狂犬病（Rabies）是由狂犬病病毒（Rabies virus，RV）引起的一種人獸共患急性接觸性傳染病。盡管可通過(guò)接種疫苗來(lái)預(yù)防，每年全世界仍有約55000 人死于該病。我國(guó)近五年每年死亡3000 人左右，僅次于印度，并且主要由犬引發(fā)，因此預(yù)防狂犬病的主要措施是對(duì)犬進(jìn)行狂犬病疫苗的免疫接種。WHO狂犬病專(zhuān)家建議使用狂犬病滅活疫苗代替弱毒疫苗以便最終消滅人和動(dòng)物狂犬病。長(zhǎng)期以來(lái)，國(guó)產(chǎn)動(dòng)物用狂犬病疫苗僅有活疫苗，滅活疫苗則依賴(lài)進(jìn)口?？上驳氖?，近幾年國(guó)內(nèi)已研制出多種狂犬病滅活疫苗并陸續(xù)上市。本文就我國(guó)當(dāng)前使用的動(dòng)物用狂犬病疫苗種類(lèi)及疫苗的質(zhì)量管理作以下綜述，期望對(duì)我國(guó)犬、貓等動(dòng)物接種狂犬病疫苗提供參考。

一、國(guó)產(chǎn)動(dòng)物用狂犬病疫苗種類(lèi)及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

我國(guó)動(dòng)物狂犬病疫苗的生產(chǎn)經(jīng)歷了解放初期的羊腦組織滅活疫苗，上世紀(jì)80年代的細(xì)胞培養(yǎng)活疫苗，到近幾年的細(xì)胞培養(yǎng)滅活疫苗，產(chǎn)品的質(zhì)量有了很大的提高。由于羊腦組織滅活疫苗含有腦組織的鞘磷脂，動(dòng)物接種后易引起神經(jīng)副反應(yīng)，并殘留有活病毒，使用不安全，1980年以后停止使用。目前應(yīng)用的國(guó)產(chǎn)動(dòng)物用狂犬病疫苗有弱毒活疫苗和滅活疫苗兩種?；钜呙绨ㄈ袢。≧b/E3 株）、犬瘟熱、犬副流感、犬腺病毒病與細(xì)小病毒感染癥五聯(lián)活疫苗（以下簡(jiǎn)稱(chēng)五聯(lián)苗）和狂犬病（Flury LEP 株）活疫苗。

（一）五聯(lián)苗

五聯(lián)苗于2000年獲得農(nóng)業(yè)部頒發(fā)的新獸藥證書(shū)和獸藥生產(chǎn)許可。疫苗含有狂犬病病毒Rb/E3 株在Vero 細(xì)胞的培養(yǎng)液，半成品病毒含量≥105.0LD50/0.03mL。成品檢驗(yàn)中的物理性狀、無(wú)菌檢驗(yàn)、支原體檢驗(yàn)、外源病毒檢驗(yàn)均按《中國(guó)獸藥典》進(jìn)行。

安全檢驗(yàn)和效力檢驗(yàn)是疫苗成品檢驗(yàn)的主要指標(biāo)。五聯(lián)苗的安全檢驗(yàn)：是將疫苗用注射用水稀釋至原量，取對(duì)5 種病毒中和抗體效價(jià)均＜2 的2～3月齡健康易感犬5 頭，各肌肉注射疫苗10 頭份，隔離飼養(yǎng)21日，精神、食欲、體溫與糞便均應(yīng)正常。效力檢驗(yàn)：是將疫苗用注射用水稀釋至原量，取對(duì)5 種病毒中和抗體效價(jià)均＜2 的2～3月齡健康易感犬5 頭，各肌肉注射疫苗1頭份，隔離飼養(yǎng)21日，均應(yīng)正常；并測(cè)定中和抗體效價(jià)，抗狂犬病病毒中和抗體效價(jià)應(yīng)≥10(小白鼠法)為合格。

疫苗在-20℃以下保存，有效期為1年；2～8℃，有效期為9個(gè)月。使用時(shí)，用注射用水將疫苗稀釋成2mL，斷奶幼犬以21日的間隔，連續(xù)免疫3 次，每次2mL。成犬每年免疫2 次，間隔21日，每次2mL。

