田洪磊 詹 萍 朱新榮 顏海燕

（石河子大學(xué)食品學(xué)院，石河子 832000）

機(jī)體自由基的產(chǎn)生貫穿于整個(gè)生命代謝周期，抗氧化酶及其他各類抗氧化劑的存在為人體中抗氧化網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建與完善及抗氧化平衡狀態(tài)的維護(hù)起到了至關(guān)重要的作用［1-2］。自由基產(chǎn)生與抗氧化防御系統(tǒng)的失衡直接誘導(dǎo)氧化應(yīng)激狀態(tài)的發(fā)生發(fā)展，超氧陰離子等自由基的過多累積所導(dǎo)致的氧化應(yīng)激型代謝紊及組織損傷等問題，是機(jī)體衰老、各種慢性疾?。ㄈ缒[瘤、心血管疾病及糖尿病等）產(chǎn)生的主要根源［3］。近年來在人工合成抗氧化劑等食品添加劑的食用安全性受到普遍關(guān)注的同時(shí)，基于特色食品資源及其加工副產(chǎn)物進(jìn)行天然抗氧化物質(zhì)篩選與抗氧化劑制備已成為功能食品研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)問題，富含多種生物活性物質(zhì)的植物精油等天然復(fù)合基材為天然抗氧劑產(chǎn)品開發(fā)提供了豐富而便捷的資源樣本。作為多種脂肪酸及植物甾醇等物質(zhì)組成較為復(fù)雜的新疆小白杏杏仁油，以其在多種疾病尤其是地方病干預(yù)治療方面的顯著效果，長(zhǎng)期被維吾爾醫(yī)師作為一種藥物普遍使用，然而目前對(duì)其作用效果及機(jī)制的解析尚待填補(bǔ)或完善，在小白杏杏仁油資源樣本中生物活性物質(zhì)鑒定分析的基礎(chǔ)上，對(duì)其清除自由基效果進(jìn)行對(duì)照研究，預(yù)期通過抗氧化活性評(píng)價(jià)為多種疾病干預(yù)治療效果提供可靠解析或理論依據(jù)，從而有望在充實(shí)或補(bǔ)充天然抗氧化劑種類的同時(shí)，提升新疆區(qū)域特色資源的精深加工程度，推動(dòng)區(qū)域資源優(yōu)勢(shì)向經(jīng)濟(jì)優(yōu)勢(shì)轉(zhuǎn)變的進(jìn)程。

在對(duì)復(fù)雜生物活性物質(zhì)天然復(fù)合而成的小白杏杏仁油進(jìn)行抗氧化活性研究的基礎(chǔ)上，結(jié)合相關(guān)分析方法對(duì)其中多樣活性物質(zhì)單體與抗氧化指標(biāo)之間的量效關(guān)系進(jìn)行預(yù)測(cè)，可避免通過各種活性物質(zhì)精確分離后進(jìn)行抗氧化效果對(duì)比研究的復(fù)雜繁瑣過程，預(yù)期在節(jié)約研究成本的同時(shí)研究探討建立復(fù)雜生物活性物質(zhì)樣本體系量效關(guān)系評(píng)價(jià)方法。PLRS分析法已被廣泛用于不同數(shù)據(jù)集之間的相關(guān)性研究，此方法主要通過分析復(fù)雜多變量體系組成的樣本集與有限幾種指標(biāo)集之間的多重共線性進(jìn)行量效關(guān)系預(yù)測(cè)［4-5］。目前鮮見關(guān)于新疆小白杏杏仁油藥食兩用資源的量效關(guān)系研究方面的報(bào)道，本研究結(jié)合項(xiàng)目組前期在小白杏杏仁油制備方法研究過程中所獲得研究成果，分別采用超臨界CO2萃取、機(jī)械壓榨、超聲波輔助提取及索氏提取的方法制備生物活性物質(zhì)含量不同的小白杏杏仁油樣本，并采用GC-MS技術(shù)對(duì)不同樣本中脂肪酸、植物甾醇及VE等多種生物活性物質(zhì)組分進(jìn)行鑒定，再次對(duì)以上不同小白杏杏仁油樣本進(jìn)行DPPH自由基、羥基自由基、超氧陰離子自由基及ABTS自由基清除效果研究，結(jié)合PLSR分析法對(duì)復(fù)雜生物活性物質(zhì)組成的小白杏杏仁油進(jìn)行抗氧化活性量效關(guān)系研究，旨在通過新疆小白杏杏仁油抗氧化活性及量效關(guān)系研究，為新疆小白杏功能產(chǎn)品開發(fā)及復(fù)雜天然產(chǎn)物體系生物學(xué)功能研究的方法改進(jìn)提供堅(jiān)實(shí)的理論依據(jù)或借鑒。

