成仲庚

（湖南婁底職業(yè)技術(shù)學(xué)院，湖南婁底417000）

1 前言

高致病性藍(lán)耳?。≒PRS）是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PPRSV）引起的以母豬繁殖障礙、仔豬和育成豬呼吸道癥狀為主要特征的一種高度接觸性傳染病，有高發(fā)病率、高死亡率、傳染速度快、耐過(guò)豬生長(zhǎng)速度慢、成活率低等特點(diǎn)，因發(fā)病后豬兩耳出現(xiàn)短暫性的紫紺現(xiàn)象而稱為藍(lán)耳病。本病發(fā)生后常破壞豬的免疫系統(tǒng)，導(dǎo)致豬的抵抗力低下而容易繼發(fā)其它疾病如豬瘟、偽狂犬病、豬圓環(huán)病、豬細(xì)小病毒病、豬附紅體病、豬乙型腦炎等病，已成為影響和制約現(xiàn)代養(yǎng)豬業(yè)正常發(fā)展的重要因素。

婁底及周邊地區(qū)是湖南主要的生豬生產(chǎn)基地，有數(shù)百家規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)及大量的散養(yǎng)戶，近年來(lái)，豬藍(lán)耳病、豬瘟、豬附紅體病及豬圓環(huán)病等疾病時(shí)有發(fā)生，給養(yǎng)豬來(lái)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。然后，養(yǎng)殖場(chǎng)及散養(yǎng)戶對(duì)疫病普遍存在重免疫卻輕視免疫監(jiān)測(cè)的現(xiàn)象，有的養(yǎng)殖場(chǎng)年年免疫，年年發(fā)病，有的即使進(jìn)行了多次的強(qiáng)化免疫，效果卻差強(qiáng)人意。發(fā)生這些現(xiàn)象多與飼養(yǎng)管理不善、衛(wèi)生消毒工作不嚴(yán)格、免疫措施不合理，以及沒(méi)有進(jìn)行免疫結(jié)果監(jiān)測(cè)有關(guān)。本課題組通過(guò)對(duì)婁底及周邊地區(qū)

十個(gè)規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)的豬藍(lán)耳病免疫情況進(jìn)行調(diào)查及抗體監(jiān)測(cè)，分析了不同監(jiān)測(cè)技術(shù)的檢測(cè)效果。針對(duì)目前在規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)藍(lán)耳病預(yù)防存在的一些問(wèn)題，我們提出了本病的預(yù)防應(yīng)該建立在免疫監(jiān)測(cè)抗體水平的基礎(chǔ)上進(jìn)行，即根據(jù)抗體水平高低采取針對(duì)性的措施。在免疫監(jiān)測(cè)上，選用了間接血凝試驗(yàn)和ELISA試紙法，對(duì)已免疫和未免疫的養(yǎng)殖場(chǎng)的各種豬采取血清進(jìn)行了對(duì)比試驗(yàn)。根據(jù)其檢測(cè)結(jié)果，對(duì)兩種監(jiān)測(cè)技術(shù)進(jìn)行分析，從而比較兩種監(jiān)測(cè)技術(shù)的優(yōu)缺點(diǎn)，為養(yǎng)殖場(chǎng)的抗體監(jiān)測(cè)和免疫提供依據(jù)。

2 材料和方法

2.1 材料

試驗(yàn)豬選自?shī)涞字苓叺貐^(qū)10個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)；診斷液和對(duì)照液（陽(yáng)性和陰性血清）、豬藍(lán)耳病正向間接血凝標(biāo)準(zhǔn)致敏紅細(xì)胞稀釋液,均購(gòu)自深圳某生物科技有限公司；藍(lán)耳病弱毒苗和滅活苗購(gòu)自廣東某生物制藥有限公司。

2.2 藍(lán)耳病免疫方法

藍(lán)耳病免疫方法見(jiàn)表1。各豬場(chǎng)使用的①號(hào)苗為弱毒苗，②號(hào)苗為滅活苗，免疫程序?yàn)椋悍N公豬、種母豬每年注射三次；后備母豬配種前6周注射一次，配種前4周再注射一次；仔豬斷奶前一周注射一次，四周后再注射一次；以上注射用量均為每次一頭份（2 mL）。而9、10號(hào)豬場(chǎng)為豬藍(lán)耳病陰性豬場(chǎng)，未進(jìn)行豬藍(lán)耳病疫苗注射。

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2.3 抗體檢測(cè)

