袁根良，蔣麗，殷光玲，黃遠英

（湯臣倍健股份有限公司，廣東廣州510663）

輔酶Q10軟膠囊增強免疫力功能的試驗研究

袁根良，蔣麗，殷光玲，黃遠英

（湯臣倍健股份有限公司，廣東廣州510663）

分別以33.5、67.0、134.0mg/kg·BW（相當于人體推薦用量5、10、20倍）劑量的輔酶Q10軟膠囊給小鼠連續(xù)灌胃30 d，分別測定ConA誘導的小鼠淋巴細胞轉(zhuǎn)化功能、小鼠的遲發(fā)型變態(tài)反應、小鼠抗體生成和溶血素水平、單核-巨噬細胞碳廓清能力、腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞能力以及NK細胞活性。結(jié)果顯示輔酶Q10軟膠囊能促進小鼠的脾淋巴細胞增殖、轉(zhuǎn)化作用，促進小鼠的抗體生成細胞增殖，提高小鼠的血清溶血素水平，促進小鼠的遲發(fā)型變態(tài)反應及其單核-巨噬細胞的吞噬功能，因此，可判定輔酶Q10軟膠囊具有增強小鼠免疫力的作用。

輔酶Q10；軟膠囊；增強免疫力；小鼠

輔酶Q10是脂溶性醌類化合物，廣泛存在于酵母、植物葉子、種子以及動物的心臟、肝臟和腎臟中[1]。在人體中以組織器官中濃度較高，如肝、心、腎、胰臟等，其總含量為0.5 g～1.5 g。輔酶Q10作為生物體內(nèi)細胞產(chǎn)生能量的重要酶以及重要代謝反應的底物和作為細胞代謝激活劑，輔酶Q10具有預防和治療各種類型心血管疾病，改善小兒心肌炎及心臟功能，抗氧化功能，提高精力和腦力，保護牙齦健康，協(xié)助治療癌癥等多種生理功能[2-5]。目前，輔酶Q10作為一種新型的具重大醫(yī)學價值的生化藥物或開發(fā)作為保健食品的良好材料。近年來，有學者觀察到，輔酶Q10對于惡性腫瘤、AIDS和潰瘍患者的癥狀均有一定的改善作用，于是提出輔酶Q10還具有增強免疫力的作用[6-7]。本文對輔酶Q10軟膠囊進行增強免疫力功能試驗研究，同時參照規(guī)定《保健食品檢驗與評價技術(shù)規(guī)范》[8]進行試驗，初步研究輔酶Q10軟膠囊增強免疫力的功效，為輔酶Q10在增強免疫力保健食品類的開發(fā)提供理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 樣品

輔酶Q10軟膠囊，規(guī)格400mg/粒。人口服推薦量為每人每日1次，每次1粒，成人體重按60 kg計算，折合劑量為6.7mg/kg。

1.2 實驗動物與分組

SPF級健康昆明種雄性小鼠240只，體重為18 g～22 g：由廣西醫(yī)科大學醫(yī)學實驗動物中心提供（SCXK（桂）2009-0002）。每40只小鼠為1組，共6組。免疫Ⅰ組，進行ConA誘導鼠脾淋巴細胞轉(zhuǎn)化實驗；免疫Ⅱ組，進行遲發(fā)型變態(tài)反應實驗；免疫Ⅲ組，進行體比值測定，血清溶血素測定和抗體生成細胞數(shù)測定；免疫Ⅳ-Ⅵ組，分別進行碳實驗、腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞實驗和NK細胞活性測定。

1.3 主要儀器與試劑

二氧化碳培養(yǎng)箱：日本三洋；紫外可見分光光度計：島津有限公司；酶標儀：美國寶特；等。

綿羊紅細胞（SRBC）、Hankˊs液（pH 7.2-7.4）、RPMI1640培養(yǎng)液、小牛血清、ConA、吩嗦二甲酯硫酸鹽、氧化型輔酶I等。

1.4 劑量選擇與受試物給予方式

根據(jù)人口服推薦用量，設樣品低、中、高劑量組分別33.5、67.0、134.0mg/kg·BW（分別相當于人體推薦用量的5、10、20倍），設一個陰性對照組，每組10只動物。分別稱取Q10軟膠囊內(nèi)容物0.34，0.67，1.34 g各加玉米胚芽油至200mL，混勻、配成1.675、3.350、6.700mg/mL濃度溶液，按2mL/10BW的體積給予相應劑量組動物灌胃，陰性對照組予以等體積的玉米胚芽油，每天灌胃一次，連續(xù)灌胃30 d。

