張廣平朱曉光楊海潤張思玉葉祖光

（1中藥復(fù)方新藥開發(fā)國家工程研究中心，北京，100075；2中國中醫(yī)科學(xué)院，北京，100700）

“973”專題——確有療效的有毒中藥科學(xué)應(yīng)用關(guān)鍵問題的基礎(chǔ)研究

藥性理論指導(dǎo)的附子配伍減毒試驗(yàn)研究

張廣平1朱曉光1楊海潤1張思玉1葉祖光2

（1中藥復(fù)方新藥開發(fā)國家工程研究中心，北京，100075；2中國中醫(yī)科學(xué)院，北京，100700）

目的：以附子為研究對(duì)象，試驗(yàn)研究基于藥性理論的附子配伍減毒的科學(xué)性，以探討附子配伍減毒的新途徑。方法：對(duì)以寒制熱、以甘緩毒、以柔克剛、調(diào)正抑毒等四種附子配伍減毒理論進(jìn)行驗(yàn)證性的毒理學(xué)試驗(yàn)，在試驗(yàn)中采用急性毒性和心臟毒性相結(jié)合的試驗(yàn)方法。結(jié)果：附子配伍寒性藥物具有配伍減毒作用，和其他三種配伍減毒相比較，以寒制熱的配伍減毒作用最強(qiáng)。結(jié)論：以藥性理論為指導(dǎo)的配伍減毒可以使有毒中藥配伍減毒一種新的思路和方法。

藥性理論；配伍減毒；附子

附子為毛茛科植物烏頭（Aconitum carmichaeli Debx.）的子根的加工品，味辛、甘，性溫、大熱，有毒，入心、脾、腎經(jīng)，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，被譽(yù)為“回陽救逆第一品藥”。附子為藥典“有毒”中藥，臨床常見的不良反應(yīng)為心律失常[1]。我國古代先賢應(yīng)用附子積累了豐富的配伍減毒的經(jīng)驗(yàn)，如附子相殺、相畏配伍減毒理論已經(jīng)被現(xiàn)代研究證實(shí)具有一定的科學(xué)性[2]。除了上述相殺相畏配伍減毒之外，通過對(duì)含附子方劑的文獻(xiàn)學(xué)研究，發(fā)現(xiàn)用于附子配伍減毒的藥性理論大致有四種[3]：以寒制熱、以甘緩毒、以柔克剛、調(diào)正抑毒。本實(shí)驗(yàn)的宗旨則是基于上述中藥藥性理論進(jìn)行附子配伍減毒的研究。

1 實(shí)驗(yàn)材料

藥材：附子（黑順片），產(chǎn)地，四川；大棗，產(chǎn)地，山東；木通，產(chǎn)地，四川；梔子，產(chǎn)地，江西；大黃，產(chǎn)地，四川；黃芩，產(chǎn)地，河北；黃連，產(chǎn)地，四川。

均購自北京仁衛(wèi)飲片廠。

實(shí)驗(yàn)藥物的制備：附子加10倍量水浸泡45 min，水沸騰后第1次煎煮30 min，第2次加6倍量水，水沸后煎煮30 min。4層紗布過濾，合并2次煎液，將濾液水浴（70℃）濃縮后置冰箱冷藏保存?zhèn)溆?。附子與其他各藥物不同比例（3∶1，1∶1，1∶3）煎劑制備方法同附子。

儀器：16道生理記錄儀：美國BIOPAC公司生產(chǎn)。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：ICR小鼠，SPF級(jí)，18～22 g；SD大鼠，SPF級(jí)，230～250 g，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK（京）2006-0008，購自北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部。動(dòng)物房實(shí)驗(yàn)設(shè)施為屏障系統(tǒng)，溫度20～24℃，相對(duì)濕度為40%～70%，人工光照，12 h明暗周期。為大、小鼠標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼料。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 不同配伍比例藥物對(duì)附子急性毒性影響 ICR小鼠，體重18～22 g，雌雄各半，適應(yīng)性觀察3 d。小鼠禁食16 h，按照設(shè)計(jì)的劑量給藥1次，給藥體積0.4 mL／10 g體重。給藥當(dāng)天，尤其是給藥后4 h密切觀察動(dòng)物的毒性反應(yīng)情況（如一般表現(xiàn)、呼吸、活動(dòng)及有無驚厥等）、中毒癥狀發(fā)生的時(shí)間、持續(xù)時(shí)間、恢復(fù)情況，記錄所觀察到的變化，采用Bliss法計(jì)算半數(shù)致死劑量（LD50）。

