孫秋雁，宋時雨，易以木 （.武漢市皮膚病防治研究所，湖北 武漢430030；.華中科技大學(xué)同濟醫(yī)學(xué)院藥劑教研室，湖北 武漢430030）

皮膚潰瘍是一種常見病、多發(fā)病，其病因較復(fù)雜，包括靜脈曲張性潰瘍、動脈性潰瘍、糖尿病潰瘍、壓力性潰瘍等，其中因血管性疾病所導(dǎo)致的潰瘍大約占總發(fā)病率70%以上，此外還包括有神經(jīng)性、物理性、感染性的以及血液病等因素［1］。外用藥物可促進創(chuàng)面愈合，具有酸化創(chuàng)面、營養(yǎng)創(chuàng)面、免疫調(diào)節(jié)、促進血液循環(huán)、殺菌抑菌和促進局部組織再生等作用。而莫匹羅星是一種外用抗菌藥，其療效可靠、費用低、不良反應(yīng)小、簡便易行，可阻止?jié)冞M一步擴大加重，并促進皮膚創(chuàng)面愈合。目前研究證明，皮膚潰瘍的病理基礎(chǔ)是局部軟組織的血運障礙、發(fā)生變性、表皮壞死及真皮缺損［2］，本實驗基于這點而研制的莫匹羅星生物降解膜是以甲殼胺為膜材，具有緩釋、防水、可生物降解的優(yōu)點。通過設(shè)計合理的動物皮膚潰瘍模型，配合有效的觀察、檢測指標來初步驗證其安全、有效性，為臨床上運用莫匹羅星生物降解膜提供實驗依據(jù)。

1 材料

多功能真彩色細胞圖像分析管理系統(tǒng)、PathcentreTM 全封閉式自動脫水機；Histocentre2組織包埋工作臺；RM2135 型切片機；Shandon展片機；Shandon烘片機；光學(xué)顯微鏡。

海藻酸鈉（CP，國藥集團化學(xué)試劑有限公司）；羧甲基纖維素鈉（CMC－Na，上?；瘜W(xué)試劑公司）；乙基纖維素（EC，山東瑞泰纖維素廠）；莫匹羅星生物降解膜（本實驗室自制）；百多邦（中美史克制藥有限公司）。

Wistar大鼠52只，雌雄各半，由上海西普爾—必凱試驗動物有限公司提供，許可證號：SCXK（滬）2011－0006。飼養(yǎng)條件：中央空調(diào)調(diào)控溫度和濕度，在350×240×170mm3塑料籠內(nèi)飼養(yǎng)，每籠2只。溫度（23±2）℃，相對濕度40%～70%，控制光照及黑暗各12h，定時定量給時，自由攝食及取水。飼料購自上海仕林生物科技有限公司；健康白色家兔60只，體質(zhì)量1.8～2.3kg，雌雄各半，由同濟醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供，許可證號：SCXK（鄂）2011－00105周齡。飼養(yǎng)以標準顆粒飼料，自由飲水，室溫（24±2）℃。適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，然后分組。

2 方法

2.1 莫匹羅星生物降解膜的制備 取0.5%～1%醋酸溶液將甲殼胺溶解，制成2%溶液，在攪拌下加入聚乙烯醇、羧甲基纖維素鈉、海藻酸鈉，莫匹羅星，于熱水浴中攪拌均勻，濾去不溶物，待濾液消泡后傾注于自制的模具上，自然涼干后；取下膜置于1%氫氧化鈉溶液中，浸泡1h，再用純化水洗滌多次至中性，于室溫，自然干燥后即得。

2.2 莫匹羅星生物降解膜藥效學(xué)觀察 選擇家兔60只，于家兔左側(cè)臀部剪去3cm×3cm 的毛，用8%的硫化鈉將毛脫盡后進行常規(guī)消毒，再用2%的利多卡因局部麻醉，手術(shù)切除直徑約為2cm×2cm皮膚全層一塊，使用金黃色葡萄球菌（約含50億個／mL）感染創(chuàng)面，于術(shù)后第3天潰瘍形成后，切取局部組織并在顯微鏡下觀察，均可見炎性滲出物與壞死組織，壞死達肌層。隨機分為空白組（生理鹽水組）、對照組（百多邦組）與實驗組（莫匹羅星生物降解膜組），每組20只，分別外用生理鹽水、百多邦、莫匹羅星生物降解膜換藥。

