楊軍輝 張 靜 周小青

（湖南中醫(yī)藥大學(xué)，長(zhǎng)沙410007）

益氣活血、通陽(yáng)化痰法對(duì)實(shí)驗(yàn)性動(dòng)脈粥樣硬化家兔血清對(duì)氧磷酶1活性的影響

楊軍輝 張 靜 周小青

（湖南中醫(yī)藥大學(xué)，長(zhǎng)沙410007）

目的觀察益氣活血、通陽(yáng)化痰法對(duì)實(shí)驗(yàn)性動(dòng)脈粥樣硬化（AS）家兔血清對(duì)氧磷酶1（PON-1）活性的影響。方法將54只家兔隨機(jī)分為6組，每組9只。分為空白對(duì)照組、模型對(duì)照組、辛伐他汀組、中藥大、中、小劑量組。除空白對(duì)照組外其余各組給予高脂飼料喂養(yǎng)4周后開(kāi)始灌胃給藥，1次／d，連續(xù)4周后處死動(dòng)物，測(cè)定血清PON-1活性。結(jié)果模型組的PON-1活性較空白對(duì)照組明顯降低（P＜0.01）。中藥各劑量組可以有效地升高血清PON-1活性，其中5g／kg劑量組和模型組比較差異十分明顯（P＜0.01），2.5g／kg劑量組和模型組比較差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論益氣活血、通陽(yáng)化痰法可通過(guò)升高血清PON-1活性來(lái)防治AS。

益氣活血；通陽(yáng)化痰；動(dòng)脈粥樣硬化；對(duì)氧磷酶1

動(dòng)脈粥樣硬化（Atherosclerosis，AS）是引起冠心病等心腦血管疾病的主要病理基礎(chǔ)［1-3］。因于年老久病，臟腑功能虛損，正氣虧虛，氣虛血瘀，痹阻胸中。胸陽(yáng)不振，痰濁內(nèi)生，痰瘀痹阻心脈而發(fā)生AS［4］。益氣活血、通陽(yáng)化痰法切中AS之病機(jī)［5］，可作為其基本治法。本文旨在通過(guò)運(yùn)用益氣活血、通陽(yáng)化痰法對(duì)實(shí)驗(yàn)性AS家兔血清PON-1活性的影響，以探討其對(duì)AS形成的影響。

1 材料與方法

1.1藥品、試劑和儀器辛伐他?。ǔ啥既A宇制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：H19990002）；中藥方（以補(bǔ)陽(yáng)還五湯合瓜蔞薤白半夏湯進(jìn)行化裁，組成：黃芪20g，赤芍15g，川芎15g，桃仁12g，紅花12g，薤白12g，瓜蔞15g，半夏12g）均購(gòu)自湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院中藥房；高脂飼料（北京科澳協(xié)力飼料有限公司生產(chǎn)）；乙酸苯脂（PA）（由北京百靈威化學(xué)技術(shù)有限公司提供，批號(hào)：A0220142）；338453型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（美國(guó)Agilent公司）。

1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物日本大耳白家兔54只，雄性，體重2.0～2.5kg，由湖南中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，動(dòng)物許可證號(hào)：SYXK（湘）2009-0001。

1.3分組給藥及模型的建立將日本大耳白兔54只隨機(jī)分為6組。①空白對(duì)照組：普通飼料，生理鹽水灌胃，10ml／d；②模型對(duì)照組：按文獻(xiàn)指導(dǎo)方法［6］，實(shí)驗(yàn)前4周以79.5%基礎(chǔ)飼料加15%蛋黃粉、0.5%膽固醇和5%豬油喂食，后4周將膽固醇去掉，給予80%基礎(chǔ)飼料加15%蛋黃粉和5%豬油喂食，生理鹽水灌胃，10ml／d；③辛伐他汀組：模型組＋辛伐他汀2mg／kg；④中藥方大劑量組：模型組＋中藥方5g／kg；⑤中藥方中劑量組：模型組＋痰瘀同治方2.5g／kg；⑥中藥方小劑量組：模型組＋痰瘀同治方1.25g／kg。各給藥組把藥物溶于10ml蒸餾水中，在4周時(shí)開(kāi)始分別灌胃給藥持續(xù)4周，均1次／d，于末次給藥后第2日晨空腹頸總動(dòng)脈取血，凍存。

