李建平，楊國珍(綜述)，康 永，程玉釧(審校)

(山西省中醫(yī)藥研究院中藥方劑研究所，太原 030012)

紅花為菊科植物紅花Carthamus tinctorius L.的干燥花。紅花注射液是由紅花經(jīng)提取精制而成的黃紅色至紅棕色的滅菌水溶液，具有活血化瘀、消腫止痛等作用，廣泛用于治療冠心病、心絞痛、高血脂癥[1-2]及急性腦梗死[3]、各種頸椎病[4-5]、原發(fā)性痛經(jīng)[6-7]等。然而,隨著臨床用途的不斷擴(kuò)大，紅花注射液的不良反應(yīng)也日趨增多，有些反應(yīng)還較為嚴(yán)重[8]。經(jīng)過查閱文獻(xiàn)，歸納總結(jié)紅花注射液過敏反應(yīng)的研究進(jìn)展，分析存在的問題并提出可借鑒的過敏原相關(guān)研究方法及技術(shù)。該文就以下兩個方面來闡述紅花注射液致敏反應(yīng)的研究現(xiàn)狀。

1 紅花注射液過敏反應(yīng)臨床報(bào)道及病案分析

1.1臨床報(bào)道 關(guān)于紅花注射液過敏反應(yīng)的臨床報(bào)道很多，其過敏癥狀輕者如發(fā)熱[9]、皮疹[10-11]、過敏性寒戰(zhàn)[12]等，重者如急性哮喘[13]、過敏性休克[14]等。目前，初步推斷引起過敏反應(yīng)的可能原因有：①患者的特殊體質(zhì)容易對紅花注射液產(chǎn)生過敏反應(yīng)；②紅花注射液作為中藥注射劑，化學(xué)成分復(fù)雜，含有的大分子物質(zhì)可作為抗原引起變態(tài)反應(yīng)；③紅花注射液在生產(chǎn)過程中未除盡的雜質(zhì)、微粒、內(nèi)毒素等致敏物質(zhì)或是在生產(chǎn)、運(yùn)輸、儲存等過程中成分改變或受到污染引起過敏反應(yīng)；④紅花黃色素作為紅花注射液的有效成分之一，可能也是引起過敏反應(yīng)的一個重要原因，值得關(guān)注[11,14-18]。

1.2病案分析 李茵等[19]從患者的性別、年齡、原患疾病、不良反應(yīng)時間等方面進(jìn)行分析，綜合判斷47例患者應(yīng)用紅花注射液后發(fā)生過敏反應(yīng)的原因。結(jié)果表明，中老年患者使用紅花注射液易發(fā)生不良反應(yīng)；原患疾病可能與紅花注射液致敏有關(guān)。程鵬等[20]對51例紅花注射液不良反應(yīng)文獻(xiàn)進(jìn)行分析并指出，紅花注射液超劑量使用和不恰當(dāng)?shù)呐湮闀?dǎo)致不良反應(yīng)；紅花注射液中未除盡的雜質(zhì)經(jīng)靜脈進(jìn)入人體后可作為半抗原與血漿蛋白的氨基結(jié)合成更大分子的復(fù)合物，引起變態(tài)反應(yīng)。李世蔭等[21]認(rèn)為中藥中的大分子物質(zhì)(蛋白、多肽、多糖等)同時具有免疫原性和反應(yīng)原性，能夠刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生免疫應(yīng)答，使機(jī)體產(chǎn)生抗體或致敏淋巴細(xì)胞，最終導(dǎo)致變態(tài)反應(yīng)。曾聰彥等[8]對34例不良反應(yīng)病例進(jìn)行分析得出，紅花注射液中含有紅花黃色素和紅花苷等，也可作為抗原或半抗原引起變態(tài)反應(yīng)，即患者使用紅花后，在體內(nèi)產(chǎn)生特異性抗體，當(dāng)靜脈注入紅花注射液時，作為致敏原激活了細(xì)胞內(nèi)的酶，釋放出組胺樣的活性物質(zhì)引起變態(tài)反應(yīng)。

2 紅花注射液致敏反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)性研究

張穎等[22]將紅花注射液進(jìn)行分離純化后，通過建立過敏反應(yīng)動物模型，用間接酶聯(lián)免疫吸附測定(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)和聚合酶鏈反應(yīng)法檢測，結(jié)果表明脂溶性的成分導(dǎo)致發(fā)生過敏反應(yīng)的強(qiáng)度最大，并指出紅花注射液所含的聚山梨酯80能夠引起過敏反應(yīng)。張潞等[23]通過全身主動過敏反應(yīng)和被動皮膚過敏反應(yīng)試驗(yàn)，證明紅花注射液具有致敏性且為Ⅰ型超敏反應(yīng)，但是紅花注射液的致敏性物質(zhì)是蛋白類大分子還是其他類型物質(zhì)，如多糖、色素或其他，仍需要進(jìn)一步研究。

3 過敏物質(zhì)研究方法和技術(shù)

