孔祥建，馮亮，馮福所，曾思英，盧婷婷

（遂寧市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所，四川遂寧 629000）

脫氫乙酸是國家批準(zhǔn)使用的人工合成防腐劑，近年來被廣泛使用。脫氫乙酸是一種廣譜、抑菌力極強(qiáng)的防霉防腐劑，對(duì)霉菌、酵母菌、細(xì)菌有較強(qiáng)的抑制能力［1］，但對(duì)人和動(dòng)物存在一定的毒害性，其添加必須在規(guī)定范圍內(nèi)按規(guī)定限量使用。GB 2760-2011《食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》中規(guī)定脫氫乙酸用于月餅中的最大使用量為0.5 g／kg［2］，然而目前存在企業(yè)違規(guī)超標(biāo)使用的現(xiàn)象，因此對(duì)月餅中的脫氫乙酸進(jìn)行準(zhǔn)確、快速的定量檢測非常重要。

食品中脫氫乙酸的檢測方法一般依據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)GB 5009.121-2003，樣品經(jīng)過有機(jī)相、無機(jī)相反復(fù)萃取凈化后用氣相色譜測定［3］。由于該標(biāo)準(zhǔn)僅適用于果汁、腐乳、醬菜，在處理月餅等高糖、高脂、高蛋白含量的復(fù)雜基質(zhì)的樣品時(shí)，乙醚提取過程的乳化現(xiàn)象特別嚴(yán)重，影響了提取率，回收率較低；而且采用填充柱作為分離柱，其柱效低，靈敏度不高，檢出限、分離效果和重現(xiàn)性都不理想。因此，建立一套適合月餅等復(fù)雜基質(zhì)食品中脫氫乙酸的氣相色譜檢測方法，對(duì)于提升食品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)?zāi)芰?，?guī)范食品生產(chǎn)秩序具有重要的意義。

筆者以月餅為試材，針對(duì)乙醚提取過程中乳化嚴(yán)重的問題，改進(jìn)了樣品前處理方法，選用Rtx-5弱極性毛細(xì)管柱作為分離柱［4］，優(yōu)化GC色譜條件，建立了毛細(xì)管柱氣相色譜法測定月餅等復(fù)雜基質(zhì)食品中脫氫乙酸的方法，并對(duì)所建立的檢測方法進(jìn)行了系統(tǒng)的方法驗(yàn)證。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

氣相色譜儀：GC-2010 Plus型，日本島津制作所；

自動(dòng)進(jìn)樣器：AOC-20i+S型，日本島津制作所；

乙醚、丙酮：重蒸；

無水硫酸鈉、氯化鈉：分析純；

硫酸：10%（體積分?jǐn)?shù)）；

硫酸鋅溶液：120 g／L；

氫氧化鈉溶液：20 g／L；

脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)品：純度大于99.5%，國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心；

實(shí)驗(yàn)用水為三級(jí)水。

1.2 試樣制備與提取

稱取5.0 g充分磨碎的均勻試樣于100 mL容量瓶中，加入20 mL蒸餾水，5 mL硫酸鋅溶液，搖勻，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至7～8，加水定容至刻度，過濾。準(zhǔn)確吸取20.0 mL濾液于100 mL比色管中，加氯化鈉至飽和，用硫酸調(diào)節(jié)pH值至酸性，分別用50，50，30 mL乙醚提取3次，靜置分層，用吸管轉(zhuǎn)移乙醚層，經(jīng)無水硫酸鈉脫水后，收集乙醚于250 mL錐形瓶中，50℃水浴中濃縮至近干，氮吹除去殘留溶劑，用丙酮定容后供色譜測定。

1.3 色譜條件

色譜柱：Rtx-5毛細(xì)管柱（30 m×0.32 mm，0.25 μm，美國Restek公司）；進(jìn)樣量：0.5 μL；分流比：1∶40；進(jìn)樣口溫度：240℃；線速度：25.0 mL／min；柱流量：0.95 mL／min；柱溫：50℃保持1 min，以15℃／min的速率升溫至230℃，保持2 min；檢測器：FID；檢測器溫度：240 ℃；尾吹：30.0 mL／min；H2流速：40 mL／min；空氣流速：400 mL／min。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜條件的選擇

本實(shí)驗(yàn)選擇弱極性Rtx-5毛細(xì)管柱，采用程序升溫，目標(biāo)峰分離度良好，峰型較佳，保留時(shí)間在8.4 min左右。色譜條件見1.3，標(biāo)樣氣相色譜圖見圖1。

2.2 改進(jìn)樣品前處理對(duì)測定結(jié)果的影響

實(shí)驗(yàn)分別采用本實(shí)驗(yàn)方法和國標(biāo)GB／T 5009.121-2003中的處理方法對(duì)月餅中脫氫乙酸的含量進(jìn)行測定，結(jié)果見表1。由表1可以看出，采用本法測得的試樣含量高于國標(biāo)法處理的試樣，且回收率明顯高于未進(jìn)行沉淀蛋白處理的試樣，這說明經(jīng)硫酸鋅試劑沉淀和過濾處理，可以有效減輕有機(jī)相萃取時(shí)出現(xiàn)的乳化現(xiàn)象，有利于萃取完全；本法中樣品提取過程處理簡單，回收率高，且節(jié)約了有機(jī)溶劑。

