傅義萍

(荊州市中醫(yī)醫(yī)院藥劑科，湖北荊州434000)

陳永剛

(武漢市第三醫(yī)院藥劑科，湖北武漢430060)

三七為五加科植物三七Panax notoginseng的干燥根，主要產(chǎn)于云南、廣西等地，別名山漆，金不換，血參，參三七，田三七，田漆，田七等［1］。三七用于治療疾病的歷史悠久，由于發(fā)現(xiàn)三七中含有一些與人參相似的化學(xué)成分 (人參皂苷等)而引起國內(nèi)外學(xué)者的高度重視，并對三七進行了大量的研究，其中包括化學(xué)成分［2-5］、臨床應(yīng)用［6-7］、藥理作用［8-10］等。但在商品市場上，三七有明確的規(guī)格劃分，不同規(guī)格的三七其價格差異很大，三七中皂苷成分是其主要有效成分之一，測定各商品規(guī)格三七中總皂苷的含量，并對商品規(guī)格劃分進行相關(guān)性分析，為臨床合理使用不同規(guī)格的三七提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

三七購自云南省文山縣，為3年生冬三七，按商品規(guī)格分為20、30、40、60、80、120頭及無數(shù)頭7類供試品，經(jīng)荊州市中醫(yī)醫(yī)院彭勇主任藥師鑒定為五加科植物三七Panax notoginseng的干燥根。人參皂苷Rg1(批號:1203200322)、Re(批號:12549608)、Rb1(批號:120704200114)和三七皂苷R1(批號:0745-201207)對照品均購自中國藥品生物制品檢定所，人參皂苷Rb2(批號:2012369102)，Rb3(批號:2012369103)，Rc(批號:20123691044)和Rd(批號:2012369105)均購買于成都曼斯特生物制品有限公司 (純度＞98%)。乙腈、甲醇均為Merck公司色譜級試劑，實驗用水為超純水。其他試劑均為分析純。

1.2 儀器

戴安Ultimate 3000型高效液相色譜儀 (包括四元泵，自動進樣器，柱溫箱，DAD檢測器，Chromeleon工作站);AR224CN電子天平 (d=0.0001 g，奧豪斯儀器 (上海)公司);SK3300LH超聲儀 (托利多儀器上海有限公司);IKA RV10 HB10 basic旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 (德國IKA);HHS-4S水浴鍋 (上海宜昌儀器紗篩廠);Memmert model 100-800烘箱 (德國 Memmert公司)。Acclaim Cl8(250mm×4.6mm，5μm，Dionex)，Syncronis aQ Cl8(250mm×4.6mm，5μm，Thermo)，高速離心機(sigma公司)。

1.3 樣品溶液的制備

1.3.1 供試品溶液的制備 各樣品60℃干燥，測定干質(zhì)量，粉碎，過100目篩，備用。樣品60℃干燥至質(zhì)量恒定后，取約5.0g粉末，精密稱定，用水飽和正丁醇100ml冷浸過夜，超聲提取50min(2次)，合并提取液，冷卻后離心，上清液既為供試品溶液。

1.3.2 樣品溶液的制備 精密稱取各種皂苷對照品，分別置10ml量瓶，加色譜級甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，置4℃冰箱備用。精密稱取8種皂苷對照品即人參皂苷R1，Rg1，Re，Rb1，Rb2，Rb3，Rc，Rd，分別為1.88、2.32、2.36、2.92、3.02、2.42、3.38、2.58mg，用色譜級甲醇溶解并定容至10ml，配成8種皂苷混合對照品貯備液。

1.4 總皂苷的測定

精密吸取1.3.1項下供試品溶液4ml，置水浴中蒸發(fā)揮干，用乙醇溶解，定容置50ml，然后從中精密吸取1ml置水浴中揮干溶劑，加入濃硫酸2ml，于80℃恒溫水浴中加熱反應(yīng)1.5h，立即置于冷水浴中冷卻5min，加入乙醇定容到50ml，搖勻，放置30min，以試劑空白為參比，在波長為275nm處測定光密度D。同時以人參皂苷Rg1對照品溶液進行線性關(guān)系、精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性和加樣回收率等方法學(xué)考察試驗。

1.5 人參皂苷類成分的測定

Syncronis aQ Cl8(250mm×4.6mm，5μm，Thermo);柱溫35℃;流動相為含0.05%甲酸的乙腈 (A)和0.05%甲酸的水溶液 (B);梯度洗脫條件為:0～35min，10% ～35%A，35～65min，35% ～75%;流速1ml/min;檢測波長203nm;進樣量20μl。并進行線性關(guān)系、精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性和加樣回收率等方法學(xué)考察試驗。