3.1中藥注射液過敏物質(zhì) 紅花注射液過敏物質(zhì)的試驗(yàn)方法和技術(shù)尚未成熟，可參考其他中藥注射液的過敏物質(zhì)指認(rèn)方法，如王新彤[24]采用考馬斯亮藍(lán)法和三氯乙酸沉淀結(jié)合雙縮脲法對清開靈注射液中大分子蛋白的含量進(jìn)行研究，十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-Polyacrylamide Gel Electrophoresis，SDS-PAGE)與分子排阻色譜法分析其中的大分子蛋白，獲知其相對分子質(zhì)量范圍為3×103～17×103，將SDS-PAGE中獲得的蛋白膠點(diǎn)進(jìn)行酶解，然后進(jìn)行質(zhì)譜分析，得到一級肽段信息；曾姣麗等[25]采用酶聯(lián)免疫雙抗夾心和免疫指紋圖譜法對雙黃連注射劑中黃芩苷的致敏性進(jìn)行研究，最終確定黃芩苷為其致敏原；胡昌勤等[26]利用超濾等方法從含丹參的中藥注射液中提取大分子抗原活性雜質(zhì)，采用豚鼠主動過敏實(shí)驗(yàn)和被動皮膚過敏反應(yīng)考證該類雜質(zhì)的致敏性，并建立ELISA法用于含丹參的中藥注射劑中殘留抗原的檢測；屈會化等[27]提出了一種新的研究中藥注射液致敏物質(zhì)的思路，利用免疫芯片技術(shù)從中藥注射劑多組分體系中鑒定、判斷及分離尋找小分子半抗原或致敏成分。

3.2食物中過敏物質(zhì) 食品如小麥、番茄、花粉、牛奶、海產(chǎn)品等可引起過敏反應(yīng)，可借鑒其致敏物質(zhì)的分析，確認(rèn)方法。Sotkovsky等[28]利用超濾、等電聚焦電泳和層析法分離、純化小麥面粉中水/鹽溶性提取物，用對面粉過敏的患者的混合血清進(jìn)行免疫印跡試驗(yàn)定位致敏蛋白，通過基質(zhì)輔助激光解吸/電離飛行時間質(zhì)譜鑒定得到27種可能的面粉致敏性蛋白，其中7種是新發(fā)現(xiàn)物質(zhì)。López-Matas等[29]對6種番茄中致敏原進(jìn)行指認(rèn)并測定各致敏物質(zhì)的含量，利用液質(zhì)聯(lián)用/質(zhì)譜鑒定番茄提取物中的Lyc e 3和滲調(diào)蛋白樣蛋白，免疫印跡法定位多聚半乳糖醛酸酶2A，直接ELISA法評價番茄提取物刺激機(jī)體所產(chǎn)生的特異性IgE，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Lyc e 3在6種番茄中均存在，且含量最高，滲調(diào)蛋白樣蛋白和多聚半乳糖醛酸酶2A也是較為常見的番茄過敏物質(zhì)。孟光等[30]對椰子花粉過敏原進(jìn)行研究，采用離子交換層析對過敏原進(jìn)行初步分離純化，用SDS-PAGE進(jìn)一步分離過敏原并測定其分子量，免疫印跡法鑒定和檢測變應(yīng)原，結(jié)果顯示，粗提液有10個蛋白條帶，其中相對分子質(zhì)量為50×103，16×103，14×103的蛋白為主要變應(yīng)原。常艷敏等[31]研究牛奶中的過敏物質(zhì)，利用等電點(diǎn)沉淀、凝膠層析和分子篩等技術(shù)純化牛奶中過敏組分，SDS-PAGE鑒定蛋白純度，采用雙抗夾心-ELISA鑒定免疫活性，得知牛奶中的β乳球蛋白和高分子量蛋白質(zhì)為主要過敏原。張軼群[32]采用改良硫酸銨沉淀法(濃度不同，pH相同的硫酸銨溶液)，結(jié)合電泳切膠回收法，對海產(chǎn)品過敏原進(jìn)行純化。另外，對傳統(tǒng)的免疫芯片進(jìn)行修飾并制備三維芯片來檢測海產(chǎn)品中的過敏原。

4 小結(jié)與展望

紅花作為活血化瘀之要藥，其注射液形式經(jīng)靜脈給藥后藥效發(fā)揮迅速，在心腦血管疾病的臨床預(yù)防和治療中發(fā)揮著越來越重要的作用，然而紅花注射液的過敏反應(yīng)日益嚴(yán)重。根據(jù)國家食品藥品監(jiān)督管理局最新公布的不良反應(yīng)通報(bào)[33]，僅2012年，以紅花為主要成分的紅花注射液，在國家藥品不良反應(yīng)監(jiān)測數(shù)據(jù)庫中的病例報(bào)告數(shù)共計(jì)3306例，嚴(yán)重病例報(bào)告154例。基于如此嚴(yán)峻的不良反應(yīng)現(xiàn)狀，僅僅通過臨床報(bào)道過敏病例和病案分析推斷致敏原可能的來源是遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠的，必須從最基本的致敏物質(zhì)基礎(chǔ)研究開始，但目前針對紅花注射液過敏物質(zhì)的實(shí)驗(yàn)性研究所查到的文獻(xiàn)很少，其致敏原的分析及確認(rèn)工作亟待開展。

國內(nèi)外研究過敏物質(zhì)研究方法和手段已較為成熟，應(yīng)參照已有技術(shù)并結(jié)合紅花注射液自身成分的特點(diǎn)進(jìn)行探索，逐步建立并完善紅花注射液過敏原的分離、純化、檢測的體系，明確其過敏物質(zhì)基礎(chǔ)及致敏含量限度等信息，為生產(chǎn)過程的質(zhì)量控制提供必要的研究基礎(chǔ)，為使用單位提供更安全的紅花注射液應(yīng)用規(guī)范。

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