馬 蘭

(天津市北辰區(qū)藥品檢驗所，天津300400)

色譜法在藥物分析中的應(yīng)用*

馬 蘭

(天津市北辰區(qū)藥品檢驗所，天津300400)

色譜法是現(xiàn)代化學(xué)分析中的重要分析技術(shù)，被廣泛地應(yīng)用于環(huán)境保護(hù)、藥物分析、食品安全和生命科學(xué)等領(lǐng)域。隨著科學(xué)技術(shù)水平的提高，色譜技術(shù)在藥物化學(xué)分析領(lǐng)域也得到廣泛應(yīng)用，其具有分離效能高、分析速度快、專屬性好等特點，用于藥品研發(fā)、質(zhì)量控制以及復(fù)雜成分的分離分析，聯(lián)用質(zhì)譜技術(shù)還可用于化學(xué)結(jié)構(gòu)的鑒定。隨著色譜技術(shù)的不斷完善，其應(yīng)用范圍也將更加廣闊。本文就色譜法在藥物分析中的應(yīng)用做一綜述。

色譜法，藥物分析，結(jié)構(gòu)鑒定，藥品雜質(zhì)，質(zhì)譜聯(lián)用，農(nóng)藥殘留量

色譜法是現(xiàn)代化學(xué)分析中的重要分析技術(shù)，被廣泛地應(yīng)用于環(huán)境保護(hù)、藥物分析、食品安全、生命科學(xué)等領(lǐng)域。根據(jù)分離方法分為薄層色譜法、氣相色譜法、柱色譜法、高效液相色譜法等;根據(jù)其分離原理可分為吸附色譜法、分配色譜法、離子交換色譜法等［1］。隨著科學(xué)技術(shù)水平的提高，色譜技術(shù)在藥物化學(xué)分析領(lǐng)域也得到廣泛應(yīng)用，其具有分離效能高，分析速度快、專屬性好等特點，用于藥品研發(fā)、質(zhì)量控制以及復(fù)雜成分的分離分析，聯(lián)用質(zhì)譜技術(shù)還可用于化學(xué)結(jié)構(gòu)的鑒定。本文就色譜法在藥物分析中的應(yīng)用綜述如下。

1 對已知化合物進(jìn)行定性分析及結(jié)構(gòu)鑒定

張萍等［2］采用高效液相色譜法以甲醇－水－醋酸(60∶36∶4)為流動相，測定細(xì)辛屬及馬兜鈴屬藥材中馬兜鈴酸A的含量，同時采用高效液相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用法對細(xì)辛中馬兜鈴酸A的結(jié)構(gòu)進(jìn)行確認(rèn)。結(jié)果馬兜鈴酸A進(jìn)樣量線性在0.01～0.25 μg范圍內(nèi)，平均回收率為97.5%，色譜圖中保留時間為9.036 min色譜峰，以及從質(zhì)譜圖得到的m/z為339的［M－H］峰，確證為馬兜鈴酸A。袁耀佐等［3］采用液相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用一級質(zhì)譜掃描總離子流譜測定精制蒜氨酸中有關(guān)物質(zhì)準(zhǔn)分子離子，利用色譜保留時間、二級質(zhì)譜或?qū)φ掌愤M(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。結(jié)果顯示精制蒜氨酸中主要含7個有關(guān)物質(zhì)成分及2個分別鑒定為異蒜氨酸和環(huán)蒜氨酸的同分異構(gòu)體。

婁方明等［4］采用蒸餾法提取厚樸揮發(fā)油，以氣相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)對揮發(fā)油成分進(jìn)行分離鑒定，并分析比較了不同產(chǎn)地厚樸的揮發(fā)油成分。結(jié)果顯示5種不同產(chǎn)地厚樸所含揮發(fā)油的量差別較大，以云南和四川最少，浙江產(chǎn)最多，但是5個地區(qū)厚樸所含主要成分基本相同，只是含量有差異，其共有成分達(dá)到18種。另有20種成分分別為各產(chǎn)地所獨有，但含量甚微，其他的成分則在2種以上產(chǎn)地上存在。