1.5 實驗方法

1.5.1 臟器/體重比值測定

稱重后處死小鼠，取出胸腺和脾臟，在電子分析天平上稱重，計算臟/體比值。

1.5.2 其他免疫指標的測定

根據(jù)《保健食品檢驗與評價技術(shù)規(guī)范》-2003免疫功能檢測的程序，分別測定下列各項免疫指標：ConA誘導的小鼠脾淋巴細胞轉(zhuǎn)化實驗（MTT法）、二硝基氟苯誘導的小鼠DTH實驗（耳腫脹法）、抗體生成細胞檢測（Jerne改良玻片法）、血清溶血素的測定（血凝法）、小鼠碳廓清實驗、NK細胞活性測定（乳酸脫氫酶測定法）。

1.6 實驗數(shù)據(jù)統(tǒng)計

應用SPSS統(tǒng)計軟件進行方差分析統(tǒng)計處理。

1.7 結(jié)果判定

根據(jù)《保健食品檢驗與評價技術(shù)規(guī)范》增強免疫力功效的判定標準，在細胞免疫功能、體液免疫功能、單核-巨噬細胞功能、NK細胞活性四方面任兩個方面結(jié)果陽性，可判定該受試樣品具有增強免疫力功能作用。

2 試驗結(jié)果

2.1 輔酶Q10軟膠囊對小鼠體重的影響

不同劑量輔酶Q10軟膠囊增強免疫力功能試驗對小鼠體重的影響，結(jié)果見表1和表2。

表1 不同劑量輔酶Q10軟膠囊增強免疫力功能試驗對小鼠（免疫Ⅰ組）體重的影響（±s）Table1 Enhance immunity function test effect on body weight in mice of different doses of Coenzyme Q10 soft capsule（±s）

表1 不同劑量輔酶Q10軟膠囊增強免疫力功能試驗對小鼠（免疫Ⅰ組）體重的影響（±s）Table1 Enhance immunity function test effect on body weight in mice of different doses of Coenzyme Q10 soft capsule（±s）

（mg/kg·BW）動物數(shù)初始體重/g劑量組/中期體重/g末期體重/g增重/g 134.0 10 20.1±1.3 30.9±1.0 43.1±1.6 23.0±2.0 67.0 10 19.7±1.2 30.0±0.8 40.7±1.7 21.1±2.5 33.5 10 20.2±1.3 32.0±1.0 42.8±1.8 22.5±2.6陰性對照10 19.9±1.2 31.0±1.1 41.9±1.8 22.0±2.2

表2 不同劑量輔酶Q10軟膠囊增強免疫力功能試驗對小鼠（免疫Ⅱ組）體重的影響（±s）Table2 Enhance immunity function test effect on body weight in mice of different doses of Coenzyme Q10 soft capsule（±s）

表2 不同劑量輔酶Q10軟膠囊增強免疫力功能試驗對小鼠（免疫Ⅱ組）體重的影響（±s）Table2 Enhance immunity function test effect on body weight in mice of different doses of Coenzyme Q10 soft capsule（±s）

（mg/kg·BW）動物數(shù)初始體重/g劑量組/中期體重/g末期體重/g增重/g 134.0 10 20.2±1.3 29.9±1.3 40.8±1.6 20.6±1.4 67.0 10 19.9±1.1 30.5±1.2 41.5±1.7 21.6±1.4 33.5 10 19.7±1.3 32.1±1.2 43.5±1.8 23.8±2.0陰性對照10 20.3±1.1 31.2±1.2 42.5±1.9 22.2±2.0

由表1和表2可見，不同免疫組的實驗初期、實驗中期、實驗末期樣品各劑量組的小鼠體重及實驗期間小鼠的體重增長與陰性對照組間的比較，差異均無顯著性（P＞0.05），表明該樣品對小鼠的體重增長無明顯影響。2.2輔酶Q10軟膠囊對小鼠免疫器官臟器/體重比值的影響

不同劑量的輔酶Q10軟膠囊增強免疫力功能試驗小鼠的免疫器官臟器/體重比值，結(jié)果見表3。

表3 不同劑量輔酶Q10軟膠囊增強免疫力功能試驗小鼠的免疫器官臟器/體重比值（±s）Table3 Enhance immunity function test mice immune organ viscera weight/body weight ratio of different doses of Coenzyme Q10 soft capsule