1 材料與方法

1.1 材料與設(shè)備

小白杏杏仁：采集庫車縣成熟的小白杏鮮杏，整理收集小白杏杏仁，清水處理后進(jìn)行烘箱干燥［干燥溫度（50±2）℃］，并將其分別粉碎至30目及60目（30目粉碎樣品用于超臨界萃取，60目粉碎樣品用于其他3種提取方法），低溫（-20℃）密封儲(chǔ)存?zhèn)溆?。?nèi)標(biāo)物質(zhì)（十九烷酸、角鯊?fù)椋好绹?guó)Sigma化學(xué)試劑公司；甲苯：色譜級(jí)，梯希愛（上海）化成工業(yè)發(fā)展有限公司；DPPH及ABTS自由基：Sigma公司；正構(gòu)烷烴混合標(biāo)樣（C6-C26），其他試劑：均為國(guó)產(chǎn)分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

HA121-50-02超臨界萃取設(shè)備：江蘇華安科技股份有限公司；氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀：美國(guó)Finnigan質(zhì)譜公司；KESP-100KH超聲波萃取器：深圳科工達(dá)超聲設(shè)備有限公司；Carver12224-96液壓榨油機(jī)：美國(guó)Freds液壓設(shè)備公司；FW80微型高速試樣粉碎機(jī)：河北省黃驊市新興電器廠。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 小白杏杏仁油的制備

小白杏杏仁油不同制品方法條件見表1。

表1 小白杏杏仁油不同制備方法條件

1.2.2 制備脂質(zhì)體樣品脫膠處理方法

設(shè)置水與待脫膠樣品體積比例為18% （W／O），溫度為65℃進(jìn)行水浴攪拌脫膠10 min，冷卻（4℃）后離心分離（2 800×g）12 min，脫膠分離的各脂質(zhì)體樣品采用無水Na2SO4進(jìn)行脫水后低溫貯藏備用。

1.2.3 小白杏杏仁油中主要生物活性成分的測(cè)定

脂肪酸的測(cè)定參見文獻(xiàn)［10］。

甾醇及VE等其他物質(zhì)測(cè)定方法如下：準(zhǔn)確稱取2.0 g油樣，加入100 mL濃度為1 mol／L的氫氧化鉀-甲醇溶液，在85℃水浴條件下回流加熱皂化1 h后冷卻至室溫（25℃）后，從中吸取5 mL，加入2 mL蒸餾水，用5 mL石油醚提取3次后，合并醚液，并將醚液蒸干，用2 mL吡啶溶解，再加入2 mL乙酸酐，靜止3 h后加入蒸餾水10 mL，冷卻后1 mL正己烷定容，待測(cè)。GC-MS分析條件：OV-1701毛細(xì)管色譜柱（30 m×0.25 mm，液膜厚度0.25μm），載氣（He）流量：0.8 mL／min，分流比：12∶1，進(jìn)樣口溫度：280℃，起始柱溫240℃，以10℃／min的升溫速率升至265℃保持48 min。質(zhì)譜條件：電離方式為EI，電子能量70 eV，發(fā)射電流150μA，檢測(cè)器電壓350 V，進(jìn)樣量：0.5μL。

