楊華，李希,2，高華娟，施婷婷，武亞曉，李遠輝

·綜述進展·

中藥質(zhì)量生物活性檢測的發(fā)展現(xiàn)狀及思考

楊華1，李希1,2，高華娟1，施婷婷1，武亞曉1，李遠輝1

本文首先分析了目前中藥質(zhì)量控制現(xiàn)狀及存在的問題，指出生物活性檢測對于中藥質(zhì)量控制的意義以及可行性，進而闡述了中藥質(zhì)量生物活性檢測在中國的研究進展和應(yīng)用狀況，并對該方法進一步完善和發(fā)展提出了自己的思考和展望。

中藥生物活性檢測法；中藥質(zhì)量控制；發(fā)展現(xiàn)狀；思考展望

目前，中藥質(zhì)量控制主要是以理化測定為主，即主要對中藥的化學成分進行測定，但中藥的療效既不是任何單一活性成分的作用，也不是多種成分活性的簡單相加，復方制劑尤其如此[1]，因此這種化學檢測方法對于成分復雜的中藥來說，并不完全適宜。中藥的化學成分較復雜，這與生物制品相類似。在中藥質(zhì)量控制方面，可考慮在化學測定的基礎(chǔ)上，參考生物制品的質(zhì)量控制和質(zhì)量檢定方法，在中藥質(zhì)量控制中引入生物活性檢測來保證中藥質(zhì)量的均一性以及中藥療效的穩(wěn)定。

生物活性檢測方法，又可稱為生物檢定法，是根據(jù)藥物的生物效應(yīng)或功能主治，利用整體動物、離體組織、器官、細胞以及微生物和相關(guān)生物因子等為實驗系統(tǒng)，以檢測藥物生物活性（含藥效和毒性）的一種方法[2]。20世紀50年代生物活性檢測開始應(yīng)用于中藥，之后延伸出了中藥質(zhì)量生物活性檢測的概念，是在現(xiàn)有質(zhì)控方法和標準的基礎(chǔ)上，采用生物檢定方式和方法來評價和控制中藥質(zhì)量，以保證中藥的安全有效、穩(wěn)定可控。

本文從目前中藥質(zhì)量控制中存在的問題入手，探討生物活性檢測對中藥質(zhì)量控制的意義，分析該方法在中藥質(zhì)量控制中應(yīng)用的可行性，以及我國生物活性檢測法在中藥方面應(yīng)用的進展情況，對中藥生物活性檢測方法進一步的發(fā)展進行了思考和展望。

1 中藥質(zhì)量控制的現(xiàn)狀及存在的問題

隨著科學技術(shù)的迅猛發(fā)展，我國的中藥質(zhì)量標準在不斷提高。2010年版《中國藥典》在質(zhì)量可控性方面，大幅度增加了符合中藥特點的專屬性鑒別方法和含量測定方法，這些修訂都為中藥質(zhì)量控制提供了參考。但由于中藥本身的復雜性及科學技術(shù)條件、研究思路和方法等因素局限，現(xiàn)行中藥質(zhì)控模式和方法不僅難以有效控制和評價中藥質(zhì)量, 更難以反映其安全性和有效性[3]，中藥質(zhì)量控制還存在以下一些問題。

1.1 中藥質(zhì)量控制模式單一

世界藥品(含化學藥、生物藥和中藥) 質(zhì)量控制模式包括感官評價、生物評價和化學評價。從中藥質(zhì)量控制模式來說，其模式主要拘泥于單一的“找成分，測含量”的化學評價模式。雖然從技術(shù)先進性看，化學評價勝于生物評價，生物評價勝于感官評價。但最先進的不一定是最好，關(guān)鍵在于適用。目前，中藥質(zhì)量控制模式單一，量而不準，難關(guān)藥效，難控難評，已成為中藥標準研究的主要困局[4]。而且中藥生產(chǎn)質(zhì)量管理模式是基于天然藥物化學的模式即“惟成分論”的理念發(fā)展而來的，其意圖是通過測定某一有效化學成分含量，并結(jié)合理化鑒別、色譜等方法，使中藥質(zhì)量具有連續(xù)的一致性，在此基礎(chǔ)上保證中藥的安全、有效。這種模式存在著局限性，從古至今，中藥都不是以成分作為其治病依據(jù)。所謂中藥，是指在中醫(yī)理論指導下應(yīng)用的藥物，現(xiàn)在很多研究人員研究一藥或一方的有效成分，忽略了中藥是各種藥組合起來整體發(fā)揮療效的，這種中藥“西化”的模式并不能真正檢驗中藥的質(zhì)量[5]。

