孟繁宇，薛 菲，施 慧

（1.吉林省人民醫(yī)院 心血管內(nèi)科，吉林 長(zhǎng)春130021；2.吉林省人民醫(yī)院 神經(jīng)內(nèi)科；3.吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院）

納豆激酶（natto kinase，NK）是一種枯草桿菌蛋白激酶，是在納豆發(fā)酵過(guò)程中由納豆枯草桿菌產(chǎn)生的一種絲氨酸蛋白酶。多項(xiàng)研究證實(shí)［1－4］，NK具有降低血脂、溶解血栓、改善血液循環(huán)、軟化和增加血管彈性等作用。本文通過(guò)觀察不同劑量NK對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化模型大鼠血脂水平、血液流變學(xué)的影響，評(píng)價(jià)其抗動(dòng)脈粥樣硬化作用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

Wistar大鼠，體重180－200g，雌雄兼用，由白求恩醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心供給，合格證號(hào)：2010003。

1.2 藥品與試劑

1.2.1納豆激酶 樣品活力350mg＝5 000FU，浙江中奇生物藥業(yè)股份有限公司。

1.2.2 辛伐他汀片（舒降之）生產(chǎn)企業(yè)：杭州默沙東公司，批號(hào)：20120616。

1.3 主要儀器

1.3.1 LBY－N6A旋轉(zhuǎn)式血液黏度計(jì) 北京普利生醫(yī)療器械廠。

1.3.2 sDz一I型細(xì)胞電泳自動(dòng)計(jì)時(shí)器 無(wú)錫電子儀器二廠。

1.3.3 7020型全自動(dòng)生化分析儀 日本日立公司。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 動(dòng)物分組及模型建立 取 Wistar大鼠50只，隨機(jī)分為5組：正常組10只，喂以基礎(chǔ)飼料。模型組、辛伐他汀組、納豆激酶低、高劑量組各10只，按文獻(xiàn)［5］方法建立動(dòng)脈粥樣硬化模型，每只大鼠每天給予腹腔注射VD3 25萬(wàn)U／kg連續(xù)3天，給予高脂飼料灌胃（高脂飼料配方：基礎(chǔ)飼料，3.5%膽固醇，10%豬油，0.2%丙基硫氧嘧啶、0.5%膽酸鈉，5%白糖）。喂養(yǎng)4周。所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均為單籠飼養(yǎng)，自由飲水。

1.4.2 給藥 正常對(duì)照組、模型組，每天等體積蒸餾水灌胃1次；辛伐他汀組（4mg／kg體重），納豆激酶低、高組（56FU、280FU／kg體重），每天灌胃給藥1次，連續(xù)4周。

1.4.3 觀測(cè)指標(biāo) 第28d給藥后，禁食不禁水，次日清晨以戊巴比妥鈉30mg／kg腹腔注射麻醉，腹主動(dòng)脈取血，取血5ml，分離血清，用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血脂各項(xiàng)指標(biāo)［6］，包括TG、TC、LDL－C、HDL－C。以LBY－N6A旋轉(zhuǎn)式血液黏度計(jì)，分別測(cè)定全血低切、中切及高切黏度，血漿黏度；通過(guò)sDz－I型細(xì)胞電泳自動(dòng)計(jì)時(shí)器測(cè)定紅細(xì)胞電泳時(shí)間（RCET）；測(cè)血沉（ESR）；測(cè)定血漿纖維蛋白原濃度（Fib）；測(cè)定紅細(xì)胞壓積（Hct）。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

納豆激酶對(duì)動(dòng)脈硬化模型大鼠血脂、血液流變學(xué)，F(xiàn)ib、ESR、Hct及紅細(xì)胞電泳時(shí)間的影響，見(jiàn)表1－3。

表1 納豆激酶對(duì)動(dòng)脈硬化模型大鼠血脂的影響（n＝10，±s）

表1 納豆激酶對(duì)動(dòng)脈硬化模型大鼠血脂的影響（n＝10，±s）

與正常對(duì)照組比較 （1）P＜0.05，（2）P＜0.01；與模型組比較（3）P ＜0.05，（4）P ＜0.01

1.52±0.38 0.63±0.20 0.60±0.18 1.48±0.55模型組 － 2.86±0.69（2） 1.85±0.22（2） 1.05±0.43（2） 0.93±0.28（1）辛伐他汀組 4mg／kg 1.92±0.30（4） 1.39±0.35（3） 0.61±0.20（4） 1.31±0.36（3）納豆激酶組 56FU／kg 2.60±0.37 1.66±0.39 0.82±0.34（3） 0.98±0.41 280FU／kg 2.21±0.29（3） 1.43±0.36（3） 0.77±0.27（3） 1.28±0.30（3）TC TG LDL－C HDL－C正常組組別 劑量－