1.2.4 小白杏杏仁油抗氧化性能

1.2.4.1 DPPH自由基清除能力

將DPPH（1，1-二苯基-2-三硝基肼，1，1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl）自由基溶于95%的無水乙醇配成0.1mmol／L的待清除溶液，分別用無水乙醇將不同方法制備的小白杏杏仁油樣品及VE對(duì)照品稀釋成質(zhì)量濃度為 0.05、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6 mg／mL的溶液，取上述各溶液2mL分別加入到2mL 0.1mmol／L的 DPPH配制溶液中［11］，室溫（25℃）暗室條件下水浴搖動(dòng)20 min后取出，在517 nm處10 min內(nèi)測(cè)定吸光值，并用2 mL去離子水配成的同濃度DPPH溶液作為對(duì)照，蒸餾水做空白對(duì)照，相關(guān)檢測(cè)做3次重復(fù)（其他自由基清除效果研究同樣重復(fù)對(duì)照）。DPPH自由基清除能力計(jì)算公式：清除能力＝［A0-（A1-A2）］／A0×100%，式中：A0為添加樣品前DPPH溶液吸光度；A1為添加樣品后的DPPH溶液吸光度；A2為樣品吸光度。采用各樣品達(dá)到最大抑制率一半（IC50）時(shí)的樣品濃度評(píng)價(jià)樣品清除自由基的效果［12］。

1.2.4.2 羥基自由基清除能力

采用2-脫氧-D-核酸糖-氧化法研究小白杏杏仁油對(duì)羥基自由基的清除效果［12］，依次在反應(yīng)試管中加入0.4 mL KH2PO4-KOH緩沖液（pH＝7.4），0.1 mL以上不同濃度樣品溶液及 EDTA（1 mmol／L）、雙氧水（10 mmol／L）、2-脫氧 -D-核酸糖（60 mmol／L）、抗壞血酸（2 mmol／L）、三氯化鐵（1 mmol／L）溶液，并用0.1 mL蒸餾水代替三氯化鐵溶液做空白對(duì)照，28℃條件下反應(yīng)90 min后加入1 mL三氯乙酸（20%）終止反應(yīng)，然后加入1 mL硫代巴比妥酸溶液（1%），混合均勻后在沸水浴（100℃）中保持15 min，冰浴后在532 nm處測(cè)定吸光值［13］。

1.2.4.3 超氧陰離子自由基清除能力

依據(jù)生物活性物質(zhì)經(jīng)過超氧陰離子氧化還原反應(yīng)失活形成呈色產(chǎn)物的原理［14-15］，將0.1 mL不同濃度的小白杏杏仁油樣本溶于2.8 mL的Tris-HCl-EDTA緩沖液（0.1 mol／L，pH＝8.2）中，25℃條件下混合20 min后加入0.1mL鄰苯三酚（3 mmol／L），相同溫度條件下反應(yīng)5 min加入1 mLHCl溶液（8 mmol／L）終止反應(yīng)，在299 nm處測(cè)定吸光值，計(jì)算清除率。

1.2.4.4 ABTS自由基清除能力

采用Floegel等［15］方法進(jìn)行不同小白杏杏仁油樣品清除ABTS（2，2’-連氮基-雙-（3-乙基苯并二氫噻唑啉 -6-磺酸，2，2＇-azino-bis（3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonate））自由基的對(duì)照研究，通過34 mg K2S2O8及52 mL蒸餾水配置K2S2O8儲(chǔ)備液，取儲(chǔ)備液5.2 mL加入20 mg ABTS，制的ABTS母液暗室放置12 h后，取0.8 mL用甲醇定容至50 mL，得ABTS待用液，取2 mL ABTS待用液分別加入到2 mL不同濃度的小白杏杏仁油樣品及VE對(duì)照品中，并用相同體積的甲苯-甲醇溶液（1∶1）形成空白對(duì)照組，各反應(yīng)樣本室溫（25℃）振蕩0.5 min后避光密封放置30min，在734 nm處測(cè)定吸光值，計(jì)算清除率。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

