林俊錦 王志剛 許慶華

老年肺結(jié)核患者淋巴細(xì)胞亞群及免疫球蛋白的變化及意義

林俊錦 王志剛 許慶華

目的觀察老年肺結(jié)核患者細(xì)胞免疫及體液免疫功能的變化探討其意義。方法對2010年4月至2012年12月福建醫(yī)科大學(xué)附屬泉州第一醫(yī)院住院或門診的127例肺結(jié)核患者，按年齡分為老年組及青壯年組，50例健康志愿者(健康組)作為對照組，采用流式細(xì)胞術(shù)檢測肺結(jié)核患者CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞、天然殺傷細(xì)胞(NK細(xì)胞)，采用免疫透射比濁法測定免疫球蛋白。結(jié)果①老年人肺結(jié)核組CD4+T細(xì)胞及CD4/CD8比值與青壯年組及健康組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且低于青壯年組。老年人肺結(jié)核組CD8+T細(xì)胞與青壯年組及健康組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且高于青壯年組，老年人肺結(jié)核組NK細(xì)胞與青壯年組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。②老年肺結(jié)核患者血清中IgA，IgG，IgM與青壯年組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論老年肺結(jié)核患者細(xì)胞免疫功能較青壯年低下，但是體液免疫不受影響。

老年患者；肺結(jié)核；T淋巴細(xì)胞；天然殺傷細(xì)胞；免疫球蛋白

結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌引發(fā)的傳染性疾病。機(jī)體抗結(jié)核免疫主要是細(xì)胞免疫，決定細(xì)胞免疫強(qiáng)弱的主要是T淋巴細(xì)胞亞群數(shù)量及功能。盡管結(jié)核病激發(fā)的細(xì)胞免疫反應(yīng)是結(jié)核病最重要的免疫反應(yīng)，也有研究證明結(jié)核病患者中體液免疫的存在。目前在結(jié)核病患者中老年人占很大一部分比例。本研究采用流式細(xì)胞術(shù)檢測老年肺結(jié)核患者外周血B細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞、NK細(xì)胞，采用免疫透射比濁法測定免疫球蛋白，分析老年結(jié)核病患者體內(nèi)免疫功能的特有的改變，指導(dǎo)臨床治療。

1 資料與方法

1.1臨床資料 對2010年4月至2012年8月福建醫(yī)科大學(xué)附屬泉州第一醫(yī)院住院或門診的127例無肺外結(jié)核及細(xì)菌感染、腫瘤合并癥的肺結(jié)核患者(肺結(jié)核組)的免疫功能進(jìn)行檢測，并與健康志愿者(健康組)進(jìn)行比較分析。127例肺結(jié)核患者中男70例，女57例，年齡31～78歲，平均(62.3±4.7)歲。18-60歲以下為青壯年組(62例)，60歲以上為老年人組(65例)。健康組為我院門診體檢的健康志愿者50例，X線胸片檢查未見異常。兩組之間體重指數(shù)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2診斷標(biāo)準(zhǔn) 肺結(jié)核確診按照臨床診療手冊(結(jié)核病分冊)診斷標(biāo)準(zhǔn)[1]

1.3主要試劑及儀器 熒光標(biāo)記小鼠抗人單克隆抗體CD4-FITC/CD8-PE/ CD3-PC5、CD3-FITC/CD16+56-PE/CD19-ECD/CD45-PC5及相應(yīng)同型對照、溶血素等均購自法國Immunotech公司。流式細(xì)胞儀(型號(hào)Epics XL)購自美國Beckman Coulter公司，美國貝克曼·庫爾特(LH750)五分類血球計(jì)數(shù)儀。

1.4檢測方法 外周血淋巴細(xì)胞亞群檢測 所有患者于就診第1天，無菌采集靜脈血液2 ml于EDTA抗凝管中。應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)分別檢測兩組患者及正常人外周血T淋巴細(xì)胞亞群CD4+T，CD8+T，CD4/CD8比值及NK細(xì)胞。同份血用美國貝克曼·庫爾特(LH750)五分類血球計(jì)數(shù)儀作白細(xì)胞計(jì)數(shù)，再計(jì)算出各淋巴細(xì)胞亞群的計(jì)數(shù)值。采用免疫透射比濁法測定免疫球蛋白。

2 結(jié)果

2.1老年組肺結(jié)核患者的;淋巴細(xì)胞亞群、自然殺傷細(xì)胞的檢測結(jié)果與青年組患者對比分析，如表1所示。

老年人肺結(jié)核組CD4+T細(xì)胞及CD4/CD8比值與青壯年組及健康組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且低于青壯年組。老年人肺結(jié)核組CD8+T細(xì)胞與青壯年組及健康組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且高于青壯年組。其中老年患者組中部分患者CD4/CD8比值倒置。老年人肺結(jié)核組NK細(xì)胞與青壯年組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.2青壯年組與老年組肺結(jié)核的IgG，IgA，IgM抗體的檢測結(jié)果及分析，如表2所示。