表2 納豆激酶對(duì)動(dòng)脈硬化模型大鼠全血黏度、血漿黏度的影響（n＝10，±s）

表2 納豆激酶對(duì)動(dòng)脈硬化模型大鼠全血黏度、血漿黏度的影響（n＝10，±s）

與正常對(duì)照組比較 （1）P＜0.05，（2）P＜0.01；與模型組比較（3）P ＜0.05，（4）P ＜0.01

組別 劑量 全血黏度 （mPa／s）10／s 80／s 160／s血漿粘度（mpa／s）120／s－10.41±2.23 5.67±1.31 2.89±0.54 1.54±0.31模型組 － 14.79±3.21（2） 8.22±2.01（2） 4.12±0.78（2） 2.21±0.49（1）辛伐他汀組 4mg／kg 12.14±2.21（3） 6.11±2.41（3） 3.51±0.79（3） 1.54±0.42（3）納豆激酶組 56FU／kg 12.02±2.56（3） 6.12±1.51（3） 3.22±0.82（3） 1.61±0.51（3）280FU／kg 10.78±2.12（4） 5.92±1.98（3） 3.01±0.39（4） 1.48±0.62（3）正常組 －

表3 納豆激酶對(duì)動(dòng)脈硬化模型大鼠纖維蛋白原濃度、血沉、紅細(xì)胞壓積、紅細(xì)胞電泳時(shí)間的影響（n＝10，±s）

表3 納豆激酶對(duì)動(dòng)脈硬化模型大鼠纖維蛋白原濃度、血沉、紅細(xì)胞壓積、紅細(xì)胞電泳時(shí)間的影響（n＝10，±s）

與正常對(duì)照組比較（1）P＜0.05，（3）P＜0.01；與模型組比較（3）P ＜0.05，（4）P ＜0.01

組別 劑量 Fib（%） ESR（%） Hct（%） RCET（s）1.49±0.35 3.21±0.59 40.52±5.19 18.32±3.33模型組 － 2.12±0.60（2） 4.60±1.06（2） 49.42±6.55（2） 23.87±5.02（1）辛伐他汀組 4mg／kg 1.89±0.32（3） 3.62±0.31（3） 42.01±6.24（3） 20.10±5.61（3）納豆激酶組 56FU／kg 1.68±0.34（3） 3.52±0.54（3） 43.02±6.12（3） 19.68±6.01（3）280FU／kg 1.62±0.30（3） 3.32±0.60（4） 41.04±4.48（4） 19.44±6.21（3）正常組 －

3 討論

隨著生活水平逐年增高，我國(guó)人群中高脂血癥患病率明顯升高。血脂增高導(dǎo)致血液黏度增高，血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷，泡沫細(xì)胞形成，平滑肌細(xì)胞由中層向內(nèi)膜移行、增殖，導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成。同時(shí)研究指出［7］高脂血癥患者血液中由于在紅細(xì)胞膜中附著的膽固醇、三酰甘油的含量較正常增加，從而使紅細(xì)胞硬化趨勢(shì)增加，紅細(xì)胞的變形能力受到了影響，血流的黏稠性因緩慢的紅細(xì)胞帶氧及釋放速度而增加，細(xì)胞膜流動(dòng)性因而下降，血液流變學(xué)指標(biāo)出現(xiàn)明顯異常。同時(shí)血漿纖維蛋白原濃度增高，易形成血栓。

納豆激酶最早由日本學(xué)者從納豆中分離出的絲氨酸蛋白酶，是目前發(fā)現(xiàn)口服纖溶作用最強(qiáng)的纖溶蛋白酶。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果從不同角度證明，納豆激酶可使動(dòng)脈粥樣硬化大鼠的HDL水平升高，TG，TC，LDL水平明顯降低。使血漿纖維蛋白原濃度降低，從而使動(dòng)脈粥樣硬化大鼠的血液流變學(xué)指標(biāo)得以改善。提示，納豆激酶可改善血黏度及血液流變性、降低血脂、防止動(dòng)脈管壁及細(xì)胞內(nèi)的脂質(zhì)沉積，阻斷動(dòng)脈粥樣硬化及血栓形成的中心環(huán)節(jié)，預(yù)防心腦血管疾病的發(fā)生和發(fā)展。

［1］袁淑云.納豆激酶粗提液對(duì)小鼠實(shí)驗(yàn)性高脂血癥的降脂作用［J］.現(xiàn)代醫(yī)院，2005，5（5）：10.

［2］王俊菊，李培鋒，關(guān) 紅.納豆激酶抗凝血作用的研究［J］.中國(guó)生化藥物雜志，2004，25（5）：276－278.

［3］LIU JX，SHANG XH，F(xiàn)U JH，et al.Effects of recombinant staphylokinase on coronary thrombosis in Chinese experimental miniature swine［J］.Acta Pharmacol Sin，2002，23（6）：509.

［4］段智變，江漢湖，張書(shū)霞等.納豆激酶粗制液對(duì)家兔溶血栓作用及其機(jī)制研究［J］.營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào)，2003.25（1）：46.

［5］趙 娟，李相軍，孫 波.維生素D3聯(lián)合高脂飼料建立大鼠動(dòng)脈粥樣硬化模型［J］.實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2009，25（21）：3569.

［6］關(guān) 輝，張煒平.復(fù)方丹參滴丸對(duì)實(shí)驗(yàn)性高血脂大鼠血清中TC、TG、LDL的影響［J］.醫(yī)學(xué)論壇，2007，2：6.

［7］Li M，Zhang Z，Donald L，et al.Curcumin，a dietary tomponent.has anticancer，chemosensitization，and radiosensitization effects by downregnlating the MDM2oncogene through the P13K／mTOR／ETS2pathway［J］.Cancer Res，2007.67（5）：1988.