葉挺梅李慶利王英秀王智威盧舜飛

1.麗水學(xué)院，浙江 麗水 323000；2.浙江省麗水市安福生物科技有限公司，浙江 麗水 323000

剎毒草合劑中黃芪甲苷的含量測(cè)定研究

葉挺梅1*李慶利2王英秀2王智威2盧舜飛1

1.麗水學(xué)院，浙江 麗水 323000；2.浙江省麗水市安福生物科技有限公司，浙江 麗水 323000

目的：建立測(cè)定剎毒草合劑中黃芪甲苷的高效液相色譜方法。方法：采用Diamonsil（鉆石）C18（250×4.6mm，5（m）色譜柱；流動(dòng)相為乙腈－水（33∶67）；流速：1.0ml／min；柱溫：35℃；漂移管溫度為105℃，氣體流速為2.7L／min。結(jié)果：黃芪甲苷在1.04～5.2μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，平均回收率為101.4%，RSD為1.24%（n＝6）。結(jié)論：該方法操作快速，結(jié)果準(zhǔn)確，可作為剎毒草合劑的質(zhì)量控制方法之一。

剎毒草合劑；黃芪甲苷；高效液相色譜；含量測(cè)定

剎毒草合劑［1］具有清熱解毒、養(yǎng)氣補(bǔ)血、增強(qiáng)免疫功能等功效，能提高HIV感染者機(jī)體免疫功能和改善臨床癥狀的作用。目前，還沒(méi)有該合劑有效成分的含量測(cè)定研究報(bào)道。本文研究了剎毒草合劑中黃芪甲苷的含量方法，有利于保證剎毒草合劑臨床應(yīng)用的有效性。

1 儀器與試劑

1.1 儀器 美國(guó)Agilent1200高效液相色譜儀（G1311A四元泵，G1313A自動(dòng)進(jìn)樣器，G1316A柱溫箱，Agilent化學(xué)工作站）；美國(guó)Alltech 2000蒸發(fā)光散射檢測(cè)器；天津市分析儀器廠XWK－III無(wú)油無(wú)音空氣泵。

1.2 試劑 乙腈（色譜純，Dima公司），甲醇（色譜純，Dima公司），正丁醇 （分析純，北京試劑公司），水為超純水。對(duì)照品：黃芪甲苷 （C41H68O14）由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，（批號(hào)110781－200613）樣品來(lái)源：由麗水市安福生物科技有限公司提供，批號(hào)090611；090612；090613）

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 色譜條件［2］Diamonsil（鉆石）C18（250×4.6mm，5（m）色譜柱；流動(dòng)相：乙腈－水 （33∶67）；流速：1.0m l／min；柱溫：35℃；漂移管溫度為105℃，氣體流速為2.7L／min；理論板數(shù)按黃芪甲苷計(jì)應(yīng)不低于7000。

2.2 供試品的制備方法 精密量取剎毒草口服液 （批號(hào)：090611）20m l*3份，用水飽和正丁醇振搖提取4次，每次50m l，合并正丁醇液，用氨試液洗滌2次，每次40ml，棄去氨試液，取正丁醇層80℃水浴蒸干。以甲醇復(fù)溶、稀釋至5ml量瓶中，過(guò)0.45um微孔濾膜，即得。

2.3 線性關(guān)系考察 取干燥至恒重的黃芪甲苷對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加甲醇制成每1m l含0.208mg的溶液。精密吸取5、10、15、20、25μl，注入液相色譜儀中，測(cè)定峰面積，以對(duì)照品進(jìn)樣量的自然對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，以對(duì)照品峰面積的自然對(duì)數(shù)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。其線性范圍為1.04～5.2μg，回歸方程為：Y＝1.507X＋6.40，r＝0.9998，說(shuō)明該化合物在該范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取同一供試品溶液（批號(hào)090611）20μl，分別于制備后0、1、4、6、24小時(shí)依次進(jìn)樣，測(cè)得黃芪甲苷峰面積對(duì)數(shù)值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD＝0.4576%。試驗(yàn)結(jié)果表明，供試品溶液在24小時(shí)內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取同一供試品溶液 （批號(hào)090611）20μl，在所確定的HPLC條件下，重復(fù)進(jìn)樣6次，求得黃芪甲苷峰面積對(duì)數(shù)值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差 RSD＝0.6113%，說(shuō)明精密度良好。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批樣品（批號(hào)090611）按2.2項(xiàng)下方法制成6份供試品溶液，在所確定的HPLC條件下進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD＝0.7696%，說(shuō)明方法重復(fù)性良好。

2.7 回收率試驗(yàn) 采用加樣回收法，精密量取已知含量同一批號(hào)（批號(hào)090613，含黃芪甲苷0.04995mg／ml）的樣品10 ml，分別精密加入黃芪甲苷對(duì)照品溶液0.52mg／ml各1ml，按供試品溶液的制備方法制備及上述色譜條件測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表1。

3 樣品測(cè)定結(jié)果

根據(jù)上文中確定的樣品制備方法和分析方法測(cè)定不同批次的剎毒草合劑中黃芪甲苷的含量，結(jié)果見(jiàn)表2。

表1 回收率試驗(yàn)

4 討論

黃芪甲苷具有免疫調(diào)節(jié)、對(duì)器官保護(hù)、強(qiáng)心、降糖、抗細(xì)胞凋亡、抗抗病毒等多種作用［3］，是剎毒草合劑中的重要有效成分之一，本文建立的剎毒草合劑中黃芪甲苷的HPLC測(cè)定方法具有重復(fù)性良好、可操作性強(qiáng)的特性，有利于保證剎毒草合劑的臨床應(yīng)用的有效性。

表2 樣品測(cè)定結(jié)果（n＝2）

［1］劉金英，洪學(xué)智，戴詩(shī)文.剎毒草口服液的藥理作用研究 ［J］.中國(guó)藥房，2008，（36）：2818－2819.

［2］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（2010年版一部）［S］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社：283－284.

［3］吳發(fā)寶，陳希元.黃芪藥理作用研究綜述［J］.中藥材，2004，27（3）：232－234.

Determ ination of Astragaloside in Shaducao M ixture by HPLC

Ye Tingmei1*，Li Qinli2，Wang Yingxiu2，Wang Zhiwei2，Lu Shunfei1
1.Lishui college，Lishui，323000；2 Lishui Company of Anfu Bio－technology，Lishui，323000

Objective：To establish an HPLCmethod for determination of Astragaloside in Shaducao Mixture.Method：The establish an HPLCmethod for determination of astragaloside in in Shaducao Mixture.Method：HPLC was carried out on the Diamonsil C18 column（250×4.6mm，5（m）with acetonitrile－water（33∶67）at35℃，the flow ratewas1.0ml／min；Drift tube temperature was 105℃，gas flow rate was 2.7L／min.Result：The calibration curveswas linear in the ranges of1.04～5.2μg.The average recovery was101.4%with RSD 1.24%（n＝6）.Conclusion：Themethod is rapid and simple，it can be used for quality control of Shaducao Mixture.

Shaducao Mixture；Astragaloside；HPLC；determination

R284.1

A

1007－8517（2013）11－0010－02

2013.04.19）

浙江省科技廳重大科技專(zhuān)項(xiàng)社會(huì)發(fā)展項(xiàng)目（2011C03002）。

葉挺梅，教授，從事中藥及民族藥研究；E－mail：ytmy＠eyou.com