對(duì)測(cè)定結(jié)果采用SPSS20.0軟件進(jìn)行Duncan多重比較檢驗(yàn)和方差分析（ANOVA），P＜0.05認(rèn)為存在顯著性差異。相關(guān)性分析采用偏最小二乘回歸法（PLSR），所有數(shù)據(jù)均進(jìn)行3次平行試驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同方法制備新疆小白杏杏仁油主要生物活性物質(zhì)分析

如表2、表3所示，通過對(duì)4種不同方法制備的小白杏杏仁油樣品進(jìn)行生物活性物質(zhì)鑒定，發(fā)現(xiàn)各樣品中生物活性物質(zhì)含量豐富且存在差異，包括脂肪酸、甾醇及VE等50余種物質(zhì)組分，為了后期分析的便捷性及對(duì)照研究的需要，將含量甚微（峰面積＜10 000）的成分刪除，采用Xcalibur軟件對(duì)色譜數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，通過對(duì)鑒定所得化合物與NIST及WILEY數(shù)據(jù)庫中的已知化合物質(zhì)譜數(shù)據(jù)比對(duì)（盡可能采用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)對(duì)檢出物質(zhì)進(jìn)行比對(duì)），選取相似度（SI）和逆檢索相似指數(shù)（RSI）＞800的物質(zhì)比較其KI指數(shù)。通過對(duì)4組樣品生物活性物質(zhì)進(jìn)行對(duì)照篩選，共獲得共有活性物質(zhì)33種，其中包括19種脂肪酸組分、14種甾醇及其他生物活性物質(zhì)類組分，相關(guān)活性物質(zhì)均呈顯著差異性（P＜0.05，α-生育酚除外），與其他3種制備方法相比，SCDE法制備的樣品中相關(guān)共有活性物質(zhì)種類較為齊全。各樣品脂肪酸中單不飽和脂肪酸（MUFA）質(zhì)量分?jǐn)?shù)在59.95%～68.90%之間，多不飽和脂肪酸（PUFA）質(zhì)量分?jǐn)?shù)在21.70%～25.36%之間。采用MCE制備的樣品中順式 -油酸Δ9、油酸Δ11、亞油酸Δ9，12、亞麻酸Δ6，9，12及亞麻酸Δ9，12，15的含量相對(duì)最高，十七烷酸、二十三烷酸、二十四烷酸及亞油酸Δ8，11未檢出；在其他3種方法制備的樣品中順式-油酸Δ9及亞油酸Δ9，12等脂肪酸組分亦保持了相對(duì)較高的含量，其中SCDE制備樣品中硬脂酸、二十三烷酸、亞油酸Δ8，11及花生四烯酸Δ5，8，11，14含量相對(duì)稍有偏高，肉豆蔻酸及二十碳三烯酸Δ8，11，14未檢出，UAE制備樣品中棕櫚酸、花生酸、花生一烯酸Δ11、二十二烷酸及二十四烷酸的含量相對(duì)較高，但亦存在亞油酸Δ8，11、二十三烷酸及花生四烯酸Δ5，8，11，14未檢出的現(xiàn)象，同樣在SE制備樣品中棕櫚油酸、反式 -油酸Δ9及二十碳三烯酸Δ8，11，14的含量呈現(xiàn)了相對(duì)較高的現(xiàn)象，花生四烯酸Δ5，8，11，14與二十四烷酸未檢出。與脂肪酸組成相比，不同方法制備的小白杏杏仁油樣品中甾醇及其他生物活性物質(zhì)含量亦存在較為明顯的差異性，采用SCDE制備的樣品中β-谷甾醇Δ5、角鯊烯Δ2，6，10，14，18，22及 γ-生育酚含量相對(duì)較高，在其他3種方法制備的樣品中α-生育酚、Δ5-燕麥 甾 醇Δ5，24（28）、Δ5-豆 甾 醇Δ5，22、Δ7-燕 麥 甾醇Δ7，24（28）、沉香萜醇Δ1，6、膽甾醇Δ5、菠菜甾醇Δ7，22、麥角甾醇Δ5及 Δ7-豆甾醇Δ7，22等分別亦表現(xiàn)了相對(duì)較高的含量狀態(tài)。