1.4 PON-1的測(cè)定采用338453型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)進(jìn)行測(cè)定。測(cè)定原理是：PON-1可將乙酸苯脂（PA）水解為乙酸和苯酚（Phenol），苯酚在270nm波長(zhǎng)處有強(qiáng)吸收峰，在一定濃度內(nèi)，其濃度與吸光度呈線性關(guān)系，單位時(shí)間內(nèi)生成的苯酚量可反應(yīng)PON-1的活性。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法實(shí)驗(yàn)結(jié)果均采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差±s）表示，采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件處理。資料的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析用單因素方差分析，方差齊性用Student-New-man-Keuls檢驗(yàn)，方差不齊用Tamhane's T2檢驗(yàn)。P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

益氣活血、通陽(yáng)化痰法對(duì)家兔血清PON-1活性的影響。見(jiàn)表1。

表1 益氣活血、通陽(yáng)化痰法對(duì)家兔血清PON-1活性的影響±s，U／ml）

表1 益氣活血、通陽(yáng)化痰法對(duì)家兔血清PON-1活性的影響±s，U／ml）

注：與正常對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較，＃P＜0.05，＃＃P＜0.01

組別劑量（kg）n PON-1 activit y空白對(duì)照組—9 244.90±18.79＃＃模型對(duì)照組—9 128．01±25．43**辛伐他汀組2mg 9 175．59±50．71*中藥方大劑量組5g 9 218．80±40．84＃＃中藥方中劑量組2．5g 9 180．68±48．34＃中藥方小劑量組1．25g 9 167．16±62．68**

由表1可知，實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，模型組的PON-1活性較正常對(duì)照組明顯降低（P＜0.01）。中藥方各劑量組可以有效地升高血清PON-1活性，其中5g／kg劑量組和模型組比較差異十分明顯（P＜0.01），2.5g／kg劑量組和模型組比較差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

3 討論

動(dòng)脈粥樣硬化（AS）的發(fā)病過(guò)程十分復(fù)雜，其確切的病因尚未完全闡明，一般認(rèn)為由多個(gè)遺傳和環(huán)境因素相互作用所致。大量流行病學(xué)調(diào)查揭示不少遺傳或環(huán)境因素與AS的發(fā)生存在明顯的相關(guān)性，但未必一定具有直接的因果關(guān)系。由于這些因素尚不能作為確切的病因，習(xí)慣上被稱為動(dòng)脈粥樣硬化的危險(xiǎn)因素［7］。

對(duì)氧磷酶l（PON-1）是高密度脂蛋白（HDL）顆粒中的一種抗氧化酶。氧化修飾低密度脂蛋白（ox-LDL）是AS發(fā)生發(fā)展的始動(dòng)因素，PON-1可水解特異性膽固醇脂和磷脂等脂質(zhì)過(guò)氧化物，保護(hù)LDL和HDL免受氧化修飾。PON-1通過(guò)促進(jìn)已被氧化的LDL上特定的脂質(zhì)分解、抑制巨噬細(xì)胞對(duì)膽固醇攝取、抑制巨噬細(xì)胞膽固醇的生物合成以及促進(jìn)由HDL介導(dǎo)的膽固醇從巨噬細(xì)胞中流出等方面的作用從而達(dá)到抑制巨噬細(xì)胞形成，防止動(dòng)脈硬化。研究發(fā)現(xiàn)［8］：PON-1基因被敲除的鼠巨噬細(xì)胞與提純的人類PON-1共同培養(yǎng)，在巨噬細(xì)胞膽固醇合成方面呈現(xiàn)出劑量依賴性抑制效應(yīng)高達(dá)80%，這些作用與PON-1處理后巨噬細(xì)胞溶血磷脂酸膽堿形成有關(guān)。PON-1可能還通過(guò)降低脂質(zhì)過(guò)氧化物在血管壁的沉積，影響冠狀動(dòng)脈粥樣硬化的進(jìn)程。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)［9，10］：PON-1具有抗低密度脂蛋白氧化作用，在抑制慢性心血管疾病尤其冠心病的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。Mackness等［11］在動(dòng)物模型體內(nèi)，發(fā)現(xiàn)消融的PON-1基因具有抗炎、抗AS的活性，而在人類過(guò)表達(dá)的PON-1具有抗炎、抗AS的活性。楊麗霞等［12］通過(guò)測(cè)定300例冠心病患者血清中的PON-1水平，表明PON-1水平與冠心病及其嚴(yán)重程度密切相關(guān)，其參與了AS的發(fā)生發(fā)展。