（二）Flury LEP 株活疫苗

我國(guó)農(nóng)業(yè)部1979年頒布了Flury LEP 株活疫苗試行規(guī)程，2006年重新修訂規(guī)程。該苗采用Flury LEP 株在BHK21 細(xì)胞培養(yǎng)，半成品病毒含量≥104.0LD50/0.03mL。成品檢驗(yàn)中的物理性狀、無(wú)菌檢驗(yàn)、支原體檢驗(yàn)、外源病毒檢驗(yàn)均按《中國(guó)獸藥典》進(jìn)行。

安全檢驗(yàn)：1.將疫苗用注射用水（或pH 值7.2～7.4 的磷酸鹽緩沖鹽水）溶解后，肌肉注射成年家兔4 只，每只2.5 頭份，觀察21～28日，應(yīng)不出現(xiàn)任何狂犬病癥狀（興奮或抑郁型腦炎癥狀）。試驗(yàn)兔若在觀察期內(nèi)，出現(xiàn)死亡但無(wú)神經(jīng)癥狀，應(yīng)剖取腦組織，用注射用水制成10-3乳劑，離心后取上清，腦內(nèi)注射11～13g小鼠5只，每只0.03mL。觀察21日，如全部健活，疫苗判為合格。若有小鼠死亡，可重檢1次。2.選用至少3月齡犬（無(wú)狂犬病抗體）2 只，每只肌肉注射疫苗10 頭份，觀察21～28日，應(yīng)健活。

效力檢驗(yàn)：將疫苗用pH 值7.2的磷酸鹽緩沖鹽水恢復(fù)為每毫升含5 頭份，再作10 倍系列稀釋。取10-3、10-4、10-53個(gè)稀釋度，分別腦內(nèi)接種11～13g 小鼠4 只，每只0.03mL，觀察至14日，計(jì)算LD50，應(yīng)≥104.0LD50/0.03mL。

疫苗在-15℃以下保存，有效期為12個(gè)月；2～8℃保存的有效期為6個(gè)月；25℃保存應(yīng)不超過(guò)7日。疫苗規(guī)格有5 頭份/瓶和10 頭份/瓶。使用時(shí)，用注射用水或pH 值7.2～7.4的磷酸鹽緩沖鹽水按瓶簽注明頭份稀釋疫苗（1mL 含1頭份）。2月齡以上的犬，每只肌肉注射1mL。

（三）滅活疫苗

自2010年開(kāi)始，國(guó)產(chǎn)狂犬病滅活疫苗陸續(xù)獲得新獸藥證書(shū)和獸藥生產(chǎn)許可，目前已有4 家企業(yè)的產(chǎn)品上市銷(xiāo)售。國(guó)產(chǎn)狂犬病滅活疫苗生產(chǎn)用毒株主要有Flury LEP 株、CVS-11株、PV2061株、SAD 株和CTN-1株等，細(xì)胞系主要有BHK-21、Vero 和BSR，采用β-丙內(nèi)酯（BPL）作為滅活劑，多數(shù)疫苗采用生物反應(yīng)器懸浮培養(yǎng)并經(jīng)純化處理。狂犬病滅活疫苗的安全檢驗(yàn)通常對(duì)犬、小鼠或豚鼠等進(jìn)行注射，觀察是否有局部或全身等不良反應(yīng)或狂犬病癥狀。采用國(guó)際上通用的NIH（National Institutes of Health）法進(jìn)行效力檢驗(yàn)。通過(guò)計(jì)算待檢疫苗和參考疫苗的半數(shù)保護(hù)量（PD50），并以WHO 或OIE 參考疫苗的抗原有效含量來(lái)標(biāo)化，以國(guó)際單位（IU）表示。國(guó)產(chǎn)狂犬病滅活疫苗成品效力標(biāo)準(zhǔn)通常≥2.0IU/劑量，個(gè)別產(chǎn)品高于2.5 IU/劑量，均高于WHO 關(guān)于獸用狂犬病疫苗≥1.0IU/劑量的標(biāo)準(zhǔn)。