表3 不同方法制備小白杏杏仁油中甾醇及其他生物活性物質(zhì)

在較全面地對(duì)所選擇的新疆小白杏杏仁油樣品中生物活性物質(zhì)進(jìn)行分析鑒定后，發(fā)現(xiàn)小白杏杏仁油中確實(shí)存在多種物質(zhì)成分，新疆少數(shù)民族居民長(zhǎng)期采用其作為多種維吾爾藥物配伍資源進(jìn)行相關(guān)疾病干預(yù)，可能與某些生物活性物質(zhì)的多元化組成相關(guān)，為提高小白杏杏仁油中生物活性物質(zhì)生物學(xué)功能追溯的科學(xué)性，避免通過各種活性物質(zhì)精確分離后進(jìn)行抗氧化效果對(duì)比研究的復(fù)雜繁瑣過程，復(fù)雜多變量體系組成的4種不同方法制備的小白杏杏仁油樣品為相關(guān)單體成分功能作用的顯著性與協(xié)同性研究或預(yù)測(cè)提供了相近但存在差異的研究樣本。

2.2 小白杏杏仁油抗氧化活性

基于物質(zhì)組分含量及協(xié)同作用效果的差異，不同制備樣品可能存在清除能力變化的差異。試驗(yàn)中，小白杏杏仁油抗氧化活性通過對(duì)DPPH自由基、羥基自由基、超氧陰離子自由基和ABTS自由基進(jìn)行表征。通過對(duì)不同方法制備的小白杏杏仁油樣品不同濃度的抗氧化能力測(cè)定，采用SPSS軟件計(jì)算得出4種不同方法制備的小白杏杏仁油抗氧化能力的IC50值，結(jié)果見表4。

表4 供試樣本抗氧化能力的IC50值對(duì)照

4種制備小白杏杏仁油樣本及VE對(duì)照樣本對(duì)于DPPH自由基、羥基自由基、超氧陰離子自由基和ABTS自由基均具有一定的清除能力。對(duì)于DPPH自由基，在質(zhì)量濃度為0.05～0.2 mg／mL時(shí)清除效果變化最為明顯，其中SCDE、SE及UAE制備樣品在質(zhì)量濃度達(dá)到0.8 mg／mL濃度時(shí)清除率基本達(dá)到最佳狀態(tài)，其達(dá)到最大清除率50%的質(zhì)量濃度（IC50）分別為0.134、0.191、0.321 mg／mL；MCE制備樣品及VE對(duì)照品清除率在質(zhì)量濃度達(dá)到0.4 mg／mL后有下降趨勢(shì)，IC50值分別為 0.202、0.050 mg／mL；小白杏杏仁油樣品對(duì)羥基自由基亦具有一定的清除能力，其中以SCDE制備樣品最為明顯，其 IC50值為0.190 mg／mL，與 VE IC50值（0.123 mg／mL）相比，SCDE制備樣品清除羥基自由的能力較VE稍弱。所有考察樣品對(duì)羥基自由基的清除能力均表現(xiàn)出相似的變化趨勢(shì)，在0.05～0.8 mg／mL范圍內(nèi)，隨樣品濃度的改變羥基自由基清除率變化明顯，繼而提升樣品濃度時(shí)清除率變化微弱，不同物質(zhì)含量的樣品所呈現(xiàn)的相似趨勢(shì)可以反映某些物質(zhì)組分與羥基自由基清除效果間可能存在相關(guān)性，或相近的制備樣本自然形成了某種特定類型的協(xié)同作用體系；對(duì)于超氧陰離子清除效果，結(jié)果表明濃度較低（0.05～0.8 mg／mL）的情況下樣品對(duì)超氧陰離子的抑制效果均明顯高于VE對(duì)照組，在質(zhì)量濃度達(dá)到0.8 mg／mL后，除VE對(duì)照組及UAE樣品組外，其他3組樣品濃度對(duì)超氧陰離子的清除率變化產(chǎn)生的影響不明顯，與 VE對(duì)照組（IC50＝0.731 mg／mL）相比，SCDE、MCE及SE制備樣品均顯示了較強(qiáng)的超氧陰離子自由基清除活性（IC50值 0.578～0.721 mg／mL），UAE制備樣品稍弱，其 IC50值僅為1.160 mg／mL；與此同時(shí)小白杏杏仁油樣品對(duì)ABTS自由基亦具有一定的清除能力，其中以MCE制備樣品最為明顯，其IC50值為0.436 mg／mL，其他3種制備樣品 IC50值在0.733～0.786 mg／mL之間，與 VE對(duì)照組（IC50＝0.278 mg／mL）相比，各制備樣品對(duì)ABTS自由基的清除能力稍遜于VE。通過對(duì)各供試樣本的IC50值比較亦可發(fā)現(xiàn)，與其他供試樣本相比，UAE制備樣品對(duì)相關(guān)自由基的清除效果均相對(duì)較弱，各供試樣本對(duì)DPPH自由基的清除效果尤為明顯。

