張善忠，張玉貴 (四川省水產(chǎn)學(xué)校，四川 成都 611730)

李 成 (成都正大有限公司，四川 成都 611730)

不同發(fā)育階段多子小瓜蟲對幾種藥物的敏感性

張善忠，張玉貴 (四川省水產(chǎn)學(xué)校，四川 成都 611730)

李 成 (成都正大有限公司，四川 成都 611730)

分別采用福爾馬林(100、10mg/L)、高錳酸鉀(20、2mg/L)、硫酸銅(7.0、0.7mg/L)和辣椒煎水(10、1mg/L)對患病建鯉魚種魚體上不同發(fā)育階段(營養(yǎng)體期、胞囊期和幼蟲期)的多子小瓜蟲(Ichthyopthiriusmultifillis)進(jìn)行浸洗或遍灑處理，探討了不同發(fā)育階段的多子小瓜蟲對幾種藥物的敏感性。結(jié)果表明：胞囊期的小瓜蟲對幾種藥物都不敏感；自由活動期的小瓜蟲幼蟲對幾種藥物都敏感；營養(yǎng)體期的小瓜蟲只對福爾馬林和辣椒煎水2種藥物敏感，對高錳酸鉀不敏感，但也未加重病魚病情，而用硫酸銅處理不但沒有起到治療的作用，反使病魚病情加重。幾種藥物的處理效果比較，福爾馬林不論是浸洗還是遍灑，其處理效果都最好，其次是辣椒煎水浸洗，硫酸銅處理效果最差。多子小瓜蟲的藥物敏感期為幼蟲期在水體中獨立游泳并尋找宿主的階段，此階段即為治療多子小瓜蟲病的最佳時間。在防治多子小瓜蟲的過程中，應(yīng)在第1次用藥2d后到第4天時再重復(fù)用藥1次，以達(dá)到最佳防治效果。

多子小瓜蟲(Ichthyopthiriusmultifillis)；敏感性；福爾馬林；高錳酸鉀；硫酸銅；辣椒

多子小瓜蟲(Ichthyopthiriusmultifillis)屬纖毛蟲綱全毛目凹口科小瓜蟲屬。由多子小瓜蟲引起的魚病是漁業(yè)生產(chǎn)中最常見的魚病之一，它在鯉魚、草魚、鯽魚、金魚、斑點叉尾鮰、大口鯰等魚類都能寄生，并導(dǎo)致大量苗種甚至成魚死亡[1-6]。目前，用于防治小瓜蟲病的藥物很多，但用藥效果大都不太理想或者不穩(wěn)定[3-10]。雖然其中硝酸亞汞作為觀賞魚小瓜蟲病的治療藥物有較好療效[10]，但因其毒性而無法在食用魚中使用。為此，本研究探討了不同發(fā)育階段的多子小瓜蟲對福爾馬林、高錳酸鉀、硫酸銅和辣椒煎水等藥物的敏感性，以期找到多子小瓜蟲對各藥物的敏感期及殺滅瓜蟲的適宜用藥方法，為漁業(yè)生產(chǎn)提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

病原體多子小瓜蟲來自四川省西昌市團(tuán)結(jié)漁場。7月初從該漁場收集規(guī)格為20～25g、魚體都已嚴(yán)重感染多子小瓜蟲病的建鯉魚種80尾，用塑料袋充氧運至四川省水產(chǎn)學(xué)校實驗室。病魚體表及鰓上均有許多小白點，經(jīng)鏡檢符合多子小瓜蟲的形態(tài)特征。