二、國(guó)產(chǎn)動(dòng)物用狂犬病疫苗的監(jiān)督管理

我國(guó)農(nóng)業(yè)部依照《獸藥管理?xiàng)l例》、《獸用生物制品管理辦法》、《中國(guó)獸藥典》、《獸用生物制品制造與檢驗(yàn)規(guī)程》及《獸用生物制品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》等對(duì)包括動(dòng)物用狂犬病疫苗在內(nèi)的獸用生物制品進(jìn)行嚴(yán)格管理。種毒和細(xì)胞均由中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所（以下簡(jiǎn)稱(chēng)“中監(jiān)所”）統(tǒng)一編號(hào)、鑒定、保管和分發(fā)，全部符合生產(chǎn)要求，并實(shí)行種子批制度。

所有狂犬病疫苗生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)全部符合GMP要求，生產(chǎn)的每批狂犬病疫苗實(shí)行批簽發(fā)管理。每批產(chǎn)品的樣品和檢驗(yàn)報(bào)告報(bào)中監(jiān)所，產(chǎn)品的樣品可以每15日集中寄送1次。中監(jiān)所在接到生產(chǎn)企業(yè)報(bào)送的樣品和質(zhì)量檢驗(yàn)報(bào)告后7個(gè)工作日內(nèi)，做出是否可以銷(xiāo)售的判定，并通知生產(chǎn)企業(yè)。

對(duì)于中監(jiān)所認(rèn)為有必要進(jìn)行復(fù)核檢驗(yàn)的，可以在中監(jiān)所或其指定單位、場(chǎng)所進(jìn)行復(fù)核檢驗(yàn)。復(fù)核檢驗(yàn)必須在中監(jiān)所接到企業(yè)報(bào)送的樣品和質(zhì)量檢驗(yàn)報(bào)告2個(gè)月內(nèi)完成。復(fù)核檢驗(yàn)結(jié)束后，由中監(jiān)所作出判定，并通知生產(chǎn)企業(yè)，當(dāng)對(duì)產(chǎn)品作出不合格判定時(shí)，應(yīng)當(dāng)同時(shí)報(bào)告農(nóng)業(yè)部。生產(chǎn)企業(yè)取得中監(jiān)所的“允許銷(xiāo)售通知書(shū)”后，方可進(jìn)行銷(xiāo)售。另外，中監(jiān)所定期派專(zhuān)業(yè)技術(shù)人員進(jìn)行駐廠監(jiān)督以確保疫苗質(zhì)量，并在中國(guó)獸藥信息網(wǎng)上對(duì)疫苗質(zhì)量管理的結(jié)果予以發(fā)布。所有的狂犬病疫苗需達(dá)到《中國(guó)獸藥典》和《獸用生物制品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》的要求。

動(dòng)物狂犬病疫苗批簽發(fā)程序通常包括：批簽發(fā)申請(qǐng)、抽樣與樣品管理、批簽發(fā)的審核與簽發(fā)、批簽發(fā)的復(fù)審、批簽發(fā)申報(bào)資料的核查等方面。中監(jiān)所批簽發(fā)審核流程具體包括：企業(yè)申報(bào)；業(yè)務(wù)管理處接收；相關(guān)檢測(cè)室提出技術(shù)審核意見(jiàn)；業(yè)務(wù)管理處綜合審核意見(jiàn)并簽發(fā)；通知企業(yè)結(jié)果。

2012年，我國(guó)4 家動(dòng)物用狂犬病滅活疫苗生產(chǎn)企業(yè)共批簽發(fā)17 批102 萬(wàn)頭份，8 家活疫苗企業(yè)共批簽發(fā)95 批3451萬(wàn)頭份。

三、進(jìn)口狂犬病疫苗的監(jiān)督管理

多年來(lái)，富道、英特威、維克、梅里亞以及羅曼等公司壟斷了我國(guó)獸用狂犬病滅活疫苗市場(chǎng)。這些產(chǎn)品均使用BPL 作為滅活劑，以氫氧化鋁膠為佐劑制成。進(jìn)口狂犬病疫苗的生產(chǎn)按照《美國(guó)藥典》、《歐洲藥典》和《英國(guó)藥典》等標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行，要求疫苗免疫期至少1年。在2～8℃保存，有效期為24～48個(gè)月。

