■李朝紀(jì) 王驥騰 韓 濤 丁 建

(浙江海洋學(xué)院水產(chǎn)營養(yǎng)與飼料實驗室，浙江舟山316000)

維生素C是一種水溶性維生素，又名抗壞血酸，在魚體內(nèi)作為細(xì)胞氧化相關(guān)酶的激活劑，參與鐵離子轉(zhuǎn)運并促進(jìn)其吸收，同時具有緩解應(yīng)激反應(yīng)、提高免疫力、促進(jìn)生長和飼料轉(zhuǎn)化的作用。一般魚體自身不能合成維生素C或合成量遠(yuǎn)不能滿足其需要量，若飼料中缺乏維生素C或添加量不足，會導(dǎo)致缺乏癥的出現(xiàn)，包括生長不良、脊柱側(cè)彎、眼球突出等癥狀。

日本黃姑魚(Nibea japonnica)屬石首魚科、黃姑魚屬，分布于我國東海及日本南部海域。其肉質(zhì)鮮美、抗病性好、生長快速，被選為東海區(qū)域網(wǎng)箱養(yǎng)殖和海區(qū)放流的優(yōu)選經(jīng)濟(jì)品種。但有關(guān)日本黃姑魚營養(yǎng)需要方面的研究較少，僅有日本黃姑魚幼魚蛋白、脂肪需要量的報道，有關(guān)其維生素C需要量的研究尚未見報道。本實驗采用單因素梯度實驗法，以生長、體組成及組織中VC積累量來評價日本黃姑魚幼魚的VC適宜需求量，以期為日本黃姑魚人工配合飼料的開發(fā)提供參考。

1 材料與方法

1.1 實驗飼料制備

實驗飼料配方及成分分析見表1。配制了6組等能、等氮的飼料，以美國海鮮魚粉和豆粕為蛋白源，魚油和豆油為脂肪源，玉米淀粉為糖源。分別添加了不同水平的VC，添加量分別為0、50、150、300、600、1 200 mg/kg飼料，VC的添加形式為VC單磷酸酯（來自杭州天農(nóng)生物營養(yǎng)技術(shù)有限公司，飼料級L-抗壞血酸-2-磷酸酯，折合維生素C≥35%）。其余原料為市售食品級。所有干物質(zhì)原料過60目篩，經(jīng)充分混合再添加脂類物質(zhì)和水混合，用雙螺桿擠條機(jī)制成2.5 mm粒徑的飼料，50℃風(fēng)干后保存于-20℃冰箱待用。

表1 實驗飼料配方及成分分析（干重%）

1.2 實驗魚及養(yǎng)殖管理

實驗所用的日本黃姑魚幼魚來自浙江省水產(chǎn)研究所西軒實驗基地。實驗開始之前，飼喂不含VC的基礎(chǔ)飼料暫養(yǎng)兩周。暫養(yǎng)結(jié)束后，隨機(jī)挑選規(guī)格相似的270尾健康魚分配至18個500 L圓形PE養(yǎng)殖桶內(nèi)，初始魚重大約(8.15±0.05)g/尾。每個處理3個重復(fù)。每天飽食投喂兩次（8:30和16:30）。養(yǎng)殖實驗開始前和結(jié)束時對每個桶的魚進(jìn)行稱量。養(yǎng)殖實驗持續(xù)8周。

實驗用水為砂濾海水，采用流水養(yǎng)殖，流速為10 L/min。定期測試水質(zhì)指標(biāo)，養(yǎng)殖期間水質(zhì)指標(biāo)維持在：溶解氧不小于7 mg/l，亞硝酸鹽不高于0.1 mg/l，鹽度(27±2)，水溫(28±2)℃。

1.3 樣品采集和分析

實驗開始前留取12尾魚置于-75℃超低溫冰箱用于體成分分析。養(yǎng)殖實驗結(jié)束取樣前，禁食24 h。每桶取3尾魚用于全魚體成分分析；另隨機(jī)取6尾魚經(jīng)MS-222麻醉后，測量體長、體重。解剖取出內(nèi)臟組織（分離肝臟和腸脂肪）、剝離肌肉，以測定臟體比、肝體比和肥滿度等指標(biāo)。組織樣品經(jīng)液氮急凍后保存在-75℃冰箱用于隨后的分析。

所有樣品成分分析按AOAC方法：水分通過烘箱105℃干燥至恒重測定；蛋白含量通過凱氏定氮法測定（N×6.25）（Buchi B-324/K-437，Switzerland）；粗脂肪采用索氏抽提法測定（Buchi E-816，Switzerland）；灰分通過馬福爐550℃灼燒失重法測定。VC含量采用南京建成生物科技的VC測定試劑盒在酶標(biāo)儀（BIO-RAD iMark，US）中測定。