2.2 不同配伍比例甘草對(duì)附子心臟毒性的影響 SD大鼠，體重230～250 g，雌雄各半。大鼠在實(shí)驗(yàn)前禁食不禁水16 h，稱重，3%戊巴比妥腹腔注射麻醉（30 mg／kg體重），動(dòng)物仰面固定，使用MedLab生物信號(hào)采集系統(tǒng)記錄動(dòng)物心電圖狀況，正向電級(jí)插入動(dòng)物右上肢，負(fù)向電級(jí)插入動(dòng)物左下肢，底線接右下肢，連續(xù)觀察10 min，心電圖有異常者棄用，選用心電圖正常動(dòng)物進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。動(dòng)物腹部75%乙醇消毒，打開動(dòng)物腹腔，從胃幽門部進(jìn)針，十二指腸注射給藥，2 m L／100 g體重。藥后，使用MedLab生物信號(hào)采集系統(tǒng)連續(xù)觀察60 min，以心臟出現(xiàn)各類型的心律失常為心臟中毒的觀察指標(biāo)。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 附子配伍各藥物后對(duì)附子急性毒性和心臟毒性表現(xiàn)影響 單用附子急性毒性，小鼠灌胃給藥后，動(dòng)物精神萎靡，中毒動(dòng)物出現(xiàn)喘氣，繼而呼吸停止死亡；部分動(dòng)物出現(xiàn)驚厥。給藥后20 min動(dòng)物開始出現(xiàn)死亡，存活動(dòng)物在給藥后12 h恢復(fù)正常飲水和進(jìn)食。附子配伍各藥物組的動(dòng)物中毒表現(xiàn)特征同單用附子。附子對(duì)大鼠的心臟毒性主要表現(xiàn)為異常的QRS波。心律失常主要發(fā)生在給藥后20～45 min之間。附子配伍各藥物的合煎液心臟毒性表現(xiàn)的與單用附子相似。

3.2 附子配伍各藥物后對(duì)附子LD50的影響 以寒制熱選擇附子配伍大黃；附子配伍黃芩、黃連；附子配伍梔子；附子配伍木通觀察配伍前后對(duì)附子毒性的影響。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：同單用附子比較，附子配伍各藥后能夠不同程度的增加附子的半數(shù)致死劑量，附子配伍大黃、黃芩三種不同比例由于給濃度的限制未能夠測(cè)出LD50。附子配伍黃連、梔子、木通在配伍藥物高比例時(shí)減毒明顯。心臟毒性與急性毒性具有良好的一致性。大黃、黃芩、黃連、梔子、木通能夠提高附子急性毒性的LD50和心臟毒性的TD50，提示具有拮抗附子毒性的作用。對(duì)附子的減毒作用：大黃＞黃芩＞木通＞梔子＞黃連。結(jié)果見表1。

3.3 以甘緩毒 選擇附子配伍甘草；附子配伍大棗通觀察配伍前后對(duì)附子毒性的影響。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：之前研究結(jié)果顯示[4]，附子配伍甘草有明顯的減毒作用，且減毒作用與甘草比例有一定的關(guān)系。附子配伍大棗后對(duì)附子的毒性沒有明顯影響。心臟毒性與急性毒性具有良好的一致性。結(jié)果見表2。

表1 附子配伍各藥LD50和TD50

表2 附子配伍各藥LD50和TD50

3.4 以柔克剛 選擇附子配伍地黃（熟地黃、生地黃）；附子配伍山藥；附子配伍白芍通觀察配伍前后對(duì)附子毒性的影響。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：?jiǎn)斡酶阶优湮樯剿幖毙远拘訪D50升高，但是對(duì)心臟毒性沒有明顯影響。附子配伍生地黃、熟地黃、白芍后對(duì)其毒性沒有明顯影響，結(jié)果見表3。