安全檢驗(yàn)：取8～14 周齡健康易感比格犬2 頭，各皮下或肌肉注射疫苗2 頭份，觀察21日，應(yīng)全部健活。效力檢驗(yàn)：按照NIH（美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生院）法進(jìn)行，每頭份至少≥1.0IU。

我國(guó)對(duì)于進(jìn)口獸用生物制品按照《進(jìn)口獸藥管理辦法》進(jìn)行管理，實(shí)行注冊(cè)管理制度。凡國(guó)外企業(yè)生產(chǎn)的獸用狂犬病疫苗首次對(duì)華銷(xiāo)售的，必須申請(qǐng)注冊(cè)。農(nóng)業(yè)部對(duì)申請(qǐng)企業(yè)提供的資料進(jìn)行審查，主要包括制品的原材料（菌毒種來(lái)源、代次和制備方法）標(biāo)準(zhǔn)；細(xì)胞種來(lái)源、代次和傳代方法、鑒定方法和標(biāo)準(zhǔn)；滅活劑、佐劑的種類(lèi)和標(biāo)準(zhǔn)等。對(duì)符合規(guī)定的發(fā)給“進(jìn)口獸藥注冊(cè)申請(qǐng)受理通知書(shū)”。在企業(yè)接到該通知書(shū)后，提供疫苗在我國(guó)境內(nèi)進(jìn)行質(zhì)量復(fù)核以及安全性等試驗(yàn)。各項(xiàng)檢驗(yàn)合格后，頒發(fā)《進(jìn)口生物制品登記許可證》。進(jìn)口獸藥注冊(cè)證書(shū)的有效期為5年。到期后如繼續(xù)銷(xiāo)售，需辦理進(jìn)口獸藥再注冊(cè)申請(qǐng)。未經(jīng)注冊(cè)的狂犬病疫苗，不準(zhǔn)在我國(guó)境內(nèi)進(jìn)行銷(xiāo)售、分裝、使用和進(jìn)行商業(yè)性宣傳。對(duì)于進(jìn)口狂犬病疫苗按照農(nóng)業(yè)部發(fā)布的《進(jìn)口生物制品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》進(jìn)行質(zhì)量監(jiān)督。同時(shí)依照《獸藥管理?xiàng)l例》第十九條的規(guī)定進(jìn)行審查核對(duì)和抽查檢驗(yàn)。

我國(guó)對(duì)于進(jìn)口狂犬病疫苗同樣實(shí)行批簽發(fā)管理。2012年，5 家國(guó)外企業(yè)的狂犬病疫苗共批簽發(fā)22批348 萬(wàn)頭份。

目前狂犬病滅活疫苗質(zhì)量管理中存在一個(gè)問(wèn)題，就是關(guān)于效力檢驗(yàn)的方法（NIH 法），這個(gè)方法是WHO 認(rèn)可的用于狂犬病滅活疫苗效果評(píng)價(jià)的金標(biāo)準(zhǔn)方法。由于受小鼠健康狀況、實(shí)驗(yàn)操作人員技術(shù)水平等因素影響，其實(shí)驗(yàn)結(jié)果的變異系數(shù)較大（25%～400%之間），而且實(shí)驗(yàn)需要的小鼠數(shù)量較多，實(shí)驗(yàn)周期長(zhǎng)（28 天），給疫苗批簽發(fā)工作帶來(lái)很大障礙，這也是國(guó)內(nèi)外狂犬病滅活疫苗生產(chǎn)普遍面臨的問(wèn)題，因此加快對(duì)NIH 替代方法的研究已成為趨勢(shì)。

接種安全、有效的狂犬病疫苗仍是控制狂犬病的主要措施。目前我國(guó)養(yǎng)犬?dāng)?shù)量已遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)1億。世界衛(wèi)生組織倡議，到2020年在全球消滅狂犬病。為實(shí)現(xiàn)這一目標(biāo)，需要努力提高我國(guó)動(dòng)物狂犬病疫苗的免疫覆蓋率，才能從源頭上控制我國(guó)狂犬病的流行。因此還需進(jìn)一步提高動(dòng)物用狂犬病疫苗生產(chǎn)的數(shù)量，加強(qiáng)疫苗質(zhì)量管理，滿足我國(guó)對(duì)犬、貓等動(dòng)物強(qiáng)制免疫的需要，以盡早控制我國(guó)狂犬病的流行。