試驗用水族箱采用80cm×60cm×40cm的有機(jī)玻璃箱，使用前用100mg/L高錳酸鉀及10mg/L強(qiáng)氯精浸泡消毒處理，洗凈備用。

試驗用水為四川省水產(chǎn)學(xué)校校區(qū)內(nèi)井水，水溫22～24℃，經(jīng)充分暴氣后使用。

試驗所用藥物福爾馬林40%、高錳酸鉀、硫酸銅由四川省水產(chǎn)學(xué)校實驗室提供，均為分析純級；辣椒為市購的紅牛角椒，煎水后使用。

試驗用魚為5～10g的建鯉魚種，試驗前體質(zhì)健壯、無病無傷，經(jīng)1～2%食鹽水常規(guī)消毒后備用。

1.2 方法

試驗共采用水族箱25個，其中24個用于藥物處理，另1個用作對照(表1)。

(1)病原體的感染 水族箱盛適量水后將帶回的病魚每箱放入2尾(對照組除外),同時放入30尾健康的試驗用魚種。經(jīng)半個月后，除對照組外，所有試驗魚體表、鰭條及鰓都出現(xiàn)了許多白點，經(jīng)鏡檢，小白點具有多子小瓜蟲營養(yǎng)體的特征，表明試驗用魚全部感染了多子小瓜蟲。此過程中原帶入多子小瓜蟲的病魚已經(jīng)死亡。

表1 幾種藥物對不同發(fā)育階段小瓜蟲的用藥方法與用藥濃度

(2)藥物敏感性試驗 將所有水族箱內(nèi)水全部換掉，注入適量并經(jīng)鏡檢不含有多子小瓜蟲的新水，試驗箱每箱隨機(jī)放入30尾已感染小瓜蟲的試驗魚，對照組仍放入30尾健康的試驗魚。在水族箱底放置多塊載玻片，每隔2h用浮游生物網(wǎng)從水中采取蟲體，或從箱底載玻片或魚體表病灶上采取病原體進(jìn)行顯微觀察，根據(jù)觀察結(jié)果確定小瓜蟲的發(fā)育階段，再分別在其營養(yǎng)體期、胞囊期及幼蟲階段使用不同濃度的不同藥物進(jìn)行浸洗或遍灑處理，幾種藥物對不同發(fā)育階段小瓜蟲的用藥方法與用藥濃度詳見表1。其中采用浸洗法時，用藥10～15min左右即將魚轉(zhuǎn)回原水族箱。

每次某種藥物處理后根據(jù)小瓜蟲的發(fā)育情況對水體及魚體小瓜蟲蟲體進(jìn)行觀察與鏡檢，并統(tǒng)計處理10、20、30d時試驗魚的死亡及存活情況。

2 結(jié)果與分析

根據(jù)對多子小瓜蟲生活史的連續(xù)觀察結(jié)果，確定在體表有大量營養(yǎng)體時，即體表有大量白色點狀病灶時作為營養(yǎng)體用藥時機(jī)；在水族箱底部有許多多子小瓜蟲胞囊(多數(shù)蟲體胞囊內(nèi)處于多細(xì)胞連續(xù)分裂期)時作為胞囊期用藥時機(jī)；在幼蟲從胞囊內(nèi)鉆出來的第1天作為幼蟲期用藥時機(jī)。

2.1 4種藥物對營養(yǎng)體期小瓜蟲的處理效果

對營養(yǎng)體期的小瓜蟲采用福爾馬林處理后，發(fā)現(xiàn)試驗魚體表的部分蟲體脫落，體表的白色小點有所減少，但仍有許多蟲體附著于體表，沒有死亡。抽樣鏡檢100個脫落的蟲體，發(fā)現(xiàn)有72個蟲體死亡，沒有死亡的蟲體迅速形成胞囊。浸洗法處理后水族箱中的胞囊在經(jīng)過20～24h后即發(fā)育為幼蟲；遍灑法處理的水族箱中的胞囊則需經(jīng)過36h后才發(fā)育為幼蟲，重新寄生于魚體。在試驗的30d內(nèi)發(fā)現(xiàn)病魚的病癥經(jīng)歷了3次由重到輕再由輕到更重的循環(huán)。3次營養(yǎng)體的重感染階段，魚體表的白色點狀癥狀越來越嚴(yán)重，檢測水體中胞囊及幼蟲發(fā)現(xiàn)，每經(jīng)歷1次循環(huán)，其數(shù)量明顯增加，試驗魚的死亡數(shù)量也明顯增加(表2)。