2.3 刺激性觀察 取Wistar大鼠20只，實驗組與對照組各10只，將大鼠背部皮膚剪去2cm，裸露創(chuàng)面后用無菌壓舌板涂藥并形成薄膜。對照組涂75%乙醇后包扎。

2.4 貼膜的生物相容性與生物降解性觀察 取Wistar大鼠32只，隨機分成4組，每個時間點8只（共4 個時間點），術(shù)前禁食。將大鼠編號、稱重、10%水合氯醛300mg·kg－1腹腔注射麻醉后將大鼠腹部脫毛，取上腹部正中切口進腹并提起胃，將黏膜四角用絲線與胃前壁縫合將藥膜固定，并關(guān)閉腹腔。定期處死大鼠后，觀察膜周圍和腹腔內(nèi)有無黏連，有無滲液、膿液及膿腫形成，并觀察肝脾是否腫大，以評價膜的生物相容性。

術(shù)后定期處死大鼠在觀察生物相容性的同時，小心取下膜，浸泡，烘干，稱重，按下式測定其生物降解性：

降解百分率＝（W1－W2）／W1×100%；

W1—膜降解前的質(zhì)量（g）；

W2—膜降解后的質(zhì)量（g）。

3 結(jié)果

3.1 藥效學(xué)試驗

3.1.1 造模3，6，9d觀察情況 （1）第3天肉眼觀察：空白組可見大量的分泌物，壞死組織無明顯脫落，周圍無新生的肉芽組織；對照組可見較多分泌物，壞死組織有小部分脫落，周圍有少量的肉芽組織；實驗組可見少量的分泌物，壞死組織有部分脫落，周圍有少量較新鮮肉芽組織。鏡檢結(jié)果見表1；（2）第6天肉眼觀察：空白組見較多膿液，壞死組織有部分脫落，有新鮮肉芽組織；對照組可見少量分泌物，壞死組織基本已脫落，肉芽組織新鮮；實驗組僅見極少量的分泌物，壞死組織已脫落，潰瘍面積縮小，部分愈后。鏡檢結(jié)果見表2；（3）第9天肉眼觀察：空白組見少量分泌物，肉芽組織新鮮，潰瘍面縮??；對照組潰瘍面變淺，部分愈合；實驗組潰瘍面已全部愈合。鏡檢結(jié)果及病理切片圖分別見表3，圖1～圖3。

表1 3組實驗第3天觀察情況Tab 1 The third day observation in the three groups

表2 3組實驗第6天觀察情況Tab 2 The sixth day observation in the three groups

表3 3組實驗第9天觀察情況Tab 3 The ninth day observation in the three groups

圖1 空白組傷后9d，對家兔皮膚潰瘍組織病理學(xué)的影響（HE 染色，×40，顯示其上皮化程度不佳）Fig 1 The ninth day after injury in blank group，the effect on the rabbit skin ulcer tissue pathology（HE staining，×40，showed the epithelial degree was poor）

圖2 對照組傷后9d，對家兔皮膚潰瘍組織病理學(xué)的影響（HE 染色，×40，顯示潰瘍面完全表皮化）Fig 2 The ninth day after injury in control group，the effect on the rabbit skin ulcer tissue pathology（HE staining，×40，showed the epithelial degree was complete）

圖3 實驗組傷后第9d，對家兔皮膚潰瘍組織病理學(xué)影響（HE 染色，×40，顯示潰瘍面完全表皮化）Fig 3 The ninth day after injury in experimental group，the effect on the rabbit skin ulcer tissue pathology（HE staining，×40，showed the epithelial degree was complete）

以上實驗結(jié)果說明，莫匹羅星生物降解膜對家兔實驗性皮膚潰瘍的愈合有促進作用。

3.1.2 換藥3次及6次潰瘍面收縮率 3次后空白組、對照組、實驗組潰瘍面收縮面積分別為（114.1±14.9），（132.7±18.2），（255.1±17.5）mm2（n＝20），6次后空白組、對照組、實驗組潰瘍面收縮面積分別為（25.87±4.5），（28.27±4.7），（170.53±11.5）mm2（n＝20）。結(jié)果表明：各組治療方法促進皮膚潰瘍面收縮比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義，其中以實驗組最快，對照組次之，空白組則遠遠慢于其他2組，q檢驗分別比較兩表，實驗組、對照組和空白組潰瘍面收縮率差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），而空白組與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

