楊強(qiáng)，李新華，張振，林子木

1(沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院，遼寧 沈陽(yáng)，110866)

2(遼寧醫(yī)學(xué)院食品科學(xué)與工程學(xué)院，遼寧 錦州，121002)

3 (遼寧省糧食科學(xué)研究所，遼寧 沈陽(yáng)，110032)

銀杏(Ginkgo bilobaL)又稱白果樹(shù)、公孫樹(shù)，屬銀杏科銀杏屬裸子植物，主產(chǎn)中國(guó)［1］。其葉、果和外種皮等皆具有藥用價(jià)值，被稱為“全身都是寶的活化石”［2］。銀杏種實(shí)的核俗稱白果，由于其營(yíng)養(yǎng)豐富，自古以來(lái)被當(dāng)作養(yǎng)生延年的上品。銀杏果多糖作為銀杏果中一種重要的活性成分，近年來(lái)人們研究發(fā)現(xiàn)它具有免疫調(diào)節(jié)、抗炎、抗衰老、抗腫瘤等多種功能，但關(guān)于銀杏果多糖降血脂的報(bào)道很少。目前，已證實(shí)有降血脂作用的多糖是黑木耳多糖、南瓜多糖、白首烏多糖等［3－5］。文中采用水沉醇沉法提取銀杏果多糖，根據(jù)衛(wèi)生部制定的功能性食品評(píng)價(jià)程序與評(píng)價(jià)檢驗(yàn)方法，通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)考察銀杏果多糖的降血脂功效，初步確定其生物活性，明確其應(yīng)用價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

昆明雄性小鼠60 只，體重18 ～22 g，遼寧長(zhǎng)生生物技術(shù)有限公司提供，動(dòng)物許可證號(hào):SCXK2010—0001。

1.2 材料與儀器

銀杏果(遼寧大連)，木瓜蛋白酶(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)，大孔樹(shù)脂脫色1 號(hào)(滄州寶恩吸附材料科技有限公司)，膽固醇(北京鼎國(guó)生物有限公司)，牛膽鹽(上?；瘜W(xué)試劑采購(gòu)供應(yīng)站)，總膽固醇(TC)試劑盒(北京北化康泰臨床試劑有限公司)，甘油三酯(TG)試劑盒(北京北化康泰臨床試劑有限公司)，低密度脂蛋白(LDL-C)試劑盒(長(zhǎng)春江力生物技術(shù)有限公司)，高密度脂蛋白(HDL-C)試劑盒(長(zhǎng)春江力生物技術(shù)有限公司)，脂必妥(成都地奧九泓制藥廠)。

電子天平(北京賽多利斯儀器有限公司)，HITACHI Himac CR21G 臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)(日本)，HH-6 數(shù)顯恒溫水浴鍋(國(guó)華電器有限公司)，TU-1810 型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限公司)。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 銀杏果精多糖的制備

銀杏果干燥粉碎后，置于三角錐形瓶中，加蒸餾水溶解，80℃恒溫水浴中浸提4 h，過(guò)濾后，殘?jiān)谙嗤瑮l件下重復(fù)1 次。合并過(guò)濾液，離心，取上清液。上清液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至總體積的1/8 后，加入4 倍體積的無(wú)水乙醇，靜置12h。離心，收集沉淀后，依次用無(wú)水乙醇、丙酮、乙醚洗滌，真空干燥制得銀杏果粗多糖。粗多糖加蒸餾水復(fù)溶后，加入木瓜蛋白酶進(jìn)行酶解，酶解1h，經(jīng)Sevag 試劑［V(三氯甲烷)∶V(正丁醇)=5∶1］除蛋白，反復(fù)進(jìn)行3 次，真空干燥得到脫蛋白后的多糖。脫蛋白的多糖采用大孔樹(shù)脂法進(jìn)行脫色后，真空干燥制得銀杏果精多糖。