表3 附子配伍各藥LD50和TD50

3.5 調(diào)正抑毒 選擇附子配伍人參；附子配伍黃芪；附子配伍白術(shù)；附子配伍茯苓通觀察配伍前后對(duì)附子毒性的影響。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：同單用附子比較，附子配伍人參能夠增加半數(shù)致死劑量和半數(shù)中毒劑量。附子配伍白術(shù)、茯苓對(duì)附子毒性沒有明顯影響。心臟毒性與急性毒性具有良好的一致性。結(jié)果見表4。

表4 附子配伍各藥LD50和TD50

4 討論

本實(shí)驗(yàn)以附子為研究對(duì)象，通過方劑配伍中兩味或多味藥物之間藥性功能、作用特點(diǎn)等方面相互對(duì)立、相互統(tǒng)一、相制相用的配伍關(guān)系，從而達(dá)到糾偏減毒的作用，探討以藥性理論為指導(dǎo)的有毒中藥配伍減毒的研究思路。

收集和整理含有附子方劑，統(tǒng)計(jì)出與附子常用的配伍藥物，從中藥藥性的角度對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，結(jié)合歷代本草及方論中有關(guān)附子配伍的闡述，確定附子藥性配伍規(guī)律：以寒制熱，寒熱者，陰陽之化也，以寒制熱是中醫(yī)陰陽對(duì)立制約理論指導(dǎo)藥物配伍的重要原則。附子辛熱燥烈，易傷陰劫液，配以寒涼降泄之品，寒涼以制燥烈之偏，降泄以導(dǎo)熱毒外出，可達(dá)減毒之效。常用配伍大黃、黃芩、黃連、梔子、木通。以甘緩毒，甘味藥具有緩急、緩和的作用，可調(diào)和藥性，緩急解毒。附子燥熱峻猛毒烈，配伍甘潤之品可收和藥緩急制毒之效。常用配伍甘草、大棗。以柔克剛，附子通行十二經(jīng)脈，善扶五臟之陽，為通脈止痛，助陽散寒之良藥，但其性燥烈辛熱，用之不當(dāng)，每能耗散陰津，產(chǎn)生流弊，不僅于病無益，反使正氣愈傷，病情愈為復(fù)雜，所謂“寒病未已，熱病復(fù)起”。對(duì)素體陰津不足或津血已傷之患者，尤須慎重。配以地黃、山藥、白芍等甘潤陰柔之品，則可糾弊防偏。調(diào)正抑毒，附子辛熱走散，固然可以溫陽逐寒，但因其剛燥辛烈，若逕情直往，或反復(fù)使用，每易耗散正氣，使機(jī)體耐毒排毒能力減弱而更易中毒；而對(duì)元陽欲脫之證，逕用大辛大熱，則有暴散虛陽之虞。配伍甘補(bǔ)扶弱之品如人參、黃芪、甘草等，可調(diào)正固本以制其毒。即《神農(nóng)本草經(jīng)集注》所謂：“世方動(dòng)用附子，皆須甘草或人參……相配者，正以制其毒故也?！迸湮槿藚?、甘草、白術(shù)、茯苓，可奏調(diào)正抑毒之功[3]。