3.1.3 各組潰瘍愈合時間比較 空白組、對照組、實驗組潰瘍愈合時間分別為（7.3±1.3），（10.1±1.6），（17.5±2.5）d（n＝20），方差分析結(jié)果表明，各組潰瘍愈合時間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），其中以實驗組最短。q檢驗結(jié)果：實驗組、對照組及空白組差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），實驗組與對照組差異亦有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

3.2 刺激性試驗結(jié)果 對照組觀察48h后，結(jié)果除傷口局部略紅外無腫脹、潰瘍及壞死現(xiàn)象；但遺留瘢痕邊緣不整，面積較大，幾乎無毛。而實驗組觀察48h，無淤血、紅腫、潰瘍及壞死.亦無滲出及血跡；且傷創(chuàng)面愈合脫痂的時間要比對照組顯著提前，遺留瘢痕邊緣整齊，并長出稀疏毛發(fā)。表明莫匹羅星生物降解膜有防止創(chuàng)面加深擴大，促進創(chuàng)面愈合的作用。

3.3 貼膜的生物降解性與生物相容性

3.3.1 相容性結(jié)果 手術(shù)后大鼠精神狀況良好，飲食正常，腹部切口均愈合較良好。結(jié)果顯示手術(shù)后7d大鼠腹腔內(nèi)無滲液、膿液及膿腫形成，腸管間有少許黏連，膜與胃壁附著緊密；膜周圍有少許黏連將膜包裹，肝脾不腫大。術(shù)后14d觀察，大鼠腹腔內(nèi)均無液體滲出和膿腫形成，腸管間少許黏連已經(jīng)吸收，膜周圍黏連依舊存在，但未形成硬塊，肝脾不腫大。術(shù)后21d和術(shù)后28d情況基本同前。

3.3.2 降解性 結(jié)果顯示此藥膜的降解速率為：7 d為49.5%，14d為74.6%，21d為92.9%，28d為100.0%。結(jié)果說明莫匹羅星生物降解膜具有很好組織相容性、并可于4周內(nèi)完全降解；加之莫匹羅星體外抗菌作用，此膜可更加有效地促進皮膚潰瘍愈合。

4 討論

莫匹羅星為廣譜抗生素，主要抗菌方式為在金黃色葡萄球菌及大腸桿菌中抑制蛋白質(zhì)的合成，對革蘭陽性球菌、陰性菌同時具有強大的抗菌作用，對耐藥菌株也比較敏感。莫匹羅星用后因迅速代謝成無活性的單孢菌酸而不宜全身給藥，局部用藥因具有良好的穿透性，可使皮膚表面保持高濃度而發(fā)揮作用，因此，非常適合于治療皮膚淺表層的感染性化膿性疾病。目前應(yīng)用的莫匹羅星制劑是我們所熟知的百多邦軟膏，其臨床療效確切，但乳膏不能防水，且給藥次數(shù)較多，未解決其不足。本文闡述利用天然高分子材料甲殼胺與廣譜抗菌的莫匹羅星制成可生物降解的涂膜劑，具備可防水、緩釋、促愈合的優(yōu)點。

莫匹羅星生物降解膜能促進家兔皮膚潰瘍愈合，具有改善局部血液循環(huán)、控制感染，促進吞噬細胞的滲出、增生，促進生肌長皮的作用；且對皮膚無刺激性，在生物體內(nèi)相容，4周內(nèi)可在生物體體內(nèi)完全降解。其價格低廉，制備簡單，安全有效，適宜各種醫(yī)療條件下使用，是理想的治療皮膚潰瘍的外用藥。

［1］ 隋麗華，李傳勛，楊彤，等.茶多酚乳膏促進皮膚潰瘍愈合的實驗研究［J］.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2009，11（11）：198－200.

［2］ 席建元，袁軼峰.橡皮生肌散對實驗性皮膚潰瘍促愈作用的研究［J］.中醫(yī)藥導(dǎo)報，2008，14（8）：99－100.

［3］ 劉學(xué)清.皮愈湯促愈大鼠慢性潰瘍實驗研究［D］.廣州：第一軍醫(yī)大學(xué)，2006.

［4］ 宋姍姍，李大勇，呂延偉.一效膏促進小鼠皮膚潰瘍愈合的實驗研究［J］.遼寧中醫(yī)大學(xué)學(xué)報，2011，13，（9）：40－41.