1.3.2 日糧組成

基礎(chǔ)飼料有提供，符合國(guó)家動(dòng)物飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)，其主要營(yíng)養(yǎng)成分見(jiàn)表1。高脂飼料由實(shí)驗(yàn)室自行配制，配方見(jiàn)表2。

表1 基礎(chǔ)飼料的營(yíng)養(yǎng)成分(×10 －2) g/gTable 1 Composition of the basal diet

表2 高脂飼料的配方Table 2 High-fat feed formula

1.3.3 動(dòng)物分組及處理

雄性昆明小鼠60 只，隨機(jī)分為6 組:正常對(duì)照組、高脂對(duì)照組、銀杏果多糖低劑量組、銀杏果多糖中劑量組、銀杏果多糖高劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組(脂必妥)，每組10 只。適應(yīng)環(huán)境1 周后，除正常對(duì)照組(基礎(chǔ)飼料)外，其他各組均采用高脂飼料喂飼。以每天灌胃量為小鼠體重的2%將銀杏果精多糖和脂必妥配制成相應(yīng)濃度的溶液，各劑量組給予銀杏果精多糖的量是:低劑量組50 mL/(kg·d)體質(zhì)量;中劑量組100 mL/(kg·d)體質(zhì)量;高劑量組200 mL/(kg·d)體質(zhì)量。正常對(duì)照組和高脂飼料對(duì)照組給予相應(yīng)體積的蒸餾水，陽(yáng)性對(duì)照組給予100 mL/(kg·d)體質(zhì)量脂必妥，實(shí)驗(yàn)期為4 周。

1.3.4 血樣采集及預(yù)處理

喂養(yǎng)結(jié)束后，小鼠禁食不禁水12 h，摘取眼球取血，解剖內(nèi)臟，摘取內(nèi)臟并稱重。將血漿于4℃、3 000 r/min 離心10 min，制備血清。

1.3.5 測(cè)試指標(biāo)及方法

(1)體重:從實(shí)驗(yàn)第1 周開(kāi)始，每周測(cè)1 次小鼠體重。

(2)臟器指數(shù)的測(cè)定:小鼠取血前稱體重，眼球取血后解剖分離肝、腎、脾、心，用生理鹽水洗凈，濾紙吸干，稱重。按照表達(dá)式(1)計(jì)算:

(3)血清中TG、TC、HDL-C 和LDL-C 含量的測(cè)定:按試劑盒說(shuō)明書(shū)方法測(cè)定。

(4)動(dòng)脈硬化指數(shù)(AI)指數(shù)的測(cè)定:按照表達(dá)表達(dá)式(2)計(jì)算:

1.4 數(shù)據(jù)處理

采用單向方差分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，使用軟件為SPSS10.0(美國(guó)SPSS 公司)，數(shù)據(jù)之間的差別使用特奇公正顯著差異法進(jìn)行多重比較，顯著水平設(shè)為0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 銀杏果多糖對(duì)小鼠體重的影響

由表3 可知，隨著實(shí)驗(yàn)時(shí)間的延長(zhǎng)，各組小鼠生長(zhǎng)正常，體重均有所增加。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，各組小鼠體重的增加百分率分別為:正常對(duì)照組39.1%，高脂模型組53.5%，陽(yáng)性對(duì)照組44.2%，高劑量組42.3%，中劑量組46.5%，低劑量組51.5%。高脂模型組的小鼠體重較正常對(duì)照組有極顯著性差異(P＜0.01)，表明實(shí)驗(yàn)造模成功。陽(yáng)性對(duì)照組和銀杏果多糖高劑量組與高脂模型組比較，可顯著降低小鼠體重(P＜0.05)，而銀杏果多糖中、低劑量組雖然可以降低小鼠的體重，但差異不顯著(P＞0.05)。

表3 不同實(shí)驗(yàn)組小鼠的體重變化(ˉx±s，n=10)gTable 3 Different treatment group mice weight change g