2 對藥品質(zhì)量的控制

中藥有效成分的含量高低直接影響到治療效果，也是評估中藥質(zhì)量的重要標(biāo)志。樊鵬程等［5］采用高效液相色譜法測定不同產(chǎn)地獨一味藥材中山梔子苷甲酯的含量，流動相為甲醇－水(25∶75)，流速為1.0 ml/min，檢測波長238 nm，測定結(jié)果顯示山梔子苷甲酯在5～50 μg/ml(r=0.999 8)范圍內(nèi)線性良好，加樣回收率為94.7%，RSD為2.8%。測定結(jié)果顯示，9批不同產(chǎn)地的獨一味藥材中山梔子苷甲酯的含量差異較大，甘肅瑪曲縣所產(chǎn)獨一味除根以外的部分山梔子苷甲酯的含量較高。李志浩等［6］采用反相高效液相色潽法同時測定神農(nóng)香菊中綠原酸、木犀草素及蒙花苷含量，流動相為甲醇(A)－乙腈(B)－0.8%磷酸溶液(C)，進(jìn)行梯度洗脫，結(jié)果顯示綠原酸、木犀草素和蒙花苷分別在4.5～90.0 μg/ml(r=0.999 3)，10.5～210.0 μg/ml(r=0.999 6)和1.2～12.0 μg/ml(r= 0.999 4)的濃度范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，平均加樣回收率分別為98.91%、97.77%和98.30%;RSD均小于2.0%。尚嚴(yán)等［7］建立了毛細(xì)管電泳色譜法測定地骨皮中香草酸含量的方法，通過優(yōu)化實驗條件，摸索出最優(yōu)檢測條件，同時揭示出不同產(chǎn)地野生地骨皮與栽培地骨皮中香草酸含量差異較大，總體上栽培地骨皮香草酸含量高于野生地骨皮含量。王偉影等［8］采用高效液相色譜法測定了不同采收時期、不同炮制方法對梔子中有效成分梔子苷含量的影響，結(jié)果顯示，以10月中下旬采收，采用沸水燙20 s后曬干的方法測得的梔子苷的含量最高，通過試驗為采收及炮制提供了科學(xué)依據(jù)。

周桂榮等［9］采用反離子對色譜法測定腎炎1號片中鹽酸益母草堿含量，結(jié)果顯示，鹽酸益母草堿進(jìn)樣量在33.6～672.0 ng范圍內(nèi)線性良好，平均回收率為99.55%(n=9)，RSD為1.78%。該方法可用于對腎炎1號片中鹽酸益母草堿的含量控制。陳菊［10］利用離子排斥色譜法測定復(fù)方α－酮酸片的含量，實驗分別考查了流動相、柱溫、檢測波長等實驗條件，并遴選出最佳實驗條件，建立了該制劑可行的檢測標(biāo)準(zhǔn)。

張鷹等［11］建立了氣相色譜法測定復(fù)方氧化鋅粉中薄荷腦和樟腦的含量，實驗方法以環(huán)己烷為溶劑，萘為內(nèi)標(biāo)物質(zhì)，島津CBP－M25－025(25 m×0.22 mm，0.25 μm)色譜柱，載氣為氮氣，F(xiàn)ID氫火焰離子化檢測器，柱溫130℃，進(jìn)樣口和檢測器溫度均為180℃，進(jìn)樣量1μl，結(jié)果顯示各被測組分達(dá)到良好分離，檢測方法簡便、快速，結(jié)果可靠。

