李 靜 鄭振雨 宋景貴 李六一 郭 康

1）新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第三附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科 新鄉(xiāng) 453002 2）新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第三附屬醫(yī)院骨科 新鄉(xiāng) 453002 3）新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科 新鄉(xiāng) 453002 4）河南省人民醫(yī)院神經(jīng)電生理室 鄭州 450003 5）新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第三附屬醫(yī)院腫瘤科 新鄉(xiāng) 453002

腦卒中后抑郁癥（post-stroke depression，PSD）是腦卒中后常見的并發(fā)癥之一，以興趣減退、情緒低落、主動活動減少、自罪自責(zé)、睡眠紊亂等為主要表現(xiàn)的情感障礙性疾?。?］，既嚴(yán)重影響了人們的生活質(zhì)量［2］，同時給社會帶來極大負(fù)擔(dān)。目前對于PSD 的診斷必須具備以下兩個要素：一是必須有腦卒中這個前提，二是必須同時符合抑郁癥的診斷。最新研究表明，載脂蛋白H（Apolipoprotein H，ApoH）與心腦血管性疾病相關(guān)，可能參與啟動并引發(fā)動脈粥樣硬化，Profumo等［3］研究發(fā)現(xiàn)，ApoH 參與血脂的代謝，可能通過介導(dǎo)細(xì)胞免疫反應(yīng)引發(fā)頸動脈粥樣硬化，從而引發(fā)動脈的各種疾病，而動脈粥樣硬化是腦卒中的重要危險因素之一。同時也有研究發(fā)現(xiàn)ApoH 與缺血性腦血管病有相關(guān)性，在血栓以及合并缺血性腦血管疾病的患者中抗ApoH 的抗體濃度都明顯增加，這也提示抗β2糖蛋白Ⅰ抗體可能在血栓形成的病理生理過程中起到一定作用［4］。國內(nèi)外尚未見有關(guān)本ApoH 與PSD 關(guān)系的相關(guān)研究，本研究旨在通過了解PSD患者ApoH 的水平特點(diǎn)，為PSD 的臨床診斷提供新的客觀依據(jù)。

1 對象與方法

1.1 研究對象 所有病例均為2010-02—2012-10期間新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第三附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科住院的患者共92例。按全國第4屆腦血管病學(xué)術(shù)會議通過的腦梗死診斷標(biāo)準(zhǔn)，均行頭顱CT 或MRI檢查證實(shí)，抑郁癥的診斷均符合第3版中國精神疾病 分 類 方 案 與 診 斷 標(biāo) 準(zhǔn)（CCMD-3）［5］。PSD 組46 例，男22例，女24例；年齡42～78歲，平均（65.3±7.2）歲；文化程度：大學(xué)12例，中學(xué)16例，小學(xué)18例；病程4～51.0（18.9±12.4）d。腦卒中非抑郁組46例，男23例，女23例；年齡42～76歲，平均（65.5±10.6）歲；文化程度：大學(xué)15 例，中學(xué)18例，小學(xué)13例；病程3.0～52.0（19.2±13.5）d。既往無高血壓史、心血管病史及糖尿病病史。2組性別、年齡和文化程度、病程等比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P 均＞0.05）。

1.2 ApoH mRNA 的測定 采用實(shí)時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（RT-realtime PCR）檢測ApoH 基因mRNA表達(dá)量。人載脂蛋白H 基因引物使用primer5.0軟件設(shè)計引物，引物由大連寶生物工程有限公司合成。引物序列如下：上游引物5’-AGAGTATGTCCTTTTGCTGGAATC-3’，下 游 引 物 為5’-GGCTCCATTTTCCTTCCTCAGTG-3’；GAPDH 基因作為內(nèi)參照，上游引物為5’-ACCACAGTCCATGCCATCAC-3’，下游引物為5’-TCCACCACCCTGTTGCTGTA-3’。按RNA 提取試劑盒說明書中的操作步驟提取總RNA 后逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系為：M-MLV 5ΧReaction Buffer（5μL），普通型dNTP（1.25μL），M-MLV RT （1μL），Nuclease-Free Water（1.75μL）。實(shí)時熒光定量PCR，25μL的反應(yīng)體系內(nèi)容如下：核酸染料（SYBRII）12.5μL，上、下游引物各（1μL），cDNA 溶液（6μL），去離子雙蒸水（4.5μL）。循環(huán)條件運(yùn)行參數(shù)：95.0℃預(yù)變性3 min，95.0℃變性25s，58.0℃退火40s，72.0℃延伸1min，共40個循環(huán)。將閾值循環(huán)數(shù)（thresholdcycle，Ct值）倒數(shù)與內(nèi)參基因Ct值倒數(shù)相比作為相對表達(dá)量進(jìn)行分析，相對表達(dá)量＝（1／目的基因Ct值）／（1／內(nèi)參基因Ct值），即內(nèi)參基因Ct值／目的基因Ct值。

1.3 血清ApoH 蛋白水平測定 儀器采用芬蘭雷勃MK3全自動酶標(biāo)儀和上海楓嶺生物有限公司FTC-2000熒光定量基因擴(kuò)增儀；試劑盒采用武漢中美科技有限公司產(chǎn)人ApoH試劑盒（產(chǎn)品編號：E0255 h）。采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測血清載脂蛋白H 水平。將血清標(biāo)本按Apo酶聯(lián)免疫分析試劑盒說明書操作步驟測定，應(yīng)用酶聯(lián)儀在450 nm 波長依序測量各孔的光密度（OD 值）。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析，數(shù)據(jù)均進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)和方差齊性檢驗(yàn)，各數(shù)據(jù)均符合正態(tài)分布及方差齊，2組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