2.2 銀杏果精多糖對(duì)小鼠臟器指數(shù)的影響

長(zhǎng)期的高脂飼料可導(dǎo)致受試小鼠臟器脂質(zhì)累積及病變等變化，可通過(guò)臟器指數(shù)反映［6］，由表4 可知，與正常對(duì)照組相比，高脂模型組肝指數(shù)與正常對(duì)照組比較極顯著增加(P＜0.01)，高劑量多糖組和陽(yáng)性對(duì)照組與高脂模型組比較，能顯著降低小鼠肝臟指數(shù)(P＜0.05)，多糖中低劑量組雖也能降低小鼠肝臟指數(shù)，但沒(méi)有顯著性差異(P＞0.05);高脂血癥還能影響小鼠腎的發(fā)育，與正常對(duì)照組比較，高脂模型組顯著降低小鼠的腎臟指數(shù)(P＜0.05)，陽(yáng)性對(duì)照組和多糖高、中、低劑量組能提高小鼠腎臟指數(shù)，但沒(méi)有顯著性差異(P＞0.05);多糖組和陽(yáng)性對(duì)照組對(duì)小鼠的脾臟和心臟的發(fā)育沒(méi)有太大影響。

表4 不同實(shí)驗(yàn)組小鼠的臟器指數(shù)變化(ˉx±s，n=10)g/100gTable 4 The variety of viscera weight mice in different groups g/100g

由此可見(jiàn)，高脂飼料可導(dǎo)致小鼠肝臟指數(shù)升高、腎臟指數(shù)降低，而在灌胃銀杏果精多糖后可以改善這種變化。

2.3 銀杏果多糖對(duì)小鼠血清TG、TC、HDL-C、LDL-C 含量的影響

由表5 可知，高脂模型組的TC、TG、和LDL-C 極顯著高于正常對(duì)照組(P＜0.01)，而HDL-C 也極顯著低于正常對(duì)照組(P＜0.01)，表明本實(shí)驗(yàn)高血脂模型造模成功，說(shuō)明高脂飼料能夠造成小鼠實(shí)驗(yàn)性高脂血癥;陽(yáng)性對(duì)照組和銀杏果精多糖高劑量組可顯著降低高脂血癥小鼠的TC、TG、和LDL-C(P＜0.05)，并可顯著升高HDL-C(P＜0.05)，且TC、TG 及LDL-C與正常對(duì)照組之間無(wú)顯著差異(P＞0.05)，HDL-C 雖顯著高于高脂模型組(P＜0.05)，但卻低于正常對(duì)照組。高劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組各項(xiàng)指標(biāo)之間均無(wú)顯著差異(P＞0.05);銀杏果精多糖中劑量組中，TG 和LDL-C 明顯低于高脂模型組(P＜0.01)，TC 和HDLC 影響不顯著(P＞0.05);低劑量組多糖對(duì)TC、LDLC 和HDL-C 影響不顯著(P＞0.05)，但可極顯著降低TG(P＜0.01)。

表5 不同實(shí)驗(yàn)組小鼠血清的TG、TC、HDL-C、LDL-C 的變化(ˉx±s，n=10) mmol/LTable 5 The variety of TG、TC、LDL-C、and HDL-C in blood serum in different groups (ˉx±s，n=10)mmol/L

由此可見(jiàn)，銀杏果精多糖具有降低血清總膽固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白膽固醇，提高高密度脂蛋白膽固醇的能力，因此具有降血脂功能，對(duì)高脂血癥的發(fā)生有一定的預(yù)防作用。

