雷曉林 錢星文 彭 菊 李俊葵 劉 偉*

欣月片改善大鼠骨密度的實(shí)驗(yàn)研究

雷曉林1錢星文1彭 菊2李俊葵2劉 偉1*

（1廣東省東方藥林藥業(yè)有限公司，廣州510520；2南方醫(yī)科大學(xué)，廣州510520）

目的觀測東方藥林牌欣月片對大鼠骨密度的影響。方法按體重將動物隨機(jī)分為模型組，假手術(shù)組，欣月片低、中、高三個劑量組。各組大鼠實(shí)行卵巢切除術(shù)（假手術(shù)組保留雙側(cè)卵巢）后，連續(xù)注射3天青霉素。于術(shù)后第8天，各組分別喂飼含不同劑量受試物的AIN93基礎(chǔ)飼料，模型對照組和假手術(shù)組只喂飼AIN93基礎(chǔ)飼料，13周后，測定股骨重量、股骨長度、股骨密度、鈣含量。結(jié)果欣月片對大鼠體重，股骨長度、股骨重量均無影響，中劑量欣月片能顯著提高股骨鈣含量，低劑量組和高劑量組能顯著提高股骨遠(yuǎn)心端和股骨中點(diǎn)的骨密度。結(jié)論欣月片（女士健骨片）有增加大鼠骨密度功能的作用。

欣月片；卵巢切除術(shù)；骨密度；中醫(yī)藥療法

骨質(zhì)疏松癥（Osteoporosis，OP）是以骨量減少、骨的微觀結(jié)構(gòu)退化為特征，致使骨的脆性增加以及易于發(fā)生骨折的一種全身性骨骼疾?。?］。女性絕經(jīng)后雌激素分泌不足，導(dǎo)致高轉(zhuǎn)換型骨質(zhì)疏松癥。大量研究表明，激素替代治療（HRT）可有效防止絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥及其相關(guān)骨折的發(fā)生。但長期應(yīng)用HRT可增加子宮內(nèi)膜癌和乳腺癌的危險性［2-3］。因此，骨質(zhì)疏松癥足以引起人們的重視，多年來人們都在不斷地積極探索著治療骨質(zhì)疏松癥的藥物。雖然目前治療骨質(zhì)疏松癥的藥物眾多，但療效并不明顯。故急需進(jìn)一步尋找療效更好、副作用更少的新藥。東方藥林牌欣月片是由東方藥林藥業(yè)有限公司研發(fā)的一款保健品，主要成分是淫羊藿、骨碎補(bǔ)、阿膠等，前期藥理實(shí)驗(yàn)表明具有增加骨密度的作用。本實(shí)驗(yàn)主要探討其對骨質(zhì)疏松癥大鼠模型骨密度的影響，為進(jìn)一步驗(yàn)證其藥效作用提供可靠的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1樣品東方藥林牌欣月片（女士），人擬用劑量為6.84g／60kg·BW·日，送檢樣品為淺綠色片劑，由東方藥林藥業(yè)有限公司提供。

1.2實(shí)驗(yàn)動物SPF級雌性Wistar大鼠50只，體重為289～385g，由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動物技術(shù)有限公司提供，合格證號：SCXK（京）2006-0009 0156828。

1.3實(shí)驗(yàn)動物飼養(yǎng)環(huán)境SPF級實(shí)驗(yàn)動物室，合格證號：SYXK（津）2008-0004。溫度20～25℃，相對濕度40～70%，飼料由北京科澳協(xié)力飼料有限公司提供，飼料合格證號：SCXK（京）2005-0007 0152257。

1.4主要儀器原子吸收光譜儀（A-680），雙能X線骨密度儀（XR-36型），精密卡尺，動物解剖器械，萬分之一天平，動物天平，105℃烘箱，消化爐。

1.5劑量選擇本品人擬用劑量為6.84g／60kg·BW·日，送檢樣品為淺綠色片劑，因樣品不含Ca，所以未設(shè)CaCO3對照組。大鼠經(jīng)適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后按體重隨機(jī)分為5組即模型組；假手術(shù)組；受試物低、中、高三個劑量組，分別為0.57g／kg·BW、1.14g／kg·BW、2.28g／kg·BW、（分別相當(dāng)于人擬用劑量的5倍、10倍、20倍）。