2.3.1 間接紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)

（1）采樣：對(duì)豬采取耳靜脈采血，每頭豬采血6 mL用于間接凝集試驗(yàn)和ELI SA診斷，編號(hào)后并于陰涼處?kù)o置使其血清析出，公豬采樣率為100%，后備母豬采樣數(shù)量占存欄數(shù)量20%，在產(chǎn)母豬采樣數(shù)占存欄數(shù)量15%以上。商品豬采集樣本數(shù)量應(yīng)占存欄數(shù)量的5%以上。

（2）材料：診斷液和對(duì)照液（陽(yáng)性和陰性血清）；豬藍(lán)耳病正向間接血凝標(biāo)準(zhǔn)致敏紅細(xì)胞稀釋液；待檢血清。

（3）操作方法：將待檢血清放入65℃水浴中滅活半小時(shí)，先于V型血凝板上每孔中加入20 μL稀釋液，然后再取20 μL待檢血清加入第一孔，充分混合，取出20 μL放人第二孔混勻,依次到第九孔,取出20 μL棄掉。血清稀釋度從第一至第九孔分 別 為 1：2,1：4,1：8,1：16,1：32,1：64,1：128,1：256,1：512，第10孔為陽(yáng)性血清對(duì)照、第11孔為陰性血清對(duì)照，第12孔為抗原對(duì)照。每孔加入20 μL致敏紅細(xì)胞,振蕩1～2分鐘,置37℃溫箱2小時(shí)，判定檢測(cè)結(jié)果。

（4）結(jié)果如表 2。

（5）判斷標(biāo)準(zhǔn)

以出現(xiàn)50%凝集的血清最高稀釋度為該血清的間接血凝價(jià)，抗體效價(jià)在1∶16陽(yáng)性血清對(duì)照組抗體效價(jià)為1：512，陰性血清不發(fā)生凝集，即可判為抗體陽(yáng)性，抗體效價(jià)達(dá)到1∶256為抗體水平高，可以抵抗野毒的侵襲。

2.3.2 ELISA診斷

（1）材料準(zhǔn)備：耳病抗體ELISA檢測(cè)試劑盒,編號(hào)RS 040117 A，購(gòu)自深圳某生物科技有限公司。血清取自間接血凝試驗(yàn)所采樣的血清。

（2）操作方法：按ELISA檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書上操作方法進(jìn)行。

（3）結(jié)果判斷。

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儀器判斷：以空白對(duì)照調(diào)零用酶標(biāo)儀于450 n m（620 n m作參比波長(zhǎng)）讀取O D值，待檢孔O D值大于陰性對(duì)2.1倍者為陽(yáng)性。當(dāng)陰性對(duì)照O.D值低于0.07時(shí)按0.07計(jì)算。

S/P值的計(jì)算。S/P＝（待檢樣品的平均值-陰性對(duì)照的平均值）/（陽(yáng)性對(duì)照的平均值-陰性對(duì)照的平均值）。S/P<0.150為陰性,S/P在0.150到0.199為可疑,S/P≥0.2為陽(yáng)性。

（4）結(jié)果如表3。

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3 結(jié)果分析與討論

3.1 試驗(yàn)按操作規(guī)程嚴(yán)格操作

間接血凝試驗(yàn)與ELISA試驗(yàn)符合率達(dá)99.69%，表現(xiàn)了高度的符合性，敏感性略低于ELISA，但操作方法簡(jiǎn)單，檢測(cè)成本低，適用于基層技術(shù)條件低、操作技術(shù)水平較差的人員操作，可用于大規(guī)模的血清流行病學(xué)的調(diào)查和抗體水平的監(jiān)測(cè)；而ELISA試劑盒具有靈敏性高，特異性強(qiáng)，穩(wěn)定性良好的特點(diǎn)，能使檢測(cè)結(jié)果更加準(zhǔn)確，可以真實(shí)的反映出豬藍(lán)耳病抗體水平的高低。但操作中加樣量小，手工操作要求精準(zhǔn)，工作溫度及洗板都可能對(duì)檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生影響，因此技術(shù)要求高，必須嚴(yán)格按操作規(guī)程進(jìn)行操作。

3.2 免疫合格率低的原因

注射了疫苗的養(yǎng)殖場(chǎng)的陽(yáng)性率都比較高，但即抗體效價(jià)在1∶256及以上的較少，因而其免疫合格率低，此種現(xiàn)象可導(dǎo)致大部分豬只缺乏抵抗野毒的侵襲。究其原因，可能與下列因素有關(guān)：