2.3 顯著相關(guān)性活性物質(zhì)與抗氧化性能量化分析

在對(duì)差異性小白杏杏仁油樣品進(jìn)行抗氧化活性評(píng)價(jià)的基礎(chǔ)上，為深入明晰或預(yù)測(cè)小白杏杏仁油樣品中主要生物活性物質(zhì)對(duì)小白杏杏仁油樣品抗氧化性能的作用方式，采用ANOVA-PLSR方法建立了PLSR模型，對(duì)4種不同方法制備的小白杏杏仁油中的33種主要成分和4個(gè)抗氧化指標(biāo)進(jìn)行了相關(guān)分析。在對(duì)前期相關(guān)變量集合進(jìn)行PLSR分析前，對(duì)所有原始變量進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化的預(yù)處理（1／Sedv），所有PLSR模型均采用全交叉驗(yàn)證法進(jìn)行檢驗(yàn)。以33種化合物為X變量，單個(gè)氧化應(yīng)激指標(biāo)為Y變量分別建立4個(gè)PLSR模型，根據(jù)Jack-knife不確定度檢驗(yàn)分別計(jì)算得出的對(duì)Y變量（即4個(gè)抗氧化制備）具有顯著影響的活性物質(zhì)（P≤0.05），結(jié)果見表5。

然而，在實(shí)際操作過程中發(fā)現(xiàn)，與多種中藥制劑的功效作用相似，小白杏杏仁油供試樣本對(duì)4種自由基的清除效果不可能完全由某種單一的活性成分呈現(xiàn)，極有可能通過多種成分的協(xié)同作用完成，再者，復(fù)合體系中不同生物活性物質(zhì)的功效閾值差異性較大。因此，為了更為直觀的比較不同方法制備的小白杏杏仁油中相關(guān)活性物質(zhì)與自由基清除效果間的量化關(guān)系，從上述顯著活性物質(zhì)中找出一些在不同方法制備的小白杏杏仁油樣本中含量差異變化較大的組分尤為重要。在前期生物活性成分與抗氧化能力相關(guān)性明晰的基礎(chǔ)上，選擇傳統(tǒng)索氏提取法制備的小白杏杏仁油樣本（SE）為參照，以其中相關(guān)性分析顯著的化合物的含量為基準(zhǔn)，計(jì)算得出其他3種方法制備的小白杏杏仁油樣本中相關(guān)性分析顯著成分含量的差值系數(shù)，計(jì)算公式為：

式中：Y為各種顯著化合物含量的差值系數(shù)；Cx分別為3種不同方法制備的小白杏杏仁油中各種顯著化合物含量；C0為索氏提取制備小白杏杏仁油中相應(yīng)組分含量。

