逯雯潔，王慧春，劉亞蓉，魏玉海，劉學(xué)良，劉海青 （青海省食品藥品檢驗(yàn)所，青海 西寧810003）

八味獐牙菜丸為藏醫(yī)傳統(tǒng)名方，藏文名“蒂達(dá)杰巴日布”，收載于1995年《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》藏藥標(biāo)準(zhǔn)（標(biāo)準(zhǔn)號(hào)為：WS3－BC－0241－95）［1］。臨床上用于膽囊炎和初期黃疸型肝炎等癥的治療。主要成分由獐牙菜、兔耳草、波棱瓜子、角茴香、榜嘎、小檗皮、巖參、木香八味藏藥材組成。本品君藥獐牙菜為龍膽科植物，是被廣泛用于治療肝膽疾病的藥物［2］，其主要化學(xué)成分為獐牙菜苦苷、龍膽苦苷、芒果苷、當(dāng)藥醇苷、異葒草苷等，芒果苷是獐牙菜屬植物中的有效成分，具有抗炎、抑菌、抗病毒、利膽和抗氧化等功能［3］。原衛(wèi)生部頒藏藥標(biāo)準(zhǔn)中僅對(duì)木香、小檗皮進(jìn)行鑒別，并無(wú)定量測(cè)定內(nèi)容，為有效的定量控制藥品質(zhì)量，本實(shí)驗(yàn)建立高效液相色譜方法對(duì)八味獐牙菜丸中芒果苷的含量進(jìn)行了測(cè)定研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Waters1525型高效液相色譜儀，Waters2489紫外檢測(cè)器；電子天平（METTLER AB204－S，瑞士METTLER公司）；電子天平（METTLER TOLEDO，瑞士METTLER 公司）；Milli－QA 超純水器。

1.2 試藥 芒果苷對(duì)照品（批號(hào)111607－200301）供含量測(cè)定用，購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院。甲醇為色譜純，其余試劑為分析純，水為超純水。八味獐牙菜丸樣品由兩家不同藥廠提供，分別是青海金訶藏藥藥業(yè)股份有限公司（批號(hào)20090722、20100420），寧夏多維藥業(yè)有限公司（批號(hào)060601、

080304、080911、090310、090311、091212、091209、090312）。

陰性樣品分別按照按原標(biāo)準(zhǔn)制備工藝去除獐牙菜后制得。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) Waters SunFire C18柱（4.6 mm×150 mm，5μm）；甲醇－0.1%冰醋酸（21∶79）為流動(dòng)相；流速1 mL·min－1；柱溫：25 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)260 nm；進(jìn)樣量10μL。理論板數(shù)按芒果苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3 000。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取芒果苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL含0.054 0 mg的芒果苷對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

2.3.1 提取方法的考察

（1）超聲提取法：精密稱取本品（批號(hào)20090722）1.001 2 g置于具塞錐形瓶中，精密加入甲醇20 mL，稱定，超聲提?。üβ?50 W，頻率50 kHz）30 min，放冷后補(bǔ)足減失質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)后取續(xù)濾液，即得。

（2）加熱回流提取法：精密稱取本品（批號(hào)20090722）1.000 4 g置于具塞錐形瓶中，精密加入甲醇20 mL，稱定，加熱回流提取30 min，放冷后補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)后取續(xù)濾液，即得。

對(duì)上述2種提取方法所得供試品溶液按照“2.1”項(xiàng)方法測(cè)定，測(cè)定結(jié)果相近，故確定選擇提取相對(duì)簡(jiǎn)便的超聲提取法做為供試品的制備方法。

2.3.2 提取時(shí)間的考察 將本品（批號(hào)20090722）研細(xì)，精密稱取1.001 8 g于具塞錐形瓶中，精密加入甲醇20 mL，稱定，超聲提?。üβ?50 W，頻率50 kHz）20，30，40 min，放冷，再稱定，補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。按照“2.1”項(xiàng)方法測(cè)定芒果苷含量。結(jié)果表明30，40 min所測(cè)得的芒果苷含量接近，故提取時(shí)間選擇30 min。

2.4 陰性對(duì)照溶液的制備 按照處方組成，取除獐牙菜外的其余藥味，按供試品溶液制備項(xiàng)下的方法制備陰性對(duì)照溶液。進(jìn)行測(cè)定，陰性溶液在對(duì)照品溶液出峰位置上無(wú)峰出現(xiàn)，表明無(wú)干擾，見圖1。

圖1 芒果苷高效液相色譜圖A.樣品；B.對(duì)照品；C.陰性；1－芒果苷Fig 1 HPLC chromatogram of mangiferinA.sample；B.standard；C.negative sample；1－mangiferin