1.2 中藥指標性成分的測定不能完全反應(yīng)中藥藥效

現(xiàn)行大多數(shù)中藥的“指標性”成分不一定是其專屬性成分，也不一定是其有效成分，即使既是專屬性成分也是有效成分，其譜效關(guān)系、量效關(guān)系、毒效關(guān)系目前尚不清楚，這給中藥質(zhì)量的評定帶來困難。上市前與上市后的藥品、不同基源的藥品、生產(chǎn)工藝微小改變的藥品、來源生產(chǎn)一致的不同批藥品，盡管都符合現(xiàn)在中藥低含量成分測定的質(zhì)量標準，但是其活性成分存在很大變數(shù)，臨床效應(yīng)沒有重現(xiàn)性。這樣的問題長久了，引來的是病人和醫(yī)生對藥物有效性的擔心，反過來是對中醫(yī)藥的一種傷害[6]。

1.3 中藥質(zhì)量管理中的化學指紋圖譜技術(shù)也存在一定問題

中藥指紋圖譜并不能全面的反應(yīng)復雜的中藥體系，中藥成分復雜多樣，而指紋圖譜僅是一味中藥中的一個或幾個特征成分為指標，并非是整味中藥材所含的全部化學成分[7]，它的檢測不全面，不能對含多肽、多糖類等活性成分建立指紋圖譜；其次，中藥指紋圖譜的發(fā)展尚淺，與藥效學和生物等效性研究之間缺少聯(lián)系。

總之，現(xiàn)行的中藥質(zhì)量控制模式和方法僅能控制部分指標性成分的一致性和穩(wěn)定性，不能直接反映有效性和安全性，難以完全、有效控制中藥的質(zhì)量，尚需要補充和完善。

2 生物活性檢測對于中藥質(zhì)量控制的意義

質(zhì)量穩(wěn)定可控是保證中藥有效性和安全性的重要前提[8]。針對中藥質(zhì)量控制面臨的僅能控制部分指標性成分的現(xiàn)狀，生物活性檢測法[9]對于一些有效成分不明確，多組分、結(jié)構(gòu)復雜，理化方法不能有效鑒定并具有生物活性的中藥以及有些生物技術(shù)藥物能很好的評估。生物反應(yīng)的強度，還可以較直觀地反映藥物總體含量或效價[10]，從而確定它們的質(zhì)量標準，有效地保證中藥的有效性和安全性。對于中藥質(zhì)量控制來說，生物檢定比理化測定更具實際價值，更適合中藥的質(zhì)量控制?？傊?，生物活性檢測法可以很好地判定中藥的質(zhì)量優(yōu)劣及療效的安全性、穩(wěn)定性，它是對現(xiàn)有中藥質(zhì)量控制的補充。

3 生物活性檢測法對中藥控制質(zhì)量的可行性

從物質(zhì)內(nèi)涵看，中藥“近”生物制品而“遠”化學藥[11]。中藥是天然物質(zhì)，因其化學成分復雜，活性成分多，藥效成分和毒性成分不清晰等特點，與生物制劑有許多相似之處，因此采用生物活性檢測法控制中藥質(zhì)量從理論上是可行的。

從生產(chǎn)工藝對藥物性質(zhì)和藥效影響來看，也是中藥“近”生物制品而“遠”化學藥[11]。生物制品的生產(chǎn)工藝和條件會對其藥性和藥效產(chǎn)生影響，生產(chǎn)工藝不同，生物制品的藥物性質(zhì)和藥效也會不同；而中藥與生物制品一樣，其產(chǎn)地、種植條件、采收時間、炮制工藝、制劑工藝等條件不同，都會影響到中藥的性質(zhì)和療效。