表1 老年組肺結(jié)核患者與青壯年組外周血淋巴細(xì)胞檢測結(jié)果

表2 老年組肺結(jié)核患者與青壯年組外周血IgG，IgA，IgM抗體的檢測結(jié)果

表2說明老年肺結(jié)核患者血清中IgA，IgG，IgM在兩組之間無顯著差異。

3 討論

肺結(jié)核的發(fā)病與人體的免疫功能相關(guān)，結(jié)核桿菌感染機(jī)體后細(xì)胞免疫起主要作用，淋巴細(xì)胞在受到抗原刺激后產(chǎn)生分化、增殖，合成分泌特定的細(xì)胞因子產(chǎn)生特異性的細(xì)胞免疫。細(xì)胞免疫過程中CD4+T淋巴細(xì)胞接受單核巨噬細(xì)胞遞呈的抗原后被激活并增殖，產(chǎn)生細(xì)胞因子，產(chǎn)生的細(xì)胞因子轉(zhuǎn)而激活巨噬細(xì)胞使之抑制細(xì)胞內(nèi)結(jié)核菌的生長[1]。CD4+T細(xì)胞應(yīng)答程度還與結(jié)核患者病變程度有關(guān)。病變嚴(yán)重而處于進(jìn)展期的患者CD4+T細(xì)胞在體外對結(jié)核桿菌蛋白抗原僅有低增殖應(yīng)答反應(yīng)，而病變范圍小或已控制病情患者對純蛋白衍生物(PPD)反應(yīng)較強(qiáng)。CD4+T細(xì)胞的變化，提示機(jī)體免疫反應(yīng)能力差異，預(yù)示患者治療預(yù)后的不同[2]，感染部位CD4+T細(xì)胞數(shù)量的多少與抗結(jié)核治療的效果有關(guān)[3]。CD8+T細(xì)胞主要識(shí)別細(xì)胞內(nèi)感染，抑制胞內(nèi)結(jié)核分枝桿菌的生長。促使結(jié)核菌暴露及病灶清除[4]。目前很多學(xué)者做過研究，通常認(rèn)為肺結(jié)核患者中免疫功能受損，CD4+T降低, CD8+T升高, CD4/CD8比值降低甚至倒置[5]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，老年組肺結(jié)核患者的老年人肺結(jié)核組CD4+T細(xì)胞及CD4/CD8比值低于青壯年組。其中老年組比值倒置者有39例(占60%)，CD8+T細(xì)胞高于青壯年組，提示老年組肺結(jié)核患者的細(xì)胞免疫功能比青壯年組低下。NK細(xì)胞是天然免疫系統(tǒng)的主要組成分，在抗病毒感染免疫、腫瘤免疫、移植的排斥反應(yīng)以及在免疫的調(diào)節(jié)中起著十分重要的作用。有研究表明，肺結(jié)核患者NK細(xì)胞活性高于正常人，好轉(zhuǎn)期患者NK細(xì)胞活性高于進(jìn)展期患者，輕、中度肺結(jié)核患者NK細(xì)胞活性高于重度肺結(jié)核患者，提示NK細(xì)胞可能能參與細(xì)胞免疫，其活性隨著病灶的縮小而趨于升高[6]。本研究發(fā)現(xiàn)老年肺結(jié)核患者NK細(xì)胞活與青壯年組無明顯差異，可能本次研究病例數(shù)有關(guān)，有待今后進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量深入研究。在兩組患者體液免疫中免疫球蛋白IgA，IgG，IgM在兩組之間無明顯變化，可能與體液免疫功能在結(jié)核免疫中所起的作用不大有關(guān)，與國內(nèi)一些研究結(jié)果基本相同[7]。

綜上所述，本研究中發(fā)現(xiàn)在老年結(jié)核病患者中主要為細(xì)胞免疫起主要作用，而老年結(jié)核病患者組細(xì)胞免疫功能較青年患者低下，導(dǎo)致了臨床上老年肺結(jié)核患者治療困難且容易復(fù)發(fā)，因此，在老年人肺結(jié)核患者的治療上應(yīng)注意在常規(guī)抗結(jié)核治療的基礎(chǔ)上，注意同時(shí)免疫治療，增強(qiáng)免疫功能，才有利于病情的恢復(fù)，最終使患者受益。

[1] 謝惠安,陽國太，林善梓，等.現(xiàn)代結(jié)核病學(xué).北京：人民衛(wèi)生出版社，2000：105-146.

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AnalysisonthechangesofT-lymphocyteandimmunoglobulininelderlytuberculosispatients

LINJun-jin,WANGZhi-gang,XUQing-hua.

DepartmentofImmuneMedicine,FujianMedicaluniversity，F(xiàn)uzhou,Fujian350001，China

ObjectiveTo study the changes in cellular immunity and humoral immunity in elderly tuberculosis patients and their implications.MethodsDetermined the level of the CD4 cells,CD8 cells,NK cells,B cells with low cytometry in elderly tuberculosis patients and young adult tuberculosis patients,then determine the immunoglobulin with the nephelometric assay. Then comparison with each other.Results①The percentages of CD4 cells and CD4/CD8 ratio were significantly lower in elderly tuberculosis patients.and The percentages of CD8 cells was significantly higher in elderly tuberculosis patients..②The levels of IgA，IgG,IgM in tuberculosis patients were no obvious differences in the two groups.ConclusionCellular immunity in elderly tuberculosis patients were lower status than young adult tuberculosis patients but humoral immunity were not influenced.

Senile patient;Pulmonary tuberculosis;T-lymphocyte; NK cells;Immunoglobulin

福建省泉州市科技計(jì)劃重點(diǎn)項(xiàng)目(項(xiàng)目編號(hào)：2010Z12)

362000 福建醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)系(林俊錦);福建醫(yī)科大學(xué)附屬泉州第一醫(yī)院呼吸內(nèi)科(王志剛 許慶華)

林俊錦 E-mail：kily3300@163.com