對營養(yǎng)體期的小瓜蟲分別采用高錳酸鉀及辣椒水處理后，其效果與采用福爾馬林處理相同。對脫落的蟲體抽樣鏡檢100個，其死亡數(shù)量分別為56個和64個。從處理開始到試驗結(jié)束，這2種藥物處理時試驗魚在小瓜蟲每個生活史循環(huán)中的死亡數(shù)量見表2。

對營養(yǎng)體期的小瓜蟲采用硫酸銅處理后，發(fā)現(xiàn)魚體表的蟲體也有部分脫落，體表的白色小點也有所減少，但不管是脫落或未脫落的蟲體都只有少量死亡，鏡檢100個蟲體只有12個死亡，未死亡的蟲體迅速形成胞囊，浸洗法處理后水族箱中的胞囊經(jīng)20～24h即發(fā)育為幼蟲，在遍灑法處理的水族箱中的胞囊則需經(jīng)過30～40h后才發(fā)育為幼蟲。隨后幼蟲重新大量寄生于魚體，在處理后20d左右，所有的病魚全都死亡(表2)。

2.2 4種藥物對胞囊期小瓜蟲的處理效果

對胞囊期的小瓜蟲采用福爾馬林、高錳酸鉀、硫酸銅、辣椒水處理后的效果都很差，對4種藥物處理后的胞囊抽樣100個進(jìn)行鏡檢，其死亡的胞囊個體數(shù)量分別為24、17、11、20個。與營養(yǎng)體期處理后相同時間病魚體表、鰓、鰭上的蟲體數(shù)量對比，胞囊期處理后病魚上蟲體數(shù)量明顯較多。在處理15d后對各試驗組魚體的鰓及尾鰭進(jìn)行鏡檢，1個視野內(nèi)(10×4)多子小瓜蟲的數(shù)量統(tǒng)計結(jié)果見表3。從處理后20d內(nèi)，所有試驗組的病魚死亡率都超過80%，30d后死亡率超過90%(表2)。這表明，4種藥物對胞囊期小瓜蟲的處理效果極差，也就是說多子小瓜蟲在胞囊期對4種藥物不敏感，不宜在此階段對多子小瓜蟲進(jìn)行滅殺處理。

表2 各藥物處理不同時間后魚的死亡數(shù)與死亡率

表3 不同藥物處理后試驗魚鰓及尾鰭上的營養(yǎng)體數(shù)量

2.3 4種藥物對幼蟲期小瓜蟲的處理效果

在幼蟲營自由生活的1d內(nèi)使用上述四種藥物處理的效果都很好，對處理后的水體及箱底部抽樣100個蟲體進(jìn)行鏡檢可知，采用福爾馬林、高錳酸鉀、硫酸銅、辣椒水處理的幼蟲死亡數(shù)量分別為94、92、94、93個，結(jié)果沒有顯著性差異。從處理開始到試驗結(jié)束，魚尾鰭、鰓上的寄生蟲數(shù)量相比營養(yǎng)體期、胞囊期進(jìn)行藥物處理要少得多(表3)。對幼蟲期小瓜蟲處理30d內(nèi)，沒有試驗魚死亡，成活率與對照組沒有差異(表2)。這表明，多子小瓜蟲在幼蟲階段對藥物敏感，使用上述藥物對多子小瓜蟲的幼蟲都有很好的殺滅效果。

3 小結(jié)與討論

(1)多子小瓜蟲的生活史可分為營養(yǎng)體期、胞囊期(二分裂期、四分裂期、連續(xù)分裂期)、幼蟲期。通過對多子小瓜蟲生活史的連續(xù)觀察可知，在水溫22～24℃下完成1個生活史需要5～6d。營養(yǎng)體期到胞囊期需要18～24h，從胞囊期到幼蟲期需要20～24h，幼蟲需2d的時間尋找新的宿主，在48h后，沒有找到新宿主的幼蟲會逐漸死亡，96h后會全部死亡。寄生后的幼蟲到營養(yǎng)體需3～4d。營養(yǎng)體在魚體上正常情況下生活4～5d會離開魚體，在水中完成其生殖。在受到藥物刺激后，營養(yǎng)體在很短的時間(8～12h)內(nèi)形成胞囊，在胞囊內(nèi)分裂繁殖出大量的幼蟲，待藥物分解到其能適應(yīng)的濃度后釋放出來。正常情況下從幼蟲寄生到魚體發(fā)育成營養(yǎng)體，再從營養(yǎng)體離開魚體生殖產(chǎn)生幼蟲需要10d左右[3]。蟲體在魚體上的寄生表現(xiàn)出由多到少，再從少到更多，而魚病癥狀也表現(xiàn)出階段式的由重到輕，再從輕到更重的循環(huán)，一般經(jīng)過2個這種循環(huán)便會產(chǎn)生魚的大量死亡。