在實(shí)驗(yàn)中采用急性毒性和附子毒性靶器官心臟毒性等兩種毒性試驗(yàn)方法評(píng)價(jià)附子配伍各藥物后對(duì)附子毒性的影響。在以寒制熱、以甘緩毒、以柔克剛和調(diào)正抑毒等四種基于藥性理論的配伍減毒試驗(yàn)中，附子配伍大黃、黃芩、黃連、梔子、木通等幾味寒性中藥均有一定的減毒作用，其中以大黃和黃芩的減毒作用最強(qiáng)；以甘緩毒的配伍減毒試驗(yàn)中，在受試的兩味藥物中，只有甘草具有明顯的減毒作用[4]，而另一味甘味中藥大棗沒有明顯減毒作用；在以柔克剛的配伍減毒試驗(yàn)中，在附子配伍地黃（熟地黃和生地黃）、山藥和白芍等滋陰藥物中，僅有山藥在急性毒性中具有減毒作用，而其他藥物均沒有明顯的減毒作用；在扶正抑毒的試驗(yàn)中，附子配伍人參、白術(shù)和茯苓的試驗(yàn)中，附子配伍人參具有一定減毒作用，其他皆無減毒作用。比較上述四種配伍減毒的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，以寒制熱配伍理論指導(dǎo)下的附子配伍減毒作用最強(qiáng)，這不僅表現(xiàn)在減毒作用的效能上，而且還表現(xiàn)在受試藥出行陽性結(jié)果的比例上，以寒制熱均優(yōu)于其他三種配伍類型。這一研究結(jié)果可能對(duì)附子的臨床安全用藥具有一定的參考意義。此外，在上述配伍減毒的試驗(yàn)中，多數(shù)結(jié)果表明附子配伍各藥物的急性毒性和心臟毒性兩種實(shí)驗(yàn)結(jié)果有較好的一致性，這說明這些具有減毒作用的配伍中藥可能是通過拮抗附子心臟的毒性或者保護(hù)心臟而達(dá)到配伍減毒作用的，例如黃芩拮抗附子心臟毒性，最近有人報(bào)道黃芩的有效成分黃芩苷具有明顯的心臟保護(hù)作用[5]。

如前所述，附子配伍寒性藥物具有減毒作用，但其減毒的同時(shí)是否對(duì)附子藥效也有影響（減毒存效）以及附子配伍寒性藥物減毒的機(jī)理有待于下一步研究。

[1]朱林平.附子毒性研究概況[J].江西中醫(yī)藥，2004，25（6）：54.

[2]張廣平，解素花，朱曉光，等.附子相殺、相畏懼配伍減毒的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國中藥雜志，2012，37（15）：2215-2217.

[3]王均寧，張成博，鮑捷，等.基于方劑組成統(tǒng)計(jì)分析的附子減毒配伍規(guī)律探討[J].中國中醫(yī)藥信息雜志，2011，18（5）：23-26.

[4]解素花，張廣平，孫桂波，等.附子甘草不同配伍比例配伍減毒實(shí)驗(yàn)研究[J].中國中藥雜志，2012，37（15）：2210-2213.

[5]Wei-Tien Chang，Jing Li，Matthew S.Vanden Hoek，Xiangdong Zhu，Chang-Qing Li，Hsien-Hao Huang，Chin-Wang Hsu，Qiang Zhong，Juan Li，Sy-Jou Chen，Terry L.Vanden Hoek and Zuo-Hui Shao[J]. Am J Chin Med，2013，41（2）：315-318.

（2014-01-06收稿 責(zé)任編輯：洪志強(qiáng)）

Research on Reducing Fuzi’toxicity under Guidance of Theory of Medicinal Nature

Zhang Guangping1，Ye Zuguang2
（1 State Research Center for New TCM medicinal formula，Beijing 100075，China；2 China Academy of Chinese Medicinal Sciences，Beijing 100700，China）

Objective：In accordance with the theory of medicinal nature，we explored new ways of reducing toxicity of Fuzing by combining it with other medicinal herbs.Methods：By conducting toxicological experiments（acute toxicity in combination with cardiac toxicity），we tested four combination theories，i.e.using cold medicinal to inhibit hot medicinal，using sweet medicinal to relieve toxicity，using soft medicinal to curb tough medicinal，modifying toxicity.Results：Compared with combining with medicinal of sweet，or soft，or modifying nature，the combination with cold medicinal proved to be most significant at reducing Fuzi’toxicity.Conclusion：The theory of medicinal nature provides a new thinking and method to reduce Chinese medicine’s toxicity.

Theory of medicinal nature；Reducing toxicity by medicinal combination；Fuzi

R229；R285.1

A

10.3969／j.issn.1673-7202.2014.02.001

國家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展計(jì)劃（973計(jì)劃）課題：有毒中藥配伍減毒原理和方法學(xué)研究（編號(hào)：2009CB522806）第一作者：張廣平，助理研究員，研究方向：中藥藥理毒理，Tel：（010）87632551，E-mail：iamzgp＠163.com

葉祖光，研究員，藥理毒理專家，Tel：（010）87632551，E-mail：yezuguang＠sina.com