通過比較差值系數(shù)，可以直觀地表征不同方法制備的小白杏杏仁油中各種化合物之間的差值變化率，用來反映同一物質(zhì)在不同方法中的差異程度。一般來說，結(jié)合PLSR模型確定的顯著成分中，基準(zhǔn)含量高的化合物可能是起主導(dǎo)功效的重要物質(zhì)，而差值系數(shù)較大的物質(zhì)則可能是導(dǎo)致不同樣本產(chǎn)生差異功效的關(guān)鍵成分。具體量化結(jié)果如表5所示。

表5 具有顯著特性的成分與自由基清除能力間的量化分析

由表5所示的PLSR模型的回歸系數(shù)可以看出，與DPPH自由基清除能力強(qiáng)弱相關(guān)的顯著化合物依次為角鯊烯Δ2，6，10，14，18，22（0.049 06）、γ-生育酚（0.045 86）、亞油酸Δ9，12（0.045 03）、順式-油酸Δ9（0.044 00）、β-谷甾醇Δ5（0.043 93）、亞油酸Δ8，11（0.041 74）、菠菜甾醇Δ7，22（0.039 58）、α-生育酚（0.033 88）等。同時(shí)結(jié)合各種活性化合物的差值系數(shù)（按式（1）計(jì)算所得）進(jìn)行比較分析，發(fā)現(xiàn)亞油酸Δ8，11（3.00）、亞麻酸Δ6，9，12（1.06）、花生三烯酸Δ8，11，14（1.00）、菠菜甾醇Δ7，22（0.67）差值系數(shù)變化相對(duì)較大，而其基準(zhǔn)含量卻相對(duì)較低（分別為0.04 g／100 g、0.15 g／100 g、0.14 g／100 g和 4.62μg／g），其他顯著活性化合物，如順式油酸Δ9（62.78 g／100 g）、亞油酸Δ9，12（21.5 g／100 g）基準(zhǔn)含量較高，差值系數(shù)變化較小（分別為0.14和0.13），綜合以上分析結(jié)果推斷：角鯊烯Δ2，6，10，14，18，22為主導(dǎo)的小白杏杏仁油的DPPH自由基清除體系中，順式油酸Δ9和亞油酸Δ9，12對(duì)于DPPH的亦存在顯著清除效力，但導(dǎo)致4種方法制備的小白杏杏仁油樣本對(duì)DPPH自由基清除效力存在顯著差異，可能恰恰是由于以上基準(zhǔn)含量相對(duì)較低的物質(zhì)在其他3種制備樣品中的差異性配伍與協(xié)同效力所造成的；按上述分析方法推測(cè)，角鯊烯Δ2，6，10，14，18，22（差值系數(shù)為 0.57）可能是小白杏杏仁油樣本清除羥基自由基的關(guān)鍵物質(zhì)，花生四烯酸Δ5，8，11，14可能是清除超氧陰離子自由基的關(guān)鍵物質(zhì)，Δ5-燕麥甾醇Δ5，24（28）（1.00）和亞麻酸Δ6，9，12（1.06）可能是清除ABTS自由基的關(guān)鍵物質(zhì)。

3 結(jié)論

通過GC及GC-MS技術(shù)對(duì)超臨界CO2萃取、機(jī)械壓榨、超聲波輔助提取及索氏提取四種小白杏杏仁油制備樣品進(jìn)行了分析，共篩選獲得了33種呈顯著差異性（P＜0.05，α-生育酚除外）的活性物質(zhì)；不同方法制備樣品對(duì) DPPH、羥基、超氧陰離子及ABTS 4種自由基均存在差異的清除能力。采用PLS1模型分析了具體活性物質(zhì)與抗氧化指標(biāo)之間的相關(guān)性，同時(shí)結(jié)合差值系數(shù)分析，初步推測(cè)角鯊烯Δ2，6，10，14，18，22、花 生 四 烯 酸Δ5，8，11，14、Δ5-燕 麥 甾醇Δ5，24（28）、亞麻酸Δ6，9，12可能分別在不同小白杏杏仁油自由基清除體系中起關(guān)鍵協(xié)同作用。

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