動(dòng)脈粥樣硬化可歸屬中醫(yī)“痰濁”、“胸痹”等病癥的范疇。其發(fā)病系因臟腑功能失調(diào)，氣血津液運(yùn)行不暢，產(chǎn)生痰濁、瘀血、氣滯等病邪，其病性為本虛標(biāo)實(shí)。脂質(zhì)代謝異常是動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)病的最重要危險(xiǎn)因素，而痰瘀互結(jié)是脂質(zhì)異常的主要病理基礎(chǔ)［13］。痰來(lái)自津，瘀本于血，生理上屬“津血同源”，病理上為“痰瘀同病”。津液虧虛，生瘀生痰；津運(yùn)障礙，因痰致瘀；血運(yùn)失調(diào)，因瘀致痰，均可形成痰瘀互結(jié)為病［14，15］。正如《明醫(yī)雜著》曰：“若血濁氣滯則凝聚為痰，氣虛死血痰飲為言?！泵鞔_提出了痰瘀相關(guān)。益氣活血、通陽(yáng)化痰法切中AS之病機(jī)，是治療AS的基本方法。方中黃芪益氣，意在氣旺血行，瘀去絡(luò)通；赤芍、川芎、桃仁、紅花活血化瘀，與黃芪相配，有益氣活血、祛瘀通絡(luò)之功；薤白通陽(yáng)化痰，瓜蔞滌痰散結(jié)，半夏燥濕化痰，三者相伍，有通陽(yáng)化痰散結(jié)之效。諸藥合用，共奏益氣活血、通陽(yáng)化痰之功。李磊等［16］經(jīng)實(shí)驗(yàn)表明，給予痰瘀同治方的家兔，其PON-1活性較模型組明顯升高，從而起到抗AS的作用。本研究結(jié)果顯示，益氣活血、通陽(yáng)化痰法可升高血清PON-1的活性，而PON-1可保護(hù)LDL免受氧化，防止AS的形成，為益氣活血、通陽(yáng)化痰法進(jìn)一步用于冠心病的臨床治療提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

［1］楊翠玲．心腦血管病的預(yù)防與治療探討［J］．中國(guó)現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2010，3（3）：226．

［2］王宏宇．血管醫(yī)學(xué)未來(lái)發(fā)展的方向是滿足全身血管病變綜合防治需要［J］．心血管病學(xué)進(jìn)展，2013，34（4）：15-18．

［3］彭紹杰，楊?。嗅t(yī)藥治療頸動(dòng)脈粥樣硬化臨床研究近況［J］．中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2013，11（3）：347-349．

［4］王椿野，趙振武，李新龍，等．基于現(xiàn)代文獻(xiàn)的動(dòng)脈粥樣硬化中醫(yī)病機(jī)研究［J］．環(huán)球中醫(yī)藥，2013（2）：92-95．

［5］劉秀美，張艷，于睿，等．淺談心主血脈與動(dòng)脈粥樣硬化的相關(guān)性［J］．世界中西醫(yī)結(jié)合雜志，2010，5（003）：190-191．

［6］施新猷．現(xiàn)代醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)［M］．北京：人民軍醫(yī)出版社，2000：470．