PSD 組ApoH mRNA 表達(dá)量低于腦卒中非抑郁組，而PSD組血清ApoH 水平高于腦卒中非抑郁組，差異具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），見表1。

表1 2組患者ApoH 的表達(dá)量及血清ApoH 水平比較

3 討論

隨著人口的日趨老齡化，腦血管病的發(fā)病率逐年增加，而PSD 是腦卒中后常見的精神障礙疾病，臨床癥狀以持續(xù)的情緒低落為主要特征，不僅影響患者預(yù)后，而且增加了家庭和社會的負(fù)擔(dān)［6］，增加病死率和腦卒中復(fù)發(fā)風(fēng)險，降低患者回歸社會的比例［7］。因此，關(guān)于PSD 的相關(guān)研究越來越受到世界各地人們的關(guān)注。PSD 發(fā)病機(jī)制尚不明確，多認(rèn)為PSD 的發(fā)生與生物、心理和社會因素有關(guān)［8］。

ApoH 又稱β2 糖蛋白Ⅰ，是載脂蛋白的組分之一，相對分子質(zhì)量（43～50）×103，是由326 個氨基酸殘基組成的單鏈多肽，主要由肝臟合成，是血脂的組成成分之一。研究發(fā)現(xiàn)，在血栓及合并缺血性腦血管疾病的患者中抗ApoH 的抗體濃度均明顯增加，這也提示抗β2糖蛋白Ⅰ抗體可能在血栓形成的病理生理過程中起到一定作用。一些研究表明，其與血脂有關(guān)［9］，可能參與甘油三酯（TG）和（或）膽固醇（CHO）的代謝，與動脈粥樣硬化有關(guān)，具體機(jī)制可能是通過影響動脈粥樣硬化過程而與缺血性腦血管病有關(guān)［10］。有研究發(fā)現(xiàn)急性動脈粥樣硬化性血栓性腦梗死（ACI）患者的ApoH 血清水平與膽固醇（CHO）、低密度脂蛋白（LDL）呈正相關(guān)，與TG 無相關(guān)性［11］。

本研究發(fā)現(xiàn)：PSD 患者外周血清ApoH 水平高于腦卒中非抑郁組，而ApoE 基因mRNA 表達(dá)量低于腦卒中非抑郁組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。研究結(jié)果表明PSD 患者ApoH 水平存在異常，外周血清ApoH 水平增高，ApoH基因mRNA 表達(dá)量降低。分析此結(jié)果可能原因，當(dāng)PSD 患者外周血清ApoH 水平增時，高水平的ApoH 可引起機(jī)體反射性調(diào)節(jié)，從而使機(jī)體單核細(xì)胞中ApoH 基因mRNA 表達(dá)量降低。

ApoH 與各種缺血性腦血管病的相關(guān)臨床研究雖然比較多，但有關(guān)PSD 患者ApoH 的相關(guān)研究國內(nèi)外未見報道，根據(jù)本研究結(jié)果推測外周血清ApoH 水平增高可能為PSD的臨床診斷提供新的參考指標(biāo)。關(guān)于ApoH 如何具體影響PSD 的發(fā)生有待進(jìn)一步研究探討。

［1］李靜，宋景貴，穆俊林，等.腦卒中后抑郁癥患者載脂蛋白E 水平檢測［J］.鄭州大學(xué)學(xué)報，2011，46（3）：401-403.

［2］Joyce A Kootker，Luciano Fasotti，Sascha MC Rasquin，et al.The effectiveness of an augmented cognitive behavioural intervention for post-stroke depression with or without anxiety（PSDA）：the Restore4Stroke-PSDA trial［J］.BMC Neurology，2012，12：51.

［3］Profumo E，Buttari B，Alessandri C，et al.Beta-glycoprotein I is a target of T cell reactivity in patients with advanced carotid atherosclerotic plaques［J］.Int J Immunopathol Pharmacol，2010，23（1）：73-80.

［4］Gushiken FC，Arnett FC，Thiagarajan P.Primary antiphospholipid antibody syndrome with mutations in the phospholipid binding domain of beta（2）-glycoproteinⅠ［J］.Am J Hematol，2000，65（2）：160-165.

［5］中華醫(yī)學(xué)會精神科分會.中國精神障礙分類與診斷標(biāo)準(zhǔn)［M］.3版.濟(jì)南：山東科學(xué)技術(shù)出版社，2001：87.

［6］喬杉杉，吳春薇，康智敏，等.卒中后抑郁研究進(jìn)展［J］.中風(fēng)與神經(jīng)疾病雜志，2010，7（27）：663-665.

［7］Bogolepova AN，Chukanova EI，Smirnova MY，et al.Experience in the use of valdoxan in the treatment of post-stroke depression［J］.Neuroscience and Behavioral Physiology，2012，42（6）：556-560.

［8］關(guān)文明.氟西汀聯(lián)合小劑量阿立呱唑及心量治療中后抑郁48例［J］.中國實(shí)用神經(jīng)疾病雜志，2012，15（3）：26-27.

［9］曲春雁，崔國方.ApoH 基因多態(tài)性與冠心病及血脂代謝的關(guān)系［J］.中外健康文摘，2011，8（45）：125-126.

［10］郭新玲，閆春華，吳麗娥.載脂蛋白H 與缺血性腦血管病相關(guān)性研究進(jìn)展［J］.醫(yī)學(xué)綜述，2012，18（4）：513-515.

［11］夏健，史偉雄，楊期東，等.腦卒中患者載脂蛋H 與血脂關(guān)系的研究［J］.中華醫(yī)學(xué)雜志，2002，82（4）：236-238.