1.6飼料配制參照美國營養(yǎng)研究所AIN93半成品飼料配方和實(shí)驗(yàn)大鼠全價營養(yǎng)飼料國家標(biāo)準(zhǔn)，替換飼料中來源于大豆的成分，配制不含大豆異黃酮等植物雌激素活性成分的飼料?；A(chǔ)飼料配方（g／kg）：酪蛋白230g，DL-蛋氨酸3g，玉米淀粉320g，蔗糖300g，纖維素50g，玉米油50g，混合無機(jī)鹽35g，混合維生素10g，氯化膽堿2g，分別稱取樣品228g、456g、912g粉碎后，加入AIN93基礎(chǔ)飼料至32kg，制成塊料（大鼠攝食量按體重的8%計(jì)）。

1.7試驗(yàn)方法

1.7.1卵巢切除術(shù)大鼠經(jīng)腹腔注射30mg／kg·BW的戊巴比妥鈉溶液麻醉，腹位固定后于腹中線距陰道口3～4cm處去毛，無菌條件下切開皮膚和腹肌約2～3cm，撥開脂肪層分別將兩側(cè)子宮角拉出，以止血鉗固定卵巢，將卵巢下輸卵管用絲線結(jié)扎，切除雙側(cè)卵巢，逐層縫合切口。假手術(shù)組經(jīng)手術(shù)切除約0.5g脂肪，保留雙側(cè)卵巢。各組動物術(shù)后肌肉注射2萬單位青霉素，連續(xù)3天。

1.7.2生長發(fā)育大鼠手術(shù)8天后，開始分別喂飼加入不同劑量受試物的AIN93基礎(chǔ)飼料，模型對照組和假手術(shù)組只喂飼AIN93基礎(chǔ)飼料，每組10只，單籠喂養(yǎng)，自由進(jìn)食，飲去離子水（以避免從飲水中獲得鈣），每周稱體重，記錄進(jìn)食量，實(shí)驗(yàn)周期為13周。

1.7.3股骨重量測量動物喂養(yǎng)13周后處死，剝離出一側(cè)股骨，于105℃烘箱中烤至恒重，稱量骨干重。

1.7.4股骨長度測量動物喂養(yǎng)13周后處死，剝離出一側(cè)股骨，于105℃烘箱中烘烤至恒重測量股骨長度。

1.7.5股骨密度測量用單光子骨密度儀測量股骨中點(diǎn)及股骨遠(yuǎn)心端的骨密度。

1.7.6鈣含量的測定大鼠一側(cè)股骨烤至恒重后整體采用濕法消化；用原子吸收分光光度法測定鈣含量（GB／T 5009.92-2003）。

1.8統(tǒng)計(jì)學(xué)方法用SPSS 11.5 for Windows軟件進(jìn)行方差分析檢驗(yàn)。

1.9結(jié)果判定不含鈣的產(chǎn)品，卵巢切除基礎(chǔ)對照組骨鈣含量或骨密度顯著低于假手術(shù)組，表明造成大鼠骨密度低下模型；卵巢切除+受試物組的骨鈣含量或骨密度較卵巢切除基礎(chǔ)對照組顯著增加，而其它指標(biāo)（體重除外）不顯著低于卵巢切除基礎(chǔ)對照，可判定受試物具有增加骨密度功能作用。

2 結(jié)果

2.1對大鼠體重的影響由表1可見，假手術(shù)組的大鼠體重低于模型對照組（P＜0.05），其他各組大鼠體重與模型對照組比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。各組大鼠總進(jìn)食量與模型對照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。表明欣月片對大鼠體重?zé)o影響。

表1 欣月片對大鼠體重的影響（g，x±s，n=10）

2.2對股骨長度 股骨重量 骨鈣含量的影響表2為大鼠的股骨長度、股骨重量及股骨鈣含量，可以看出，模型對照組的股骨鈣含量低于假手術(shù)組（P＜0.05），表明大鼠骨密度低下模型建立成功；各劑量受試物組大鼠股骨長度、股骨重量與模型對照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），中劑量受試物組大鼠的股骨鈣含量（每克）高于模型對照組，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。試驗(yàn)結(jié)果表明各組對股骨長度、股骨重量均無影響，欣月片中劑量組能夠顯著增加大鼠股骨鈣含量。