［7］楊永宗，阮長(zhǎng)耿，唐朝樞，等．動(dòng)脈粥樣硬化性心血管病基礎(chǔ)與臨床［M］．北京：科學(xué)出版社，2004：10．

［8］ROZENBERGO，SHINDM，AVIRAMM．Human serum paraoxonasel（PON1）dreasesmaerophage cholesterol biosynthesis：a possible role for its Phosphor-lipase-A2 ativity and lysophosphatidylcholine formation［J］．Arterioseler Thromb Vasc Bio，2003，23：461-467．

［9］唐三華，匡希斌．對(duì)氧磷酶生物學(xué)特性與心血管疾病研究進(jìn)展［J］．社區(qū)醫(yī)學(xué)雜志，2012，10（003）：14-16．

［10］王帆，白濤，李鵬鵬，等．對(duì)氧磷酶的結(jié)構(gòu)，活性及基因多態(tài)性與冠心病的關(guān)系［J］．中國(guó)老年學(xué)雜志，2013，33（005）：1203-1205．

［11］Mackness B，Mackness M．Anti-inflammatory properties of paraoxonase-1 in atherosclerosis／／Paraoxonases in Inflammation，Infection，and Toxicology［M］．Humana Press，2010：143-151．

［12］楊麗霞，陳文山，齊峰，等．血漿髓過(guò)氧化物酶和對(duì)氧磷酶水平與冠心病及其嚴(yán)重程度的相關(guān)性［J］．中華老年多器官疾病雜志，2012，11（9）：686-689．

［13］馮純慧，呂建衛(wèi)，潘科廷，等．痰瘀同治法在心血管疾病治療中的研究現(xiàn)狀［J］．疑難病雜志，2008，7（2）：126-127．

［14］房肖曼，陳曉．中醫(yī)辨治痰瘀互結(jié)型冠心病研究進(jìn)展［J］．遼寧中醫(yī)雜志，2008，36（8）：1272-1274．

［15］呂翠芬，劉玉珍，呂信慶．中醫(yī)對(duì)冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病（胸痹）的理論研究及治療探討［J］．中國(guó)醫(yī)藥指南，2012，10（17）：294-294．

［16］李磊，劉建勛，李欣志，等．痰瘀同治方對(duì)兔動(dòng)脈粥樣硬化對(duì)氧磷酶活性及炎癥因子的影響［J］．中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2009（008）：53-56．

Effect on the Enzyme Activity of Paraoxonase 1（PON-1）in the Experimental Atheroscler osis Rabbits Serum by Method of the Qi-Replenishing，Blood-Activating，Yang-Invigorating and Phlegm-resolving

Yang Junhui Zhang Jing Zhou Xiaoqing
（Hunan university of traditional Chinese medicine,Changsha,410007,China）

ObjectiveTo observe the effect of qi-replenishing，blood－activating，yang－invigorating and phlegm－resolving method on serum paraoxonase 1（PON-1）activity of rabbits with experimental arteriosclerosis（AS）．Methods54 rabbits were randomized equally into 6 groups，including blank control group，modeling group，therapy group with Simvastatin，and other 3 therapy groups with high，medium，low dosage of Chinese medicinal respectively．Rabbits from all groups，except blank control group，were fed with high fat diet for 4 weeks，and received intragastric administration of medication afterwards，once daily for 4 consecutive weeks．Then all groups of rabbits were killed and tested for serum PON-1 activity．ResultsSerum PON-1 activity of modeling group were significantly decreased（P＜0.01），compared with blank control group．All therapy groups with different dosage of Chinese medicinal can effectively rise serum PON－1 activity，thereamong，highly significant difference（P＜0.01）was found between 5g／kg dosage group and modeling group，whereas there was also significant difference（P＜0.05）between 2．5g／kg dosage group and modeling group．Conclusionqi-replenishing，blood-activating，yang-invigorating and phlegm-resolving method can control AS via its elevation of serum PON-1 activity．

Qi-replenishing and blood-activating；Yang-invigorating and phlegm-resolving；Arteriosclerosis；Paraoxonase 1

10.3969／j.issn.1672-2779.2014.06.094

：1672-2779（2014）-06-0148-02

蘇 玲 本文校對(duì)：蘇 玲

2013-12-28）