劉悅［12］采用凝膠滲透色譜法，采用示差折光檢測器對雙氯芬酸鈉滴眼液中玻璃酸鈉進(jìn)行含量測定，取得了較好的檢測效果。

3 對藥品非法添加成分的檢測

隨著人民生活水平的不斷提高，中藥及保健食品越來越多地用于人們的疾病治療及日常保健，一些不法商家為了達(dá)到產(chǎn)品所宣傳的功效或為了牟取暴利，常常在其產(chǎn)品中非法添加化學(xué)藥物，既損害了消費者的健康，也嚴(yán)重影響著中成藥與保健食品產(chǎn)業(yè)的良性發(fā)展。李濤等［13］采用氣相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用法建立了能夠在1 h內(nèi)快速檢測降壓類中成藥及保健食品中是否非法添加化學(xué)藥物的方法，并在兩批樣品中分別檢出尼群地平和可樂定。陳安珍等［14］采用超高效液相色譜－串聯(lián)四極桿質(zhì)譜技術(shù)建立了鎮(zhèn)靜安神類中藥及保健食品中非法添加化學(xué)藥品的檢測方法。胡曉煒［15］利用超高效液相色譜法檢測貴重中藥西紅花中非法添加染料金橙Ⅱ，方法為用超高效液相色譜法分離非法添加的金橙Ⅱ，用離子肼進(jìn)行定性鑒別，流動相為乙腈－0.01 mol/L醋酸銨溶液(30∶70)，流速0.3 ml/min，檢測波長484 nm，離子化模式為ESI+，碰撞能量為30V。結(jié)果顯示，該方法具有檢測時間短、結(jié)果可靠等特點。

4 在中草藥農(nóng)藥殘留量分析中的應(yīng)用

隨著中草藥使用量的日益增加，草藥種植戶為了防治病蟲害，提高產(chǎn)量，農(nóng)藥被大量用于種植中，中藥材的農(nóng)藥殘留問題也日趨嚴(yán)重，對人民的健康帶來了安全隱患。戴榮華等［16］建立了分散固相萃取－氣相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用法測定穿山龍中23種農(nóng)藥殘留的檢測方法，結(jié)果顯示，該方法基本可以滿足農(nóng)藥殘留分析的要求。董順玲等［17］建立了反相高效液相色譜法測定三七、西洋參等藥材中農(nóng)藥殘留量的方法，為該品種藥材提供了一種有效可行的農(nóng)藥殘留量檢測方法。

5 藥品雜質(zhì)及安全性檢查

藥品在生產(chǎn)、運(yùn)輸、儲存過程中，受各種不利條件的影響，導(dǎo)致藥品分解或生成少量的與治療無關(guān)的成分，這些雜質(zhì)既影響到藥品的質(zhì)量，也可能給肌體帶來傷害。大量實驗和研究表明，β－內(nèi)酰胺類抗生素中存在的各類高分子雜質(zhì)是引起肌體過敏的過敏原［18］。還有一些毒劇藥品，其所含成分是治療疾病的有效成分，但超過一定量又會對肌體構(gòu)成傷害，所以控制藥品中相關(guān)雜質(zhì)及所含成分的限量就顯得尤為重要。封淑華等［19］采用薄層色譜法建立了蟻烏風(fēng)濕膏中毒性成分烏頭堿的限量檢查。晏菊姣等［20］采用高效凝膠色譜法測定注射用鹽酸頭孢甲肟中高分子雜質(zhì)，方法為采用高效凝膠Tsk－gel G2000 SWxl色譜柱，以pH 7.0的0.005 mol/L磷酸鹽緩沖液［0.005 mol/L磷酸氫二鈉溶液－0.005 mol/L磷酸二氫鈉溶液(61∶39)］－乙腈(95∶5)為流動相，流速0.8 ml/min，檢測波長234 nm，進(jìn)樣量20 μl，測定結(jié)果顯示，供試品溶液在0.067～2.700 mg/L濃度范圍內(nèi)，溶液濃度與高分子雜質(zhì)峰面積總和線性關(guān)系良好(r=0.998 8)，結(jié)果可靠。還可以利用分子排阻色譜法進(jìn)行水解蛋白注射液中高分子物質(zhì)的測定，采用高效液相－蒸發(fā)光散射色譜法進(jìn)行鹽酸氨基葡萄糖片中有關(guān)物質(zhì)的測定［21，22］。

6 結(jié)語

色譜法作為一種檢驗技術(shù)，在現(xiàn)代藥物分析中越來越受到人們的重視，其既可以單獨用于藥品的質(zhì)量控制，還可以與質(zhì)譜儀等儀器聯(lián)用，從而使其應(yīng)用范圍不斷擴(kuò)大，其所具有的分析快速、專屬性強(qiáng)等特點是其他檢驗技術(shù)所不能比擬的。隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，色譜法將會越來越多地應(yīng)用于藥品檢驗、研發(fā)及質(zhì)量控制中，為人民的健康保駕護(hù)航。

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2013-09-18