1.4 測定指標(biāo)

增重率（WG，%）=100×[（終末魚重-初始魚重）/初始魚重]；

特定生長率(SGR,%/d)=100×[ln末重(g)-ln初重(g)]/實驗天數(shù)(d)；

飼料系數(shù)(FCR)=總干物質(zhì)攝食量(g)/魚體總增重(g)；

蛋白質(zhì)效率(PER)=[末重(g)-初重(g)]/[總干物質(zhì)攝食量(g)×蛋白質(zhì)含量]；

成活率(Surival,%)=100×終末魚尾數(shù)(尾)/初始魚尾數(shù)(尾)；

肝體比指數(shù)(HIS,%)=100×(肝重/體重)；

臟體比指數(shù)(VI,%)=100×(內(nèi)臟重/體重)；

豐滿度（CF）=100×體重（g）/體長3（cm3）。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計方法

實驗數(shù)據(jù)以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。采用SPSS 16.0 for Windows軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析(ANOVA)，并用Duncan's法多重比較分析各處理組間的差異性，顯著水平為0.05。

2 結(jié)果

2.1 飼料中不同VC含量對日本黃姑魚生長及存活率的影響(見表2)

表2 飼料中不同VC含量對日本黃姑魚生長及存活率的影響

由表2結(jié)果表明，經(jīng)過8周的養(yǎng)殖實驗，飼料中不同VC水平對日本黃姑魚幼魚的增重率產(chǎn)生了影響。未添加VC飼料組的魚增重率和特定生長率顯著地低于50、150 mg/kg VC添加組，300、600、1 200 mg/kg組的值與其余各組無顯著性差異存在。同時，未添加VC組飼料系數(shù)顯著地高于50、150、600、1 200 mg/kg組，但與300 mg/kg組無顯著差異存在。150 mg/kg和1 200 mg/kg添加組的蛋白質(zhì)效率值顯著地高于未添加VC飼料組，但與其余組無顯著差異。養(yǎng)殖實驗期間，各組間成活率在88.89%～100%之間。

2.2 飼料中不同VC含量對日本黃姑魚肝體比、臟體比指數(shù)和肥滿度的影響(見表3)

如表3所示，經(jīng)過8周的養(yǎng)殖實驗后，飼料處理對各組的臟體比指數(shù)和肥滿度指數(shù)沒有產(chǎn)生顯著性的影響（P＞0.05）。但是，飼料中不同的VC添加水平影響了日本黃姑魚的肝體比指數(shù)。未添加VC組和1 200 mg/kg VC組都顯著地低于300 mg/kg組，但它們與其余各組間無顯著性差異存在。

表3 飼料中不同VC含量對日本黃姑魚肝體比、臟體比指數(shù)和肥滿度的影響

2.3 飼料中不同VC含量對日本黃姑魚體成分的影響（見表4）

表4 飼料中不同VC含量對日本黃姑魚體成分的影響

如表4所示，經(jīng)過8周的養(yǎng)殖實驗后，飼料處理對各組的全魚蛋白質(zhì)含量沒有產(chǎn)生顯著性的影響（P＞0.05）。但未添加VC組全魚水分含量顯著地高于添加50、600 mg/kg組的值，它們與其余組無顯著性差異存在；未添加VC組全魚脂肪含量顯著地低于150、300 mg/kg組的值，它們與其余組無顯著性差異存在；300 mg/kg VC組全魚灰分含量顯著地低于0、50、1 200 mg/kg組的值，與其余組無顯著性差異存在。

2.4 飼料中添加VC對日本黃姑魚肝臟和肌肉組織中VC積累量的影響（見表5）

表5 飼料中不同VC含量對日本黃姑魚肌肉與肝臟中VC積累量的影響

如表5所示，日本黃姑魚肌肉和肝臟VC積累量受飼料中VC添加水平的影響。肝臟和肌肉中VC的含量均隨著飼料VC添加水平的升高而升高，并在0～150 mg/kg表現(xiàn)尤為明顯。150 mg/kg及更多的VC添加水平則沒有顯著地升高肝臟和肌肉中的VC積累濃度。