表1 樣品前處理對(duì)于回收率的影響

2.3 線性方程與線性范圍

將濃度分別為0.05，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5 mg／mL的脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照上述色譜條件，進(jìn)樣0.5 μL，進(jìn)行GC分析，測定不同濃度脫氫乙酸的峰面積，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果見表2。

表2 標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度與峰面積

2.4 檢出限與定量限

方法的檢出限［5］是指在通過某一分析方法全部測定過程后，被分析物產(chǎn)生的信號(hào)，能以95%置信度區(qū)別于空白樣品而被測定出來的最低濃度。以“最低濃度檢測結(jié)果+3倍標(biāo)準(zhǔn)差”作為檢出限。IUPAC定義定量限（LQD）為“當(dāng)被測組分濃度能產(chǎn)生比空白足夠大的信號(hào)，這個(gè)信號(hào)能被良好操作實(shí)驗(yàn)室在常規(guī)操作條件下以指定的置信水平定量檢出，這個(gè)濃度就是定量測定下限”，即可以“最低濃度檢測結(jié)果+10倍標(biāo)準(zhǔn)差”所對(duì)應(yīng)的濃度作為定量限［7］。

本試驗(yàn)將樣本溶液不斷稀釋，按照1.3色譜條件，進(jìn)樣0.5 μL，進(jìn)行GC分析，確定檢出限，直到目標(biāo)物的峰高與基線噪音之比為2～3時(shí)［6］，連續(xù)重復(fù)測定9次，根據(jù)每次的積分峰面積，外標(biāo)法計(jì)算其對(duì)應(yīng)的濃度，計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)差s，結(jié)果見表3。

表3 脫氫乙酸檢出限測定結(jié)果

本試驗(yàn)以信噪比S／N=3計(jì)，經(jīng)計(jì)算，檢出限為0.24 μg／mL，定量下限為0.32 μg／mL。

圖1 脫氫乙酸標(biāo)樣氣相色譜圖（丙酮為溶劑）

以稱樣量5.0 g計(jì)，本方法檢測月餅中脫氫乙酸的檢出限約為4.8 mg／kg，可以滿足檢測需要［3］。

2.5 加標(biāo)回收試驗(yàn)

選取月餅樣品5份，以雙平行測定結(jié)果的平均值作為樣品中脫氫乙酸的實(shí)際含量，加入一定量標(biāo)準(zhǔn)品后，使其每份含標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)0.2 g／kg，再以雙平行測定結(jié)果的平均值作為加標(biāo)結(jié)果，計(jì)算加標(biāo)回收率，檢測結(jié)果見表4。由表4可知，脫氫乙酸的回收率在87.9%～94.4%之間。

表4 脫氫乙酸加標(biāo)回收率結(jié)果

2.6 精密度試驗(yàn)

取樣品12份，加標(biāo)樣使每份樣品含標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)0.3 g／kg，分別按1.2的方法進(jìn)行處理，各進(jìn)樣0.5 μL進(jìn)行GC分析，以外標(biāo)法定量，結(jié)果見表5。由表5可知，測定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.5%，說明該方法具有較高的精密度。

3 結(jié)論

選用Rtx-5弱極性毛細(xì)管柱測定月餅中的脫氫乙酸，通過優(yōu)化色譜條件，獲得了良好的峰型和分離度，建立了最佳GC測定條件；針對(duì)月餅基質(zhì)復(fù)雜，蛋白、脂類、糖類含量高，改進(jìn)了樣品提取及凈化方法，消除了乙醚提取過程中的乳化現(xiàn)象，提高了萃取效率。通過驗(yàn)證，證實(shí)該方法可以準(zhǔn)確地進(jìn)行月餅等復(fù)雜基質(zhì)中脫氫乙酸的定性、定量分析檢測，具有一定的應(yīng)用推廣價(jià)值。

表5 方法精密度試驗(yàn)結(jié)果

［1］陳小萍，龔劭剛.脫氫乙酸的合成與應(yīng)用［J］.化工時(shí)刊，2005，19(4): 7-8.

［2］GB 2760-2011 食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)［S］.

［3］GB／T 5009.121-2003 食品中脫氫乙酸的測定［S］.

［4］宗萬里.毛細(xì)管氣相色譜法測定肉制品中脫氫乙酸含量［J］.肉類研究，2012，26(3): 39-41.

［5］田強(qiáng)兵.分析化學(xué)中檢出限和測定下限的探討［J］.化學(xué)分析計(jì)量，2007，16(3): 72-73.

［6］張鵬翔.色譜分析中的檢出限和測定下限及其確定方法［J］.內(nèi)蒙古科技與經(jīng)濟(jì)，2009，184(6): 62-63.

［7］察冬梅.淺議靈敏度、檢出限和測定限［J］.大學(xué)化學(xué)，2011，26(4): 84-86.