（1）免疫壓力過(guò)重。在所調(diào)查的十個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)中，口蹄疫、豬瘟、豬細(xì)小病毒病、豬傳染性腹瀉等疾病時(shí)有發(fā)生。為慎重起見(jiàn)，往往給豬接種多種疫苗，而且多種疫苗接種的間隔時(shí)間過(guò)短，疫苗之間產(chǎn)生干擾作用，不僅使免疫應(yīng)激加重，而且使免疫壓力過(guò)重，從而導(dǎo)致免疫失敗。

（2）環(huán)境污染嚴(yán)重。養(yǎng)殖場(chǎng)普遍存在飼養(yǎng)密度高的問(wèn)題，特別在冬季，由于門窗緊閉，通風(fēng)不良，糞便打掃不干凈或未能及時(shí)清掃，致使氨氣及硫化氫等有害氣體濃度升高，導(dǎo)致呼吸系統(tǒng)受到不良刺激，使豬群健康狀況下降，種母豬多關(guān)于定位欄中進(jìn)行飼養(yǎng)，缺乏活動(dòng)，身體抵抗力差，應(yīng)激頻繁，使機(jī)體的免疫應(yīng)答能力降低，其抗體始終處于較弱水平，造成免疫失敗。因此要控制藍(lán)耳病，不能完全依賴疫苗，而應(yīng)采取綜合措施。

（3）防疫程序不合理。一直以來(lái)，對(duì)豬藍(lán)耳病的免疫程序都較混亂，經(jīng)藍(lán)耳疫苗免疫后的母豬所產(chǎn)仔豬在出生后體內(nèi)往往存在母源抗體，如在母源抗體濃度高的時(shí)候就注射藍(lán)耳病疫苗，不僅不會(huì)產(chǎn)生免疫效果，反而會(huì)引起抗體水平下降，因此，對(duì)仔豬的免疫注射時(shí)間的選擇要建立在抗體水平監(jiān)測(cè)的基礎(chǔ)上進(jìn)行，但養(yǎng)殖場(chǎng)往往均是憑經(jīng)驗(yàn)選擇時(shí)間，這樣就會(huì)導(dǎo)致抗體效價(jià)不高，疫苗失去保護(hù)作用。免疫時(shí)應(yīng)根據(jù)各豬場(chǎng)的具體情況進(jìn)行適時(shí)免疫。合理的免疫程序是弱毒苗和滅活疫苗相結(jié)合的方式。用產(chǎn)生抗體較快的弱毒苗作為基礎(chǔ)免疫，用滅活疫苗進(jìn)行加強(qiáng)免疫。

（4）未按操作規(guī)程進(jìn)行注射疫苗。養(yǎng)殖場(chǎng)在進(jìn)行疫苗免疫時(shí)操作不規(guī)范，消毒措施不嚴(yán)格也是造成免疫效果不好的原因之一。大部分的養(yǎng)殖場(chǎng)雖然有專門的技術(shù)人員負(fù)責(zé)疫苗注射。但實(shí)際操作起來(lái)往往是由飼養(yǎng)人員進(jìn)行注射，在注射時(shí)針頭沒(méi)有做到一豬一針，注射部位不準(zhǔn)確，注射深度不夠，注射用量得不到保證，注射時(shí)針頭和注射部位未進(jìn)行消毒或消毒不嚴(yán)格，有的甚至采取打“飛針”進(jìn)行注射，也會(huì)造成免疫效果不佳。

3.3 加強(qiáng)豬場(chǎng)藍(lán)耳病監(jiān)測(cè)

本次采樣的9號(hào)和10號(hào)豬場(chǎng)分別是建場(chǎng)一年和三年的新豬場(chǎng)，未曾發(fā)生過(guò)豬藍(lán)耳病，因些未進(jìn)行藍(lán)耳病疫苗的注射。但從抗體檢測(cè)結(jié)果來(lái)看，雖然絕大多數(shù)為陰性，也有小部分為陽(yáng)性，但抗體效價(jià)低，不足以抵抗強(qiáng)毒的侵襲。因此要加強(qiáng)對(duì)本病的監(jiān)測(cè)，如有本病發(fā)生的可能，要及時(shí)進(jìn)行免疫接種，采取相應(yīng)措施，預(yù)防本病的發(fā)生，避免造成不必要的經(jīng)濟(jì)損失。 □