3 討論

維生素C在魚類生長中發(fā)揮著重要作用：可以促進(jìn)鐵的吸收，參與組織膠原蛋白的合成；具有廣泛的免疫作用，可以緩解魚類在養(yǎng)殖過程中的應(yīng)激狀態(tài)，而應(yīng)激直接關(guān)系到魚類的生長速度。根據(jù)本實驗的生長結(jié)果，未添加VC組魚表現(xiàn)出最差的生長，超過300 mg/kg添加量的組并未取得優(yōu)于50、150 mg/kg VC添加組的效果。實驗結(jié)果表明，飼料中添加VC對日本黃姑魚幼魚的生長具有促進(jìn)作用，但是過多劑量的VC并不能為日本黃姑魚帶來更好的生長促進(jìn)作用。這一結(jié)果相似于一些國內(nèi)外關(guān)于其他海水魚VC需要量的研究報道。以增重率和特定生長率為指標(biāo)，日本黃姑魚飼料中合適的VC添加水平應(yīng)為50～150 mg/kg。盡管沒有顯著性差異存在，150 mg/kg組添加組的FCR和PER值[分別為（1.20±0.15）和（1.37±0.17）]是好于50 mg/kg添加組相應(yīng)的值[分別為（1.46±0.07）和（1.11±0.10）]。這一結(jié)果與胡斌等對草魚按生長性能評價得出150 mg/kg、Dabrowski等對羅非魚研究得出150 mg/kg、宋學(xué)宏等報道的異育銀鯽維持最大生長需要150 mg/kg、萬金娟等以體增重為指標(biāo)得出VC需要量為150 mg/kg等有關(guān)VC需要量的研究結(jié)果一致。在上述的研究也是采用了穩(wěn)定化處理的維生素C，這些值相比早期的一些使用晶體維生素C進(jìn)行的研究所得出需要量值偏低。

通過對本實驗生物學(xué)數(shù)據(jù)和體成分?jǐn)?shù)據(jù)的分析，飼料中VC的含量倍增對日本黃姑魚的肝體比指數(shù)產(chǎn)生了一個先上升后下降的變化趨勢。在0～300 mg/kg時，肝體比指數(shù)隨著VC添加水平升高，而300～1 200 mg/kg時，肝體比指數(shù)隨之降低。動物肝臟中所具有的古洛內(nèi)酯氧化酶(L-gulonolactone oxidase，GLO)是合成抗壞血酸的關(guān)鍵酶類，陸生動物如牛、馬、豬具有這種酶，因而它們具備合成維生素C的能力，但是大部分魚類經(jīng)證實不具有合成VC的能力，如虹鱒、真鯛、羅非魚以及大西洋庸鰈。不能自身合成抗壞血酸的魚類由于缺乏GLO酶，會出現(xiàn)各種缺乏癥，如生長減慢、眼球突出、虹膜出血、脊柱側(cè)彎、皮膚內(nèi)臟出血、抗逆性下降，嚴(yán)重的可導(dǎo)致死亡。體成分方面，未添加VC組魚水分較高，而脂肪較低，其余組則水分較低脂肪較高，正好與之相反。這種水分與脂肪呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)的規(guī)律見諸于一些報道之中。

一些研究者報道，維生素C在魚類的主要積累器官按含量由低至高分別為：肌肉、肝臟、鰓、腦。本實驗中每一組飼料VC水平下，肌肉中VC的含量同樣均低于肝臟。肌肉和肝臟中VC含量均隨著飼料VC含量的升高并同時在150 mg/kg時呈現(xiàn)出飽和跡象。這種在魚類組織中VC含量隨飼料VC含量升高而趨于飽和的現(xiàn)象，在海鱸、大黃魚以及黑鯛的研究中也被發(fā)現(xiàn)。但與軍曹魚、點帶石斑魚、雜交羅非魚隨著飼料中VC升高不呈現(xiàn)飽和的結(jié)論不同。Dabrowski認(rèn)為，維持組織中VC穩(wěn)定狀態(tài)所需要的VC含量即是VC最適需要量，同時Foumier等報道以肝臟VC飽和濃度作為評價VC需要量是最可信的，因此在本實驗中達(dá)到肌肉和肝臟穩(wěn)定VC含量的飼料VC水平150 mg/kg是一個可信指標(biāo)。

4 結(jié)論

綜合上述，在本實驗條件下，飼料中添加適量維生素C可以升高日本黃姑魚的生長速度和組織VC積累。以增重率、蛋白質(zhì)效率、飼料轉(zhuǎn)化率以及組織中VC積累為指標(biāo)，綜合得出飼料中添加150 mg/kg有效含量為35%的VC單磷酸酯被認(rèn)為是最適合日本黃姑魚幼魚生長的添加量。

（參考文獻(xiàn)26篇，刊略，需者可函索）