表2 對股骨長度、股骨重量、骨鈣含量的影響（x±s）

2.3對大鼠骨密度的影響表3為大鼠股骨遠(yuǎn)心端和股骨中點(diǎn)的骨密度，可以看出，模型對照組股骨遠(yuǎn)心端及股骨中點(diǎn)的骨密度低于假手術(shù)組（P＜0.05），表明大鼠骨密度低下模型機(jī)建立成功；低、高劑量受試物組大鼠股骨遠(yuǎn)心端和股骨中點(diǎn)的骨密度高于模型對照組，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。試驗(yàn)結(jié)果表明低、高劑量受試物組能顯著提高股骨遠(yuǎn)心端和股骨中點(diǎn)的骨密度。

表3 對大鼠骨密度的影響（n，x±s）

3 討論

骨質(zhì)疏松癥（Osteoporosis，OP）是以骨量減少、骨質(zhì)微觀結(jié)構(gòu)退化為特征，致使骨脆性增加以及易于發(fā)生骨折的一種全身性疾病。隨著人口的老齡化，骨質(zhì)疏松目前在世界上已成為一個較大的社會問題，嚴(yán)重影響高齡人群的健康和壽命。在中醫(yī)學(xué)古籍中，雖有與骨質(zhì)疏松癥表現(xiàn)相似的論述，但并沒有系統(tǒng)的病名，根據(jù)其臨床癥狀可分別將其對應(yīng)隸屬于“骨痿”“腰痛”“骨痹”“骨折”“絕經(jīng)前后諸癥”“虛勞”等范疇［4］。

東方藥林牌欣月片，其主要成分為骨碎補(bǔ)、淫羊藿、阿膠等，有實(shí)驗(yàn)研究表明，其主要成分骨碎補(bǔ)具有增加骨密度和防治骨質(zhì)疏松癥的發(fā)生的作用［5-7］。淫羊藿中的淫羊藿苷不僅可以明顯抑制破骨細(xì)胞的分化，同時具有抑制破骨細(xì)胞的骨吸收的功能［8］，淫羊藿可提高卵巢切除大鼠的骨密度、最大載荷和抗彎剛度，降低血清TRACP和BALP的活性，增強(qiáng)去卵巢骨質(zhì)疏松大鼠抗外力沖擊的能力，可有效抑制骨量丟失，防止骨質(zhì)疏松的發(fā)生［9］。阿膠可加強(qiáng)巨核細(xì)胞的聚集及增強(qiáng)其活性，并可促進(jìn)軟骨細(xì)胞、成骨細(xì)胞的增殖及合成活性，加快軟骨內(nèi)骨化，促進(jìn)骨愈合［10］。綜上所述，東方藥林牌欣月片具有增加骨密度的功效。近年來從天然資源中尋找活性物質(zhì)用于防治疾病和維持機(jī)體健康已成為人們關(guān)注的話題。因此，東方藥林牌欣月片具有很好的開發(fā)研究前景。

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Ex p e rime n tal St u d y o n t he Imp r o v emen t o f Bo ne Min e r al Den sit y b y Cr e s c en t Tablet s

LeiXiaolin1Qian Xingwen1Peng Ju2Li Junkui2Liu Wei1
（1 Oriental Pharmaceutical Co.，Ltd.Guangzhou，510515，China；2 Southern Medical University，Guangzhou，510515，China）

Xinyue Table；ovariectomy；bone mineral density；Chinese medicine therapy

10.3969／j.issn.1672-2779.2014.04.098

：1672-2779（2014）-04-0158-02

蘇 玲 本文校對：劉 儀

2013-11-09）

Asbtract：ObjectiveTo observe the influence of Oriental medicine lin Xinyue tablet of rat bone mineral density in rats.MethodsAccording to the weight of the animals were randomly divided into model group，sham-operation group，Xinyue tablet of high-dose，medium-dose and lowdose three dose groups.Groups of rats for ovariectomy（sham-operation group to keep bilateral ovaries），penicillin were applied in rat for continuous 3 days.The eighth day after surgery，the feeding with different dose AIN93，model control group and the control group only feeding AIN93，13 weeks，weight of the femur，length of femur，density of femur，calcium content were measured.ResultsXinyue tablet had no effect on weight，the femur length，femur weight in rats，medium-dose of Xinyue tablet can significantly increase the femoral calcium content，low dose group and high dose group could significantly improve the femoral distant-end bone mineral density and middle femoral bone mineral density.ConclusionsXinyue tablet have increased the rat bone mineral density function.