王紅霞，張曉艷，孫園園，董笑一，豆志偉，曹東義

(1.河北省中醫(yī)藥研究院，石家莊 050031;2.河北醫(yī)科大學(xué)，石家莊 050011)

化濁解毒愈瘍湯是曹東義教授在濁毒理論指導(dǎo)下，結(jié)合自己多年來的臨床經(jīng)驗(yàn)總結(jié)出的治療胃潰瘍的經(jīng)驗(yàn)方，在臨床上取得治愈率高、復(fù)發(fā)率低的滿意療效。本實(shí)驗(yàn)通過制造濁毒內(nèi)蘊(yùn)型胃潰瘍大鼠模型，觀察化濁解毒愈瘍湯對(duì)實(shí)驗(yàn)性大鼠血清中腫瘤壞死因子-α及胃黏膜SOD影響的實(shí)驗(yàn)研究，進(jìn)一步探討其對(duì)濁毒內(nèi)蘊(yùn)型胃潰瘍的治療作用及機(jī)制，為臨床治療胃潰瘍提供進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料

1.1 動(dòng)物

50只清潔級(jí) Wistar雄性大鼠，體質(zhì)量 180～250g，由河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供(合格證號(hào)(冀)2004-1-00)。

1.2 藥物

化濁解毒愈瘍湯藥物組成:白芍30g，甘草6g，黃連 6g，茯苓 15g，白術(shù) 9g，煅瓦楞粉 30g，煅牡蠣30g，當(dāng)歸 12g，苦參 6g，蒲公英 20g，積雪草 15g。所需中藥均購自河北省中醫(yī)藥研究院，并由制劑室煎成湯劑。雷尼替丁膠囊由河北永豐藥業(yè)有限公司生產(chǎn)(0.15g/粒，批號(hào)國藥準(zhǔn)字 H13020830)。

1.3 試劑

55%乙醇、100%分析純冰乙酸(廣州丹旺貿(mào)易有限公司)、3%戊巴比妥鈉溶液(上海寶曼生物科技有限公司)均由河北省中醫(yī)藥研究院濁毒實(shí)驗(yàn)室提供;TNF-α試劑盒為上海酶聯(lián)生物科技有限公司產(chǎn)品;SOD試劑盒由北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司提供。

1.4 儀器

MK3酶聯(lián)免疫檢測儀(芬蘭雷柏公司產(chǎn)品)、600型電熱恒溫水箱(天津產(chǎn))、FJ-2021r-放免計(jì)數(shù)器(西安產(chǎn)品)。

2 方法

2.1 藥物制備

中藥常規(guī)水煎煮制成生藥含量為2.26g/ml的溶液，使用時(shí)水浴加溫至25℃。雷尼替丁用蒸餾水稀釋至5.74mg/ml的混懸液，均放置于4℃冰箱保存?zhèn)溆?，使用時(shí)水浴加溫至25℃。

2.2 模型制備

參照呂冠華［1］濕熱環(huán)境加高脂高糖飲食和乙醇的綜合造模加以改進(jìn)，并用乙酸侵蝕胃壁制造胃潰瘍方法［2］:空白組大鼠飼養(yǎng)于正常環(huán)境中，并給予正常飲食，其余各組大鼠均飼養(yǎng)于高熱潮濕(溫度為32℃，相對(duì)濕度為96%)的環(huán)境中，飼以高脂高糖飲食，即在普通飼料喂養(yǎng)的基礎(chǔ)上，每日每只加用10%蜂蜜自由飲用，且隔日按大鼠體質(zhì)量灌服豬油10g/kg，并與豬油隔日灌服10ml/kg白酒，共為10d。禁食不禁水24h，腹腔內(nèi)按40mg/kg的量注射3%戊巴比妥鈉溶液進(jìn)行麻醉，之后于劍突下0.5cm縱向切開腹壁2cm，將胃輕移出腹腔，用直徑為5mm的濾紙片浸漬冰乙酸在胃竇部漿膜面貼30s×2次，再用0.9%的氯化鈉沖洗后覆蓋網(wǎng)膜，最后縫合完好。

2.3 動(dòng)物分組給藥

將50只健康雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為5組，每組10只，分別為空白組、模型組、雷尼替丁治療組、化濁解毒愈瘍湯高、低劑量治療組。造模后24 h開始給藥治療，化濁解毒愈瘍湯低、高劑量治療組分別按 6.5g/(kg·d)、26 g/(kg·d)灌胃，雷尼替丁治療組按15mg/(kg·d)灌胃，均每天1次;正常對(duì)照組、模型組給予蒸餾水灌胃，連續(xù)灌胃2周。

2.4 標(biāo)本采集和處理

灌胃治療2周后頸椎脫臼法處死大鼠，斷頭取血做血清學(xué)檢測，以及用刀片刮取胃竇組織黏膜并稱重，冰浴下制備10%組織勻漿，3000r/min離心15min，取上清－20℃以下保存，留作 SOD。打開腹腔取出鼠胃，將大鼠胃大彎剪開，用生理鹽水沖洗后，沿潰瘍周圍切下約1cm×1cm大小的胃壁，用4%甲醛液固定，用濾紙吸干，石蠟切片5μm厚，蘇木精-伊紅染色法染色(HE染色)，光鏡觀察。

2.5 檢測指標(biāo)及方法

2.5.1 潰瘍指數(shù)測定 在顯微鏡下用游標(biāo)卡尺測量胃潰瘍損傷的長度與寬度，計(jì