表3 不同劑量輔酶Q10軟膠囊增強免疫力功能試驗小鼠的免疫器官臟器/體重比值（±s）Table3 Enhance immunity function test mice immune organ viscera weight/body weight ratio of different doses of Coenzyme Q10 soft capsule

劑量組/（mg/kg·BW）動物數(shù)胸腺/體重/%P值脾臟/體重/%P值134.0 10 0.208±0.016 0.340 0.392±0.049 0.892 67.0 10 0.214±0.019 0.884 0.393±0.023 0.897 33.5 10 0.215±0.013 0.952 0.406±0.050 0.998陰性對照10 0.218±0.015—0.403±0.039—

由表3可見，經(jīng)口給予小鼠不同劑量的輔酶Q10軟膠囊30 d，小鼠的胸腺/體重及脾臟/體重比值與陰性對照組比較，均無顯著性差異（P＞0.05），表明該樣品對小鼠的免疫器官重量無明顯影響。

2.3 輔酶Q10軟膠囊對小鼠的細胞免疫的影響

2.3.1 輔酶Q10軟膠囊對ConA誘導的小鼠脾淋巴細胞轉(zhuǎn)化能力的影響

不同劑量輔酶Q10軟膠囊對小鼠脾淋巴細胞轉(zhuǎn)化實驗，結(jié)果見表4。

表4 不同劑量輔酶Q10軟膠囊的小鼠脾淋巴細胞轉(zhuǎn)化實驗結(jié)果（±s）Table4 Mouse spleen lymphocyte transformation test results of different doses of coenzyme Q10 soft capsule（±s）

表4 不同劑量輔酶Q10軟膠囊的小鼠脾淋巴細胞轉(zhuǎn)化實驗結(jié)果（±s）Table4 Mouse spleen lymphocyte transformation test results of different doses of coenzyme Q10 soft capsule（±s）

劑量組/（mg/kg·BW）動物數(shù)淋巴細胞增值能力（OD值）P值134.0 10 0.226±0.136 0.011 67.0 10 0.161±0.074 0.304 33.5 10 0.156±0.099 0.371陰性對照10 0.097±0.039—

從表4可見，經(jīng)口給予小鼠不同劑量的輔酶Q10軟膠囊30 d，各劑量組小鼠的淋巴細胞轉(zhuǎn)化能力均高于陰性對照組，其中的高劑量組與陰性對照組的差異具有顯著性（P＞0.05），表明該樣品具有促進小鼠的淋巴細胞增值、轉(zhuǎn)化能力的作用。

2.3.2 輔酶Q10軟膠囊對小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應（DTH）的影響

不同劑量輔酶Q10軟膠囊對小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應（DTH）的影響，結(jié)果見表5。

表5 不同劑量輔酶Q10軟膠囊的小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應（DTH）實驗結(jié)果（±s）Table5 Mouse delayed type hypersensitivity（DTH）test results of different doses of coenzyme Q10 soft capsule（±s）

表5 不同劑量輔酶Q10軟膠囊的小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應（DTH）實驗結(jié)果（±s）Table5 Mouse delayed type hypersensitivity（DTH）test results of different doses of coenzyme Q10 soft capsule（±s）

劑量組/（mg/kg·BW）動物數(shù)左右耳片重量差值/mg P值134.0 10 12.13±2.23 0.002 67.0 10 10.05±1.60 0.385 33.5 10 9.61±2.54 0.710陰性對照10 8.83±1.30—

從表5可見，經(jīng)口給予小鼠不同劑量的輔酶Q10軟膠囊30 d，各劑量組于小鼠的左右耳片重量差值均高于陰性對照組，其中的高劑量組與陰性對照組的差異具有非常顯著性（P＜0.01），表明該樣品具有促進小鼠的遲發(fā)型變態(tài)反應的作用。

2.4 輔酶Q10軟膠囊對小鼠的體液免疫的影響

2.4.1 輔酶Q10軟膠囊對小鼠的抗體生成細胞數(shù)的影響

不同劑量組輔酶Q10軟膠囊對小鼠的抗體生成細胞數(shù)的影響，結(jié)果見表6。

表6 不同劑量輔酶Q10軟膠囊的抗體生成細胞檢測實驗結(jié)果（±s）Table6 Detection of antibody-producing cells results of different doses of coenzyme Q10 soft capsule（±s）

表6 不同劑量輔酶Q10軟膠囊的抗體生成細胞檢測實驗結(jié)果（±s）Table6 Detection of antibody-producing cells results of different doses of coenzyme Q10 soft capsule（±s）

