicity) on DNA damage inMisgurnusanguillicaudatusoocytes [J]. Acta Hydrobiologica Sinica, 2013, 37(3): 501-506 (in Chinese)

[10] 趙文. 水生生物學(xué)[M]. 北京: 中國農(nóng)業(yè)出版社, 2005: 205-225

[11] Li C L, Luo X X, Huang X H, et al. Influences of temperature on development and survival, reproduction and growth of a calanoid copepod (Pseudodiaptomusdubia) [J]. The Scientific World Journal, 2009, 96(9): 866--879

[12] 羅曉霞, 黃翔鵠, 洪騰. 食物類型和濃度對雙齒許水蚤攝食的影響[J]. 廣東海洋大學(xué)學(xué)報, 2008, 28(3): 39-44

Luo X X, Huang X H, Hong T. Effect of type and density of feed on ingestion characteristics ofSchmackeriadubin[J]. Journal of Zhanjiang Ocean University, 2008, 28(3): 39-44 (in Chinese)

[13] Li C L, Luo X X, Huang X H, et al. Effects of temperature, salinity, pH, and light on filtering and grazing rates of a calanoid copepod (Schmackeriadubia) [J]. The Scientific World Journal, 2008, 153(8): 1219-1227

[14] 郭遠(yuǎn)明. 海洋貝類對水體中重金屬的富集能力研究[D]. 青島: 中國海洋大學(xué), 2008: 5

Guo Y M. The study about bioconcentration ability of seashell to heavy metal [D]. Qingdao: Ocean University of China, 2008: 5 (in Chinese)

[15] Yu R Q, Wang W X. Trace metal assimilation and release budget inDaphniamagna[J]. Limnology and Oceanography, 2002, 47(2): 495-504

[16] Yu R Q, Wang W X. Kinetic uptake of bio-available cadmium, selenium, and zinc byDaphniamagna[J]. Environ Toxicol Chem, 2002, 21: 2348-2355

[17] Guan R, Wang W X. Dietary assimilation and elimination of Cd, Se, and Zn byDaphniamagnaat different metal concentrations [J]. Environmental Toxicology and Chemistry, 2004, 23(11): 2689-2698

[18] Heugens E H W, Jager T, Creyghton R, et al. Temperature-dependent effects of cadmium onDaphniamagna: Accumulation versus sensitivity [J]. Environmental Science & Technology, 2003, 37(10): 2145-2151

[19] Boudou A, Ribeyre F. Comparative study of the trophic transfer of two mercury compounds-HgCl2and CH3HgCl-betweenChlorellavulgarisandDaphniamagnainfluence of temperature [J]. Bulletin of Environmental Contamination and Toxicology, 1981, 27: 624-629

[20] Fowler S W, Heyraud M, La Rosa J. Factors affecting methyl and inorganic mercury dynamics in mussels and shrimp [J]. Marine Biology, 1978, 46(3): 267-276

[21] Tsui M T K, Wang W X. Temperature influences on the accumulation and elimination of mercury in a freshwater cladoceran,Daphniamagna[J]. Aquatic Toxicology, 2004, 70(3): 245-256

[22] Van Hattum B, Korthals G, Van Straalen N M, et al. Accumulation patterns of trace metals in freshwater isopods in sediment bioassays-influence of substrate characteristics, temperature and pH [J]. Water Research, 1993, 27(4): 669-684

[23] Denton G R W, Burdon-Jones C. Influence of temperature and salinity on the uptake, distribution and depuration of mercury, cadmium and lead by the black-lip oysterSaccostreaechinata[J]. Marine Biology, 1981, 64(3): 317-326

[24] Phillips D J H, Segar D A. Use of bio-indicators in monitoring conservative contaminate programme design imperatives [J]. Marine Pollution Bulletin, 1986, 17(1): 10-17

[25] Isaac K S L, Wang W X. Accumulation and elimination of aqueous and dietary silver inDaphniamagna[J]. Chemosphere, 2006, 64(7): 26-35