吳毅彥，王 衛(wèi)

(天津市藥品檢驗(yàn)所，天津 300070)

馬來(lái)酸曲美布汀適用于胃腸道運(yùn)動(dòng)功能紊亂引起的食欲不振、惡心、嘔吐、噯氣、腹瀉、便秘等癥狀及腸道易激惹綜合癥。馬來(lái)酸曲美布汀目前在我國(guó)共有3個(gè)廠家生產(chǎn)，分別執(zhí)行3個(gè)不同標(biāo)準(zhǔn)［WS－521(X－444)－2011、WS1－(X－469)－2003 Z和 YBH 07532010］，3個(gè)標(biāo)準(zhǔn)中有關(guān)物質(zhì)檢查各不相同。本文將三個(gè)標(biāo)準(zhǔn)統(tǒng)一，采用高效液相色譜法測(cè)定馬來(lái)酸曲美布汀的有關(guān)物質(zhì)，并增加了已知雜質(zhì)3，4，5－三甲氧基苯甲酸的檢測(cè)，以完善現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)，保證產(chǎn)品的安全、有效和質(zhì)量可控。

1 儀器與試藥

Agilent 1200液相色譜儀。

乙腈為色譜純(Merck)，水為純化水;馬來(lái)酸曲美布汀對(duì)照品(批號(hào)100580－200501)和3，4，5－三甲氧基苯甲酸對(duì)照品(批號(hào)100617－200501)均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所;馬來(lái)酸曲美布汀原料共9批，來(lái)自 A 廠(批號(hào) 20090412、20110502、20110503)、B 廠(批號(hào)110480、110575、110576)和 C 廠(批號(hào)1104001、1104002、1104003)。

2 方法和結(jié)果

2.1 色譜條件 采用資生堂 CAPCELL PAK C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);以緩沖液［取高氯酸 0.43 ml，加水950 ml，混勻后用醋酸銨試液調(diào)節(jié) pH值至(3.75 ± 0.05)，用水稀釋至 1000 ml，加戊烷磺酸鈉1.54 g，振搖使溶解］－乙腈(65∶35)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為268 nm，柱溫為40℃，流速1 m l/min。進(jìn)樣量20 μl。

2.2 專屬性試驗(yàn)

2.2.1 專屬性考查 分別取馬來(lái)酸曲美布汀100 mg，置100 ml量瓶中，加流動(dòng)相適量，加1 mol/L鹽酸溶液10 ml，1 mol/L 的氫氧化鈉溶液5 ml，30%H2O2溶液 5 m l，置水浴中加熱2 h，放冷，用1 mol/L氫氧化鈉溶液或1 mol/L鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至中性，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為酸破壞、堿破壞和氧化破壞溶液;取馬來(lái)酸曲美布汀100 mg，置100 ml量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，日光照射72 h后，作為光破壞溶液。分別取上述溶液，按色譜條件進(jìn)樣，結(jié)果見(jiàn)圖1。試驗(yàn)表明，馬來(lái)酸曲美布汀在堿性條件下產(chǎn)生1個(gè)較大的已知雜質(zhì)峰，其他雜質(zhì)峰較小，各雜質(zhì)峰之間均能有效的分離，并且不干擾主峰測(cè)定，在其他條件下，樣品穩(wěn)定，表明方法的專屬性良好，適宜進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)檢查。

圖1 溶劑空白(A)對(duì)照品(B)供試品(C)酸破壞(D)堿破壞(E)氧化破壞(F)光照破壞(G)RP－HPLC色譜圖

2.2.2 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 精密稱取馬來(lái)酸曲美布汀適量，用流動(dòng)相溶解并定量稀釋制成5 μg/m l溶液，精密量取20 μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。在該色譜條件下馬來(lái)酸曲美布汀峰的理論板數(shù)為8150，馬來(lái)酸曲美布汀峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度為3.0。