(2)本試驗結(jié)果表明，多子小瓜蟲在胞囊期對幾種藥物均不敏感，使用福爾馬林、高錳酸鉀、硫酸銅、辣椒煎水進(jìn)行處理的效果均最差，30d后，4種藥物處理后的試驗魚死亡率均達(dá)90%以上，存活的個體體表都有大量的蟲體寄生，接近死亡。在幼蟲自由活動期時用藥效果最好，幼蟲對4種藥物都敏感，30d后，魚的成活率達(dá)100%，魚體表只有極個別的蟲體寄生，魚體健康，活動正常。在營養(yǎng)體期使用藥物處理，只有福爾馬林和辣椒煎水2種藥物有較好的效果，這2種藥物處理30d后統(tǒng)計其成活率超過50%；采用高錳酸鉀處理沒有明顯效果，但也未產(chǎn)生加重病情的情形，30d后統(tǒng)計其成活率低于24%。而用硫酸銅處理不但沒有起到治療的作用，反使病情加重，20d后其試驗魚全部死亡。其原因應(yīng)為福爾馬林及辣椒煎水能殺死部分蟲體，從而使病原體相對減少，而硫酸銅則不能殺死蟲體，反而刺激其營養(yǎng)體迅速產(chǎn)生胞囊，使病原體的數(shù)量大大增加，表現(xiàn)出病情特別嚴(yán)重，死亡率最高。

(3)從試驗結(jié)果可以得出，治療多子小瓜蟲病的最佳時機(jī)為其病原體自由活動的幼體階段，即幼蟲從胞囊中鉆出來的1～2d內(nèi)。

(4)多子小瓜蟲的營養(yǎng)體期對藥物不敏感或具有抗性的原因是營養(yǎng)體在上皮細(xì)胞下寄生，同時由于不斷轉(zhuǎn)動而引起上皮細(xì)胞輕度增生形成囊泡，從而把營養(yǎng)體包埋在病灶里，產(chǎn)生耐藥性，營養(yǎng)體外的囊泡對藥物有一定的抵抗作用；另外，營養(yǎng)體受到藥物刺激后會迅速產(chǎn)生膠質(zhì)包裹其成體形成胞囊，膠質(zhì)的胞囊對藥物有抵抗作用，一方面保護(hù)其營養(yǎng)體，另一方面增加其繁殖。胞囊期對藥物不敏感或具有抗性的原因是其體外膠質(zhì)的胞囊對藥物有抵抗作用[6]。

(5)比較4種藥物的治療效果，其中福爾馬林的效果最好，雖然福爾馬林分解快、殘留少，但相對于高錳酸鉀治療成本較高。用中草藥辣椒煎水也有較好療效，且用藥安全，無殘留、無污染，但治療成本相對較高，用藥程序煩瑣。

(6)要想取得更好的治療多子小瓜蟲病的效果，除了抓住在幼蟲期用藥外，還應(yīng)在用藥后第4d左右再用藥1次。按照此方法，筆者在重慶合川市指導(dǎo)養(yǎng)殖戶使用福爾馬林治療大口鯰多子小瓜蟲病取得了良好的效果。

致謝：本試驗得到了正大集團(tuán)成都正大有限公司的大力支持，在此深表感謝。

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2013-04-02

張善忠(1968-)，男，講師，主要從事魚類種質(zhì)資源與漁業(yè)環(huán)境保護(hù)研究。

S941.51+6

A

1673-1409(2013)17-0051-04