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(長春中醫(yī)藥大學(xué)，吉林 長春 130117)

二參湯對心肌缺血大鼠血管內(nèi)皮損傷的影響

吳澤民，鄒佳宏，李欣*

(長春中醫(yī)藥大學(xué)，吉林 長春 130117)

目的：通過觀察二參湯對心肌缺血大鼠血管內(nèi)皮損傷指標(biāo)NO、ET的影響，探討二參湯治療心肌缺血的機制。方法:將健康Wistar大鼠隨機分為5組，二參湯高、中、低劑量組(100、50、20 g/kg)，空白對照組和模型對照組，每組10只，觀察二參湯對心肌缺血大鼠血管內(nèi)皮損傷的影響，采用ELISA法測定血清NO值,以免疫組化方法測定心肌ET表達。結(jié)果：與模型對照組比較，二參湯組大鼠血清NO值顯著提高(Plt;0.05)，心肌組織ET表達顯著降低(Plt;0.05)。結(jié)論：二參湯具有改善血管內(nèi)皮功能，對血管內(nèi)皮損傷具有一定保護作用，其作用機理可能與藥物調(diào)節(jié)NO、ET表達有關(guān)。

二參湯；心肌缺血；血管內(nèi)皮損傷；大鼠

二參湯是吉林省著名老中醫(yī)肖永林教授結(jié)合數(shù)十年臨床經(jīng)驗創(chuàng)立的治療冠心病的經(jīng)驗方[1-2]。具有益氣養(yǎng)陰、活血化瘀之功。本研究擬從血管內(nèi)皮損傷角度探討二參湯治療冠心病心肌缺血的作用機理，揭示二參湯對心肌缺血大鼠血管內(nèi)皮損傷指標(biāo)一氧化氮(NO)及內(nèi)皮素(ET)的影響。

1 材料與方法

1.1 材料 1)藥物：二參湯組成：黃芪、黨參、丹參、川芎、五味子、木香、三七、降香、麥冬、水蛭、薤白、甘草，常規(guī)煎煮，藥液濃縮至含生藥1 g/mL，4 ℃冰箱冷藏備用。2)動物：健康雄性Wistar大鼠50只，體質(zhì)量(200±20)g，購自吉林大學(xué)白求恩醫(yī)學(xué)院動物實驗中心。3)試劑:ET免疫組化試劑盒購置北京中杉公司；NO ELISA試劑盒購置美國Ramp;D公司。4)儀器：Motic型自動圖像分析儀，離心機，全自動酶標(biāo)儀。

1.2 方法 將大鼠隨機分為5組：正常對照組、心肌缺血模型組給予生理鹽水灌胃，2 mL/d;二參湯高、中、低劑量組，用濃度分別為100、50、20 g/kg的二參湯灌胃，2 mL/d，連續(xù)用藥14 d后，除正常對照組外，其余5組大鼠用垂體后葉素20 U/kg腹腔注射造成心肌缺血模型。采用雙抗體夾心法按照NO試劑盒說明書操作，酶標(biāo)儀450 nm處測定樣品吸光度(A),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，測定NO濃度。用10%水合氯醛麻醉各組大鼠，取心臟，生理鹽水沖洗，采用10%多聚甲醛固定心肌組織，石蠟包埋，5 μm厚連續(xù)切片，二甲苯脫蠟及梯度乙醇脫水后,按ET說明書操作，在光學(xué)顯微鏡視野下觀察,陽性著色為棕黃、棕褐及淺黃色胞漿。陰性對照用PBS液代替抗ET蛋白抗體。隨機計數(shù)10個視野并計算灰度值，然后取平均值作為該切片的灰度值。

2 結(jié)果

2.1 二參湯對心肌缺血大鼠血清NO含量的影響 見表1。

表1 對心肌缺血大鼠血清NO含量的影響 mg/mL

2.2 二參湯對心肌缺血大鼠心肌組織ET含量的影響 見表2。

表2 對心肌缺血大鼠心肌組織ET含量的影響 AU

3 小結(jié)

本研究采用ELSIA方法[3-4]觀察急性心肌缺血大鼠血清NO表達情況,結(jié)果顯示，心肌缺血模型組血清NO含量明顯低于對照組(Plt;0.5)，二參湯治療組NO水平明顯提高，提示二參湯治療心肌缺血可能通過提高NO表達發(fā)揮作用。ET是目前已知的最強的縮血管物質(zhì)之一。本研究采用免疫組化方法[5]檢測心肌缺血大鼠心肌組織ET表達水平，結(jié)果顯示模型對照組ET表達明顯高于對照組，二參湯組可降低ET表達。通過以上實驗發(fā)現(xiàn)，二參湯能明顯提高NO表達，并抑制缺血心肌ET的釋放，提示二參湯在抗內(nèi)皮損傷有顯著作用，可調(diào)節(jié)NO與ET之間平衡，進而減少冠心病急性心肌缺血引起的心肌損傷及壞死。

[1]李欣,周麗雅.二參湯對急性心肌缺血模型大鼠心肌細胞凋亡影響的實驗研究[J].吉林中醫(yī)藥,2012,32(4):398.

[2]周麗雅,李欣.二參湯對異丙腎上腺素致大鼠心肌缺血損傷的保護作用[J].中國實驗方劑學(xué)雜志,2012,18(13):204.

[3]欒杰男,李根,焦燕.通脈地仙丸對促進缺血心肌血管新生作用的研究[J].長春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2011,27(4):667.

[4]羅千古,周玖瑤,吳俊標(biāo).丹參飲對心肌缺血小鼠血清ET-1、NO的影響[J].中藥材,2011,34(3):432-434.

[5]牛占忠,沈娟,范書萍.血府逐瘀湯對大鼠心肌缺血模型NO、ET-1含量的影響[J].河北中醫(yī),2006,28(11):865-866.

R285.5

A

1007-4813(2013)03-0395-01

吉林省中醫(yī)藥管理局基金項目(編號:2010-080)。

吳澤民(1956-)，男，實驗師。研究方向：中藥生物化學(xué)研究。

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李 欣，講師，E-mail:xinxin2011@sina.com。

2013-01-28)