在中藥質(zhì)量生物活性檢測法研究過程中，技術(shù)方面已有一些新的突破，有人提出了生物測定的中藥質(zhì)量控制新模式與方法。例如，將對照藥材提取物作為中藥質(zhì)量生物控制的標準物質(zhì)，檢測不同品種大黃的止瀉效價，建立可用于瀉下類中藥質(zhì)量控制的生物檢定方法及參照物質(zhì)[12]；鄢丹等以黃連的質(zhì)量生物評價控制為例，從基原鑒定、常規(guī)檢查、化學分析和生物測定等角度對其工作參照物（道地藥材提取物）的研制過程進行闡釋，凝煉共性技術(shù)，形成具有普適性的中藥質(zhì)量生物評價與控制用生物參照物的選擇與標化流程[13]。這些方法的建立，為中藥質(zhì)量生物活性檢測法的研究提供了技術(shù)性的參考。

4 中藥質(zhì)量生物活性檢測的研究進展

早在20世紀50年代，我國醫(yī)藥學者就開始利用生物活性檢測法進行中藥質(zhì)量控制方面的研究。例如，1951年我國生藥學家樓之岑院士報告了利用小鼠口服植物性瀉劑（大黃）排出濕便效應(yīng)，建立了瀉下藥的生物活性檢測方法[14]；1997年周重陽等利用抗菌效應(yīng)測定大蒜油中大蒜辣素和大蒜新素等活性物的含量[15]；2004年楊明華采用子宮平滑肌建立了益母草制劑的生物活性檢測方法[16]。這些研究，為中藥質(zhì)量生物活性檢測方法的建立奠定了基礎(chǔ)，但基于當時技術(shù)水平條件的限制，方法并不成熟，操作比較繁瑣，精密度和重現(xiàn)性不高，在實際研究中尤其是中藥質(zhì)量標準中沒有得到推廣應(yīng)用。

從21世紀開始，生物活性檢測法在中藥質(zhì)量控制中有了較大的發(fā)展，一些生物活性檢測技術(shù)測定中藥含量的方法開始收入藥典等法定標準中，如《中國藥典》2005年版一部中水蛭通過計算水蛭粉末的抗凝血酶活性的方法進行含量測定；消栓腸溶膠囊（國家藥品標準WS3-571(Z-67)-2005(Z)）的效價測定方法借鑒了生物制品中酶效價測定方法。有的方法雖還未收入法定標準，但也比較成熟，如張恩戶等采用體外抑菌法測定連翹及其制劑的抗菌活性，用生物活性檢測法作為連翹及其制劑的質(zhì)量控制方法[17]；生物熱活性圖譜可以區(qū)別高溫處理樣品及污染變質(zhì)樣品，并可以全面反映模型生物的熱生物學信息，提供了專屬性較強的二維信息，可作為化學特征圖譜的有益補充，注射用雙黃連凍干粉針用生物熱活性圖譜，有效地檢測了化學成分的含量變化[18]。這些生物活性測定法在中藥質(zhì)量控制方面得到很好的應(yīng)用，都有益于中藥質(zhì)量生物活性檢測的進一步發(fā)展。

如今中藥生物活性檢測方法越來越多，越來越完善，目前中藥質(zhì)量生物活性檢測常用的方法，主要有[19]：（1）使用高等生命整體或部分組織、器官等導致生命體最終死亡的方法。如小鼠耳腫脹炎癥模型檢測人工麝香抗炎活性的方法。（2）使用低等生命體或部分組織、器官的方法。如水蛭抗凝血酶活性檢測抗凝血中藥；用紅細胞凝集活性檢測法檢測板藍根抗病毒活性[20]；以及抑菌圈檢測法測定大蒜油活性[21]等。（3）使用不危害生命體自身，通過機體的一些特征性生物活性標記物含量或能量變化來評價的方法。如肖小河等通過有機體特征能量變化來評價黃連活性的方法等[22]。這種方法目前在中藥質(zhì)量控制方面的應(yīng)用還不成熟，檢測的活性特征范圍比較局限，但在國外已經(jīng)非常廣泛（如用肝細胞分析藥物的肝臟毒性），有待于進一步的開發(fā)應(yīng)用。

總之，近年來隨著生命科學的發(fā)展，以現(xiàn)代生物學理論為前提和基礎(chǔ)，選擇一個合適的指標，對中藥進行整體上的功能活性評價，并以這種生物效應(yīng)的量化考核為依據(jù)來評價中藥質(zhì)量的方法日益成熟，但目前生物測定方法在中藥質(zhì)量控制中的應(yīng)用還是不多。雖然已有一些依據(jù)藥物本身具有的藥理或毒性特征進行的評價方法，但整體上值得倡導使用的很少。