2.5 線性關(guān)系考察 精密稱取芒果苷對(duì)照品10.8 mg，置100 mL量瓶中，加甲醇溶解至刻度，搖勻，制成質(zhì)量濃度為0.108 0 mg·mL－1的對(duì)照品儲(chǔ)備溶液。取上述對(duì)照品儲(chǔ)備溶 液 分 別 制 成 質(zhì) 量 濃 度 為0.003 24，0.006 48，0.012 96，0.043 20，0.064 80，0.108 00 mg·mL－1的溶液，分別精密吸取5μL按上述條件注入色譜儀測(cè)定，以進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)和峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：Y ＝4 279 440.4 X－17 761.9，r＝0.999 7，表明進(jìn)樣量在0.016 2～0.540 0μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.6 精密度考察 精密吸取質(zhì)量濃度為0.054 mg·mL－1的對(duì)照品溶液10μL，重復(fù)進(jìn)樣5次，按色譜條件操作進(jìn)行，測(cè)峰面積，以峰面積計(jì)算，結(jié)果RSD＝0.94%。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取上述供試品溶液（批號(hào)20090722）分別在0，2，4，8 h進(jìn)行，進(jìn)樣量10μL，測(cè)定芒果苷峰面積，以峰面積計(jì)算，結(jié)果RSD＝0.29%。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn) 按照上述含量測(cè)定方法對(duì)相同批號(hào)樣品（批號(hào)20090722）制備5份供試液，分別進(jìn)樣10μL，測(cè)得峰面積，計(jì)算RSD＝1.89%。

2.9 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取芒果苷對(duì)照品適量，加甲醇溶解配制成0.054 0 mg·mL－1的溶液，搖勻；稱取已知含量的八味獐牙菜丸樣品（批號(hào)20090722，含量為0.43 mg·g－1）0.7 g，精密稱定，稱取6份，置具塞錐形瓶中；每份中均同時(shí)加入芒果苷對(duì)照品溶液（0.054 0 mg·mL－1）7 mL，并精密加入甲醇13 mL，按供試品溶液制備項(xiàng)下的方法制成供試品溶液，并按上述色譜條件測(cè)定芒果苷的含量，計(jì)算回收率。芒果苷加樣回收率結(jié)果見表1。結(jié)果表明方法可行。

表1 芒果苷回收率測(cè)定結(jié)果（n＝6）Tab 1 Results of recovery of mangiferin（n＝6）

3 樣品測(cè)定

分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μL，按上述色譜條件對(duì)10批樣品進(jìn)行含量測(cè)定，以外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算樣品中芒果苷的含量，10批樣品（批號(hào)20090722，20100420，20110313，20090404，20090111，080911，090310，090312，060601，091212）含 量 分 別 為0.43，0.79，0.16，0.10，0.09，0.09，0.06，0.05，0.16，0.07 mg·g－1。

4 討論

由于原標(biāo)準(zhǔn)對(duì)成藥中獐牙菜未進(jìn)行定量控制，因此增訂了用高效液相法測(cè)定獐牙菜中芒果苷的含量測(cè)定項(xiàng)。含量測(cè)定方法優(yōu)化時(shí)，嘗試用甲醇－水，甲醇－冰醋酸溶液，甲醇－磷酸溶液等多種流動(dòng)相，最后選擇甲醇－0.1%冰醋酸為流動(dòng)相，被測(cè)組分達(dá)到良好地分離度并且有較好的峰形。

10 批 樣 品 含 量 分 別 為0.43，0.79，0.16，0.10，0.09，0.09，0.06，0.05，0.16，0.07 mg·g－1，差 異 較 大，查 閱 文獻(xiàn)［4－6］，獐牙菜屬植物種類較多，藥材含量成分差異也較大，還可能受到地域、生長(zhǎng)期、儲(chǔ)藏時(shí)間等因素的影響。而由于此品種為本所藏藥標(biāo)準(zhǔn)提高課題，曾赴藥廠實(shí)地考察，發(fā)現(xiàn)兩廠家投料所用原料藥材為獐牙菜屬不同種植物，青海金訶藏藥藥業(yè)股份有限公司用印度獐牙菜投料，而寧夏多維藥業(yè)用川西獐牙菜作為原料藥材投料，分別各取兩廠家3批原藥材按正文樣品含量測(cè)定方法進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)印度獐牙菜原藥材芒果苷含量分別為2.35、4.20、0.78 mg·g－1，明顯優(yōu)于川西獐牙菜芒果苷含量（0.50、0.41、0.33 mg·g－1）。由此可見，提高本品藏藥標(biāo)準(zhǔn)，還需進(jìn)一步將處方組成細(xì)化并制定合理的原藥材含量測(cè)定指標(biāo)。

［1］ 衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì).衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)（藏藥第一冊(cè)）［S］.1995：244.

［2］ 楊永昌，何廷農(nóng)，盧生蓮，等.藏藥志［M］.西寧：青海人民出版社，1991：112－113.

［3］ 丁鳳娟，朱雯，于瑩，等.HPLC 分析四種獐牙菜中芒果苷的質(zhì)量分?jǐn)?shù)［J］.大連工業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2009，28（6）：401－403.

［4］ 孫磊，田金改，金宏宇，等.HPLC 法測(cè)定印度獐牙菜中5種有效成分含量［J］.中國(guó)藥事，2010，24（7）：687－689.

［5］ 保儀，吉文鶴，馬玉花，等.HPLC 測(cè)定四川及青海地區(qū)獐牙菜植物中6種主要成分的含量［J］.中國(guó)中藥雜志，2006，31（24）：2036－2038.

［6］ 夏從龍，張浩，劉光明，等.獐牙菜屬及近緣植物中4種有效成分HPLC 定 量 分 析［J］.藥 物 分 析 雜 志，2007，27（8）：1161－1164.