2 結(jié) 果

2.1 總皂苷含量測定結(jié)果

取人參皂苷Rg1對照品約7.5mg，精密稱定，加入適量的乙醇，在水浴中使之溶解，放冷后用乙醇定容，即得標(biāo)準(zhǔn)溶液 (0.15mg/ml)。精密量取1、2、3、4、5、6ml，分別置50ml量瓶中，加入濃硫酸2ml，于80℃恒溫水浴中反應(yīng)1.5h，置于冷水浴中冷卻5min，加入乙醇定容至50ml，搖勻，放置30min，以試劑空白為參比，在波長為275nm處測定光密度D，各個濃度 (C)相應(yīng)的光密度D統(tǒng)計處理，得回歸方程:D=0.1158C-0.0028，r=0.9997，線性范圍0.003～0.018mg/ml。

精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性考察試驗結(jié)果顯示，其RSD均小于3.0%，符合實驗要求，加樣回收率試驗結(jié)果見表1。

表1 三七中總皂苷含量測定加樣回收率試驗結(jié)果

在不同商品規(guī)格三七中，總皂苷在80頭最高，接近10%;無數(shù)頭最低，只有6.14%，其他規(guī)格差異性不大，見表2，其商品規(guī)格劃分與總皂苷含量無明顯規(guī)律性。

表2 不同商品規(guī)格三七中總皂苷的含量

2.2 人參皂苷類成分的測定結(jié)果

三七皂苷HPLC色譜圖見圖1;標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性關(guān)系見表3;加樣回收率試驗結(jié)果見表4;三七中人參類皂苷含量測定結(jié)果見表5。

圖1 三七皂苷HPLC色譜圖

表3 標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性關(guān)系

精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性考察試驗結(jié)果顯示，其RSD均小于3.0%，符合實驗要求，加樣回收率試驗結(jié)果見表4。

表4 三七中人參類皂苷含量測定加樣回收率試驗結(jié)果

人參型皂苷類成分含量測定結(jié)果見表5，8種成分含量與商品規(guī)格亦無明顯規(guī)律性，8種成分總含量亦無顯著規(guī)律性，其中60頭與80頭含量差異不明顯。

表5 三七中人參類皂苷含量測定結(jié)果

3 結(jié) 論

三七具有止血、補血、活血、降低血液粘度、降血脂、降血壓、改善腦血循環(huán)、鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、提高記憶力，調(diào)節(jié)免疫、抗炎等功效。主產(chǎn)于云南文山和毗鄰的廣西右江流域一帶，為我國特有的珍貴藥材。其傳統(tǒng)藥用活性部位為根，主要活性成分為三七皂苷，傳統(tǒng)中按1市斤含幾頭分為不同的商品規(guī)格，本研究結(jié)果提示，價格適中的60頭與80頭三七中皂苷含量較高，而價格最貴的20頭三七皂苷含量一般，但其含量也沒有規(guī)律性，究其原因可能是因為本實驗樣品量有限，或者樣品生長年限和環(huán)境等因素有關(guān)，后期實驗有必要擴大樣本量及其同質(zhì)性，以確定其商品規(guī)格劃分的依據(jù)。

［1］高學(xué)敏.中藥學(xué)［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，2006:988-1000.

［2］林琦，趙霞，劉鵬，等.三七脂溶性化學(xué)成分的研究［J］.中草藥，2002，33(6):490-492.

［3］liu JH，Wang X，Cai SQ，et al.Analysis of the constituents in the Chinese drug notoginseng by liquid chromatography-electrospray mass spectrometry ［J］.J Chin Pharma Sci，2004，13(4):225-237.

［4］曾江，崔秀明，周家明，等.三七根莖的化學(xué)成分研究［J］.中藥材，2007，30(11):1388-1391.

［5］宋建平，曾江，崔秀明，等.三七根莖的化學(xué)成分研究 (Ⅱ)［J］.云南大學(xué)學(xué)報:自然科學(xué)版，2007，29(3):287-290.

［6］劉運生.三七的臨床應(yīng)用［J］.現(xiàn)代中藥研究與實踐，2012，26(2):88.

［7］黎蕓，程一帆，古碧秀.三七總皂苷制劑的臨床應(yīng)用近況［J］.2006，15(6):57-58.

［8］唐嬌，黃俊明，張印紅，等.三七的藥理活性及毒理學(xué)研究進展［J］.毒理學(xué)雜志，2012，26(3):228-231.

［9］劉辰，鄭惠珍.三七總皂苷的研究進展 ［J］.中國醫(yī)藥指南，2012，10(16):71-74.

［10］王艷.中藥三七對血液系統(tǒng)藥理作用及臨床新用［J］.中醫(yī)臨床研究，2012，4(3):45.