邢俊波，曹 紅，單婷婷，水彩紅，陳玉敏，胡 丹

(中國(guó)人民解放軍總后勤部衛(wèi)生部藥品儀器檢驗(yàn)所，北京100071)

3.2.2.2 供試品定容體積的不確定度

根據(jù)常用玻璃量器計(jì)量檢定規(guī)程可知:A級(jí)50 mL移液管的允許誤差為±0.030 mL。按照矩形分布評(píng)定，不確定度分別為:

測(cè)量不確定度主要是為了檢查測(cè)定結(jié)果的可疑程度，表征合理地賦予被測(cè)量之值的分散性與測(cè)量結(jié)果相聯(lián)系的參數(shù)，在實(shí)驗(yàn)室管理中有著很重要的作用。本研究依據(jù)《中國(guó)藥典》2010年版一部［1］，測(cè)定感冒清熱顆粒中葛根素的含量，參考測(cè)量不確定度評(píng)定相關(guān)技術(shù)規(guī)范等相關(guān)資料［2－5］，分析了含量測(cè)定過(guò)程中的不確定度來(lái)源，對(duì)各成因做出了具體分析，為測(cè)量結(jié)果的準(zhǔn)確性提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

Agilent 1200系列高效液相色譜儀;葛根素對(duì)照品(由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供.110752－200511，供含量測(cè)定用，純度為100%);感冒清熱顆粒:由山西太行藥業(yè)股份有限公司提供;乙腈為色譜純;其他試劑均為分析純。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 色譜條件 色譜柱:SUPELCO Discovery C18(25 cm ×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相:乙腈 －水(11∶89);柱溫:40 ℃，流速:1 mL·min－1;檢測(cè)波長(zhǎng)250 nm。

2.2 測(cè)定方法

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取葛根素對(duì)照品適量，加30%乙醇制成每1 mL含16μg的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備 取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，研細(xì)，取0.8 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入30%乙醇50 mL，密塞，稱定重量，超聲處理(功率250 W，頻率33 kHz)20 min，放冷，再稱定重量，用30%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用微孔濾膜(0.45 μL)濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。按外標(biāo)法計(jì)算葛根素的含量。

3 分析與結(jié)果

3.1 建立數(shù)學(xué)模型 含量計(jì)算公式如下:

式中，X為葛根素的含量(mg/袋);A樣為供試品溶液中葛根素的色譜峰峰面積;V樣為供試品溶液最后定容體積(mL);W為裝量(g/袋);m樣為供試品取樣量(g);A對(duì)為對(duì)照品溶液中葛根素的色譜峰峰面積;C對(duì)為對(duì)照品的濃度(mg/mL):

其中m對(duì)為對(duì)照品稱樣量(mg);V1、V2、V3分別為葛根素對(duì)照品初次定容體積、稀釋時(shí)移液管取樣體積、最后定容體積(mL)。

3.2 不確定度各分量的量化

3.2.1 對(duì)照品溶液濃度和色譜峰的不確定度。對(duì)照品溶液濃度的不確定度來(lái)源于其質(zhì)量的不確定度和稀釋定容體積的不確定度，而質(zhì)量不確定度是由稱樣量和純度的不確定度組成。

3.2.1.1 葛根素對(duì)照品質(zhì)量的不確定度

①葛根素對(duì)照品稱樣量分別為18.25 mg、18.44 mg。根據(jù)檢定證書可知天平精度為 0.01 mg，按矩形分布計(jì)算，

②葛根素對(duì)照品純度為100%。由于沒有不確定度的其他說(shuō)明，故假設(shè)為均勻分布，其區(qū)間的半寬×10－5

綜合①、②，故葛根素對(duì)照品質(zhì)量相對(duì)不確定度:

3.2.1.2 對(duì)照品稀釋定容體積的不確定度

實(shí)驗(yàn)中使用了100 mL、25 mL容量瓶，及3 mL移液管，其最大允許誤差分別為±0.10 mL、±0.015 mL、±0.03 mL。按照矩形分布評(píng)定，不確定度分別為:

3.2.1.3 對(duì)照品色譜峰峰面積的不確定度

葛根素對(duì)照品色譜峰面積是用雙標(biāo)雙樣平行法進(jìn)行測(cè)定的，2份對(duì)照品峰面積分別為:795.024、794.115(平均峰面積為 794.570，R1=0.909);801.846、800.566(平均峰面積為 801.206，R2=1.280)。采用極差法計(jì)算，當(dāng)n=2時(shí)，極差系數(shù)C=1.13。

對(duì)照品色譜峰峰面積的不確定度為:

3.2.1.4 對(duì)照品的相對(duì)不確定度

3.2.2 供試品溶液含量測(cè)定的不確定度評(píng)定 供試品溶液含量測(cè)定的不確定度來(lái)源于供試品溶液濃度和色譜峰測(cè)定的不確定度等。

3.2.2.1 供試品稱量的不確定度

① 供試品稱樣量分別為 0.801 8 g、0.807 5 mg。根據(jù)檢定證書可知天平精度為0.01 mg，按矩形分布計(jì)算，

3.2.2.2 供試品定容體積的不確定度

根據(jù)常用玻璃量器計(jì)量檢定規(guī)程可知:A級(jí)50 mL移液管的允許誤差為±0.030 mL。按照矩形分布評(píng)定，不確定度分別為:

3.2.2.3 供試品色譜峰峰面積的不確定度

供試品稱樣量分別為0.801 8 g、0.807 5 mg，每份供試液2次測(cè)量峰面積分別為:885.336、883.245(平均峰面積為 884.791，R1=1.091);890.454、890.316(平均峰面積為 890.386，R2=0.138)。采用極差法計(jì)算，當(dāng)n=2時(shí)，極差系數(shù)C=1.13。

3.2.2.4 供試品的相對(duì)不確定度

3.3 合成相對(duì)不確定度

由測(cè)得結(jié)果合成不確定度為:

3.4 擴(kuò)展不確定度

測(cè)定結(jié)果符合正態(tài)分布，在置信概率為95%時(shí)，選擇包含因子k=2，則擴(kuò)展不確定度為:u=urel×k=6.01 ×10－3×2=0.012。

3.5 測(cè)量不確定度報(bào)告

含量測(cè)定結(jié)果可表示為:X=(12.5±0.012)mg/袋。

4 討論

本文評(píng)估出感冒清熱顆粒含量測(cè)定的擴(kuò)展不確定度為0.012 mg/袋，表明供試品測(cè)定結(jié)果的分散程度符合HPLC法對(duì)準(zhǔn)確度的要求，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確、可靠。在分析評(píng)估不確定度時(shí)，因合成不確定度的數(shù)值幾乎完全取決于重要的不確定度分量，所以應(yīng)盡可能考慮產(chǎn)生不確定度的全部來(lái)源。由于本法中環(huán)境溫度為20℃，故實(shí)驗(yàn)室溫度變化而引起的偏差可忽略。結(jié)果顯示，本方法測(cè)量結(jié)果的不確定度主要來(lái)自對(duì)照品稀釋定容的過(guò)程，應(yīng)予以注意。測(cè)量不確定度用于評(píng)估定量方法的可靠性和測(cè)量結(jié)果的可信程度，在藥品檢驗(yàn)中具有重要意義。

［1］ 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典:一部［S］.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:1185－1186.

［2］ JJFlO59－1999，測(cè)量不確定度評(píng)定與表示［S］.北京:中國(guó)計(jì)量出版社，1999.

［3］ 李慎安.化學(xué)實(shí)驗(yàn)室測(cè)量不確定度［M］.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2006:10.

［4］ 國(guó)家質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局計(jì)量司組.測(cè)量不確定度評(píng)定與表示指南［M］.北京:中國(guó)計(jì)量出版社，2000:1.

［5］ 鄭劍紅，黃囂嘉.HPLC法測(cè)定三黃片中大黃素和大黃酚含量的不確定度評(píng)定［J］.中國(guó)醫(yī)藥指南，2010，8(12):46 －48.

［6］ 趙霞，郭舒崗，谷日旭，等.高效液相色譜法測(cè)定果脯中檸檬黃含量的不確定度分析［J］.實(shí)用醫(yī)技雜志，2012，19(4):378－379.