5 中藥生物活性檢測方法進一步發(fā)展的思考和展望

現(xiàn)如今，中藥生物活性檢測用不同方面的生物效應(yīng)來控制其質(zhì)量，盡量多地反應(yīng)其“功能主治”，彌補了中藥質(zhì)量控制的缺陷。但中藥生物活性檢測方法還處于起步階段，各方面都還很不健全，需要進一步完善，更好的保證中藥質(zhì)量的安全有效，完善中藥質(zhì)量控制模式。

首先，中藥生物活性檢測應(yīng)該選擇臨床大量使用、療效確切、人民群眾高度認可的藥物進行，因為這些藥物在臨床上有確定的療效，必然有良好的生物效應(yīng)，同時也有利于中藥生物活性測定的推廣。如云南白藥、藿香正氣液等。

其次，理想的中藥生物活性檢測方法的建立，需要與其他生物制劑一樣進行方法學研究，包括：供試品和對照品溶液的制備、線性考察、穩(wěn)定性實驗、精密度實驗、重現(xiàn)性試驗和回收率試驗等。作為藥品質(zhì)量控制方法，理想的中藥質(zhì)量生物檢定法一定要滿足上述各項的具體要求[2]，須具備定量藥理學與藥檢分析的雙重屬性與要求，即中藥質(zhì)量生物檢定既包括試驗設(shè)計、量化指標、劑間距、分組、對照可靠性檢驗等定量藥理學的內(nèi)容，還包括線性范圍、精密度、重現(xiàn)性、甚至回收率等藥物分析的內(nèi)容。如實驗室需要進行藥理實驗研究，像解熱、抗炎、抑菌等實驗，建立基于生物活性檢測的中藥藥理活性評價模式，然后用生物統(tǒng)計的方法篩選出比較適宜的生物效價檢測方法。

此外，一些人提出的基于道地藥材與生物測定的質(zhì)量控制模式雖然在測量一些中藥的有效成分、生物活性方面已經(jīng)取得初步進展，但是條件還不是很成熟。例如，生物測定所需要的參照物需要取道地藥材，生長條件、采收時間、處理都必須規(guī)范化，而中藥中的很多藥材都達不到這種標準；其次，生物測定法所用的對照藥材或樣品處理方法還有待進一步研究。這些方法的規(guī)范化也為今后研究中藥生物活性測定的發(fā)展提供了方向。

總之，生物活性測定在中藥質(zhì)量控制方面已初步應(yīng)用，方法還有待完善和提高，但該方法應(yīng)是中藥質(zhì)量控制中一個不可或缺的部分，隨著中藥生物活性測定在控制中藥質(zhì)量方面更多的探索和應(yīng)用，中藥將來必將能更科學地完善其質(zhì)量標準，從而在保障其安全性、有效性方面更具有說服力，并且得到更好的推廣和應(yīng)用。

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（責任編輯：何瑤）

The development situation and thinking of the Chinese traditional medicine biological quality testing

YANG Hua1, LI Xi1,2, GAO Hua-juan1, SHI Ting-ting1, WU Ya-xiao1, LI Yuan-hui1//(1.Chengdu University of Traditional Chinese medicine, Chengdu 610072, Sichuan;2.Sichuan Province, Chinese Academy of Sciences Institute of Medicine, Chengdu 610031, Sichuan)

This paper analyzes the current status and problems of quality control of Traditional Chinese medicine, and points out the bioassay signifcance and feasibility for it. And then the paper describes research progress and the application status of biological activity of TCM in China. Finally, the paper puts forward some thinking and expectations to the further development and improvement of the bioactivity detection method.

Traditional Chinese medicine’s biological activity detection; Traditional Chinese medicine quality control; the present situation of development; thinking and expectations

R 28

A

1674-926X(2014)01-015-04

1.成都中醫(yī)藥大學，四川 成都 610072；2.四川省中醫(yī)藥科學院中醫(yī)研究所，四川 成都 610031

楊華，女（1988-），在讀碩士研究生，主要從事中藥新制劑、新劑型及中藥新技術(shù)方向研究Email:846087231@qq.com

李希，女（1969-），主任中藥師，主要從事中藥新制劑、新劑型及中藥新技術(shù)方向研究Email:syslx2003@aliyun.com

2013-05-24