劑量組/（mg/kg·BW）動物數(shù)溶血空斑數(shù)（1×10/106脾細胞）P值134.0 10 254.0±63.8 0.001 67.0 10 224.0±43.0 0.024 33.5 10 207.0±59.5 0.119陰性對照10 159.0±39.3-

從表6可見，經(jīng)口給予小鼠不同劑量的輔酶Q10軟膠囊30 d，各劑量組小鼠的抗體生成細胞數(shù)均高于陰性對照組，其中的高、中劑量組與陰性對照組的差異具有顯著性（分別P＜0.01和P＜0.05），表明該樣品具有促進小鼠的抗體生成細胞增殖的作用。

2.4.2 輔酶Q10軟膠囊對小鼠血清溶血素的影響

不同劑量組輔酶Q10軟膠囊對小鼠血清溶血素的影響，結(jié)果見表7。

表7 不同劑量輔酶Q10軟膠囊的小鼠溶血素測定結(jié)果（±s）Table7 Hemolysin measurement results of different doses of coenzyme Q10 soft capsule（±s）

表7 不同劑量輔酶Q10軟膠囊的小鼠溶血素測定結(jié)果（±s）Table7 Hemolysin measurement results of different doses of coenzyme Q10 soft capsule（±s）

劑量組/（mg/kg·BW）動物數(shù)抗體積數(shù)P值134.0 10 206.4±13.9 0.033 67.0 10 193.4±22.8 0.318 33.5 10 192.9±36.7 0.341陰性對照10 176.1±24.3-

從表7可見，經(jīng)口給予小鼠不同劑量的輔酶Q10軟膠囊30 d，各劑量組的小鼠的抗體積數(shù)均高于陰性對照組，其中的高劑量組與陰性對照組的差異具有顯著性（P＜0.05），表明該樣品具有提高小鼠的血清溶血素水平的作用。

2.5 輔酶Q10軟膠囊對小鼠的單核-巨噬細胞吞噬功能的影響

2.5.1 輔酶Q10軟膠囊對小鼠的單核-巨噬細胞碳廓清的影響

不同劑量組輔酶Q10軟膠囊對小鼠的單核-巨噬細胞碳廓清的影響，結(jié)果見表8。

表8 不同劑量輔酶Q10軟膠囊的小鼠單核-巨噬細胞碳廓清實驗結(jié)果（±s）Table8 Coenzyme Q10 Mouse monocyte-macrophage carbon clearance test results of different doses of coenzyme Q10 soft capsule（±s）

表8 不同劑量輔酶Q10軟膠囊的小鼠單核-巨噬細胞碳廓清實驗結(jié)果（±s）Table8 Coenzyme Q10 Mouse monocyte-macrophage carbon clearance test results of different doses of coenzyme Q10 soft capsule（±s）

劑量組/（mg/kg·BW）動物數(shù)吞噬指數(shù)P值134.0 10 8.33±1.22 0.020 67.0 10 7.13±1.35 0.868 33.5 10 7.05±1.30 0.937陰性對照10 6.79±0.90-

從表8可見，經(jīng)口給予小鼠不同劑量的輔酶Q10軟膠囊30 d，各劑量組小鼠的吞噬指數(shù)均高于陰性對照組，其中的高劑量組與陰性對照組的差異具有顯著性（P＜0.05），表明該樣品具有促進小鼠的單核-巨噬細胞碳廓清功能的作用。

2.5.2 輔酶Q10軟膠囊對小鼠的腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞能力的影響

不同劑量組輔酶Q10軟膠囊對小鼠的腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞能力的影響，結(jié)果見表9。

表9 不同劑量輔酶Q10軟膠囊的小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞實驗結(jié)果（±s）Table9 Mouse peritoneal macrophage phagocytic results of different doses of coenzyme Q10 soft capsule（±s）

表9 不同劑量輔酶Q10軟膠囊的小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞實驗結(jié)果（±s）Table9 Mouse peritoneal macrophage phagocytic results of different doses of coenzyme Q10 soft capsule（±s）

劑量組/（mg/kg·BW）動物數(shù)吞噬率/ %吞噬率數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換P值吞噬指數(shù)P值134.0 10 23.6±3.4 0.506±0.040 0.041 0.46±0.08 0.001 67.0 10 20.9±3.7 0.473±0.046 0.877 0.41±0.07 0.087 33.5 10 21.8±3.0 0.485±0.037 0.443 0.39±0.08 0.208陰性對照10 20.0±2.1 0.463±0.027-0.34±0.05-