2.4 銀杏果精多糖對(duì)小鼠動(dòng)脈粥樣硬化指數(shù)(AI)的影響

動(dòng)脈粥樣硬化指數(shù)(atherogenic index，AI)，被認(rèn)為是能很好地反映動(dòng)脈粥樣硬化和冠心病危險(xiǎn)性的指標(biāo)。AI 值升高，意味著患動(dòng)脈硬化的危險(xiǎn)增加。由表6 可知，與正常對(duì)照組比較，高脂模型組極顯著的增高(P＜0.01)，表明小鼠已經(jīng)患有嚴(yán)重的高脂血癥。與模型組相比，陽(yáng)性對(duì)照組和多糖的各劑量組能顯著的降低AI 值(P＜0.05)，其中陽(yáng)性對(duì)照組和多糖高劑量組接近正常對(duì)照組水平(P＞0.05)，而多糖中、低劑量組雖能降低AI 值(P＜0.05)，但與正常對(duì)照組還存在顯著差異(P＜0.05)。

表6 不同實(shí)驗(yàn)組小鼠血清AI 的變化(ˉx±s，n=10)Table 6 The variety of AI in blood serum in different groups(ˉx±s，n=10)

由此可見(jiàn)，銀杏果精多糖能顯著降低因長(zhǎng)期食用高脂食物而導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化指數(shù)升高的危害，對(duì)其高血脂癥有一定的治療作用。

3 討論

外源性膽固醇大量攝入，能抑制肝臟脂肪酸β-氧化活性和TG 向血液中分泌，使脂質(zhì)在肝臟中積累，形成脂肪肝［7］。需要說(shuō)明的是，目前在研究活性物質(zhì)降血脂的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｊ缴贤ǔＳ? 種方式，一是治療模式，即先形成高脂模型動(dòng)物，在給予測(cè)試目標(biāo)物，觀察實(shí)驗(yàn)動(dòng)物血清中血脂的變化;另一種預(yù)防模式，即在給予動(dòng)物高脂飼料的同時(shí)給予目標(biāo)測(cè)試物，觀察實(shí)驗(yàn)動(dòng)物血清中血脂的變化。本實(shí)驗(yàn)采用的是預(yù)防模式，而銀杏果多糖降血脂功能的的治療模式有待進(jìn)一步研究。

動(dòng)脈粥樣硬化是多危險(xiǎn)因素所致的慢性疾病，其中血脂水平升高和高膽固醇血癥己經(jīng)被確認(rèn)為動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生和發(fā)展的重要因素，降低血脂尤其是膽固醇水平可減少動(dòng)脈粥樣硬化危險(xiǎn)性［8］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，灌胃各劑量組銀杏果多糖均可使高脂飲食小鼠的AI 有不同程度的降低，其中銀杏果多糖高劑量組AI 指數(shù)和陽(yáng)性對(duì)照組(脂必妥)AI 指數(shù)接近，這在某種程度上預(yù)示著銀杏果多糖可以替代降血脂藥物脂必妥，為降血脂新藥的研發(fā)提供了新材料。

4 結(jié)論

(1)銀杏果精多糖能顯著降低經(jīng)高脂飼料喂養(yǎng)后小鼠的體重，且多糖高劑量組與正常對(duì)照組無(wú)差異;銀杏果精多糖對(duì)小鼠心、脾指數(shù)影響不大，對(duì)肝、腎指數(shù)影響較大，高脂飼料可導(dǎo)致肝指數(shù)升高，腎指數(shù)下降，而銀杏果精多糖可以改善這種變化。

(2)采用高脂飼料配方喂食小鼠來(lái)誘導(dǎo)其高脂血癥，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，銀杏果精多糖能顯著降低小鼠的TC、TG 和LDL-C，升高HDL-C，且高劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組各項(xiàng)指標(biāo)之間均無(wú)明顯差異，說(shuō)明高劑量的銀杏果精多糖具有降血脂功能，對(duì)高脂血癥的發(fā)生有一定的預(yù)防作用。

(3)銀杏果精多糖能夠顯著降低動(dòng)脈粥樣硬化指數(shù)(AI)，說(shuō)明其對(duì)冠心病和動(dòng)脈粥樣硬化有一定的預(yù)防作用。

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