2.3 線性及最低檢測(cè)限 分別精密稱取馬來(lái)酸曲美布汀對(duì)照品和3，4，5－三甲氧基苯甲酸雜質(zhì)對(duì)照品各10 mg，置100 ml量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品貯備溶液;精密量取對(duì)照品貯備溶液適量，分別加流動(dòng)相稀釋制成濃度為 0.5、2.0、5.0、10.0和 20.0 μg/ml的系列溶液，分別精密量取上述溶液20 μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖;以馬來(lái)酸曲美布汀的濃度C(μg/ml)為橫坐標(biāo)，以相對(duì)應(yīng)的峰面積A為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸。結(jié)果表明:馬來(lái)酸曲美布汀在0.5～20.0 μg/ml的濃度范圍內(nèi)與其峰面積呈良好線性關(guān)系，其線性方程為 A=26.772 C－0.0935(r=0.9999，n=5);3，4，5 － 三甲氧基苯甲酸的濃度 C(μg/ml)為橫坐標(biāo)，以相對(duì)應(yīng)的峰面積A為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸。結(jié)果表明:馬來(lái)酸曲美布汀在0.5～20.0 μg/m l的濃度范圍內(nèi)與其峰面積呈良好線性關(guān)系，其線性方程為 A=36.019C － 1.469(r=0.9999，n=5)。按信躁比(S/N)為3∶1計(jì)算，馬來(lái)酸曲美布汀及3，4，5－三甲氧基苯甲酸的最低檢測(cè)限均為1 ng。

2.4 精密度及溶液穩(wěn)定性試驗(yàn) 取本品，精密稱定，按有關(guān)物質(zhì)方法制備對(duì)照溶液和供試品溶液，分別重復(fù)進(jìn)樣6次，對(duì)照溶液峰面積RSD為0.62%，供試品溶液峰面積RSD為0.04%。表明該方法精密度良好;將供試品溶液分別在室溫放置1、2、4、8、12和24 h后依法進(jìn)樣20 μl測(cè)定峰面積，觀察主峰及各雜質(zhì)峰面積的變化，試驗(yàn)結(jié)果表明該溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.5 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)樣品6份，精密稱定，按有關(guān)物質(zhì)測(cè)定法制備供試品溶液并進(jìn)樣，計(jì)算，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

2.6 已知雜質(zhì)的回收率試驗(yàn) 取3，4，5－三甲氧基苯甲酸雜質(zhì)對(duì)照品約100 mg，精密稱定，置100 m l量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，作為已知雜質(zhì)對(duì)照品儲(chǔ)備液。分別精密稱取樣品6份，每份約100 mg，置100 ml量瓶中，加流動(dòng)相適量，精密加入已知雜質(zhì)對(duì)照品儲(chǔ)備液0.5 ml，振搖使溶解，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液20 μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，得平均回收率為98.6%，RSD為1.2%。

2.7 有關(guān)物質(zhì)檢查 取本品約0.1 g，精密稱定，置100 ml量瓶中，加流動(dòng)相適量，振搖使馬來(lái)酸曲美布汀溶解，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液;精密稱取3，4，5－三甲氧基苯甲酸對(duì)照品適量，加流動(dòng)相溶解并定量稀釋制成每1 ml中約含1.0 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液;精密量取對(duì)照品溶液及供試品溶液各1 ml，置同一200 ml量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照溶液。取供試品溶液和對(duì)照溶液各20 μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的2倍，以自身對(duì)照法計(jì)算含量，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 有關(guān)物質(zhì)測(cè)定結(jié)果

3 討論

3.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 將馬來(lái)酸曲美布汀對(duì)照品用0.01 mol/L鹽酸溶液溶解，測(cè)定UV圖譜，在268 nm波長(zhǎng)處有最大吸收。對(duì)各破壞性試驗(yàn)溶液進(jìn)行DAD測(cè)定，降解雜質(zhì)的最大吸收基本在268 nm左右，故確定檢測(cè)波長(zhǎng)為268 nm。

3.2 流動(dòng)相的選擇 根據(jù)《英國(guó)藥典》和《日本藥局方》，并通過(guò)對(duì)流動(dòng)相的優(yōu)選，采用緩沖液［取高氯酸0.43 ml，加水950 m l，混勻后用醋酸銨試液調(diào)節(jié)pH值至(3.75 ±0.05)，用水稀釋至 1000 m l，加戊烷磺酸鈉1.54 g，振搖使溶解，即得］－乙腈(65∶35)為流動(dòng)相，保留時(shí)間適宜，峰形較好，與其他雜質(zhì)完全分離。

3.3 方法的粗放度試驗(yàn) 分別采用Agilent ZORBAX SB C18柱和 Thermo BDS HYPERSIL C18柱對(duì)9批樣品進(jìn)行檢驗(yàn)。結(jié)果表明，已知雜質(zhì)、單一雜質(zhì)與雜質(zhì)總量的測(cè)定結(jié)果，在不同試驗(yàn)條件下基本一致，可見(jiàn)本方法的耐用性較好。