從表9可見，經(jīng)口給予小鼠不同劑量的輔酶Q10軟膠囊30 d，樣品各劑量組小鼠的腹腔巨噬細胞對雞紅細胞的吞噬率及吞噬指數(shù)均高于陰性對照組，其中的高劑量的吞噬率和吞噬指數(shù)與陰性對照組的差異具有顯著性（分別P＜0.05和P＜0.01），表明該樣品具有促進小鼠的腹腔巨噬細胞的吞噬功能的作用。

2.6 輔酶Q10軟膠囊對小鼠的NK細胞活性的影響

不同劑量組輔酶Q10軟膠囊對小鼠的NK細胞活性的影響，結(jié)果見表10。

表10 不同劑量輔酶Q10軟膠囊的小鼠NK細胞活性測定結(jié)果（±s）Table10 NK cell activity assay results in mice of different doses of coenzyme Q10 soft capsules（±s）

表10 不同劑量輔酶Q10軟膠囊的小鼠NK細胞活性測定結(jié)果（±s）Table10 NK cell activity assay results in mice of different doses of coenzyme Q10 soft capsules（±s）

劑量組/（mg/kg·BW）動物數(shù)NK細胞活性/%NK細胞活性轉(zhuǎn)換數(shù)據(jù)P值134.0 10 34.21±8.25 0.622±0.088 0.058 67.0 10 29.69±8.22 0.573±0.090 0.579 33.5 10 28.64±5.34 0.563±0.058 0.761陰性對照10 26.08±7.72 0.533±0.093-

從表10可見，經(jīng)口給予小鼠不同劑量的輔酶Q10軟膠囊30 d，樣品各劑量組小鼠的NK細胞活性均高于陰性對照組，但各劑量組與陰性對照組的差異均無顯著性（P＜0.05），表明該樣品對小鼠的NK細胞活性無明顯的提高作用。

3 結(jié)論

1）分別以33.5、67.0、134.0mg/kg·BW（相當于人體推薦用量5、10、20倍）劑量的輔酶Q10軟膠囊給小鼠連續(xù)灌胃30 d，能促進小鼠的脾淋巴細胞增殖、轉(zhuǎn)化作用，促進小鼠的抗體生成細胞增殖，提高小鼠的血清溶血素水平，促進小鼠的遲發(fā)型變態(tài)反應及其單核-巨噬細胞的吞噬功能，對小鼠的體重增長、胸腺/體重比值、脾臟/體重比值及其NK細胞活性無明顯影響。根據(jù)《保健食品檢驗與評價技術(shù)規(guī)范》，可判定大豆異黃酮復合膠囊具有抗氧化功能作用。

2）本研究觀察到，輔酶Q10軟膠囊對小鼠免疫功能有明顯的增強作用。這與彭亮等[6]研究的結(jié)果是一致的，說明輔酶Q10軟膠囊是一個很好的具有增強免疫力功能的保健食品?，F(xiàn)有研究報道[9]口服輔酶Q10可有效緩解慢性支氣管炎與哮喘，口服輔酶Q10患者其淋巴細胞轉(zhuǎn)化率和血清IgG水平較治療前有不同程度的升高，這與輔酶Q10軟膠囊具有增強免疫力功能可能都有關(guān)，可作為下一步的研究重點。

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Experimental Study on Effect of Coenzyme Q10 Soft Capsule on the Strengthen Immune Function

YUAN Gen-liang，JIANG Li，YIN Guang-ling，HUANG Yuan-ying
（By-health Co.，Ltd，Guangzhou 510663，Guangdong，China）

Coenzyme Q10 soft capsule were consecutively orally given tomice with the doses of 33.5，67，134mg/kg·bw（5，10，20 times to the recommended human dosage）for30d.The spleen lymphocyte transformation efficiency，delayed type hypersensitivity，antibody-producing，Monocyte-macrophage carbon clearance ability，Peritoneal macrophage phagocytic capacity and the activity of natural killer（NK）were determined.The results showed that Coenzyme Q10 soft capsule can promote the proliferation of mouse spleen lymphocytes and transformation of miceˊS spleen lymphocytes and the proliferation of antibody-producing cells in mice，increased levels of serum hemolysin in mice，promote delayed hypersensitivity and its monocyte-macrophage phagocytosis. Therefore，Coenzyme Q10 soft capsule can be determined in mice with enhanced immunity.

Coenzyme Q10；soft capsule；strengthen immunity；mice

10.3969/j.issn.1005-6521.2014.08.029

2013-08-05

袁根良（1984—），男（漢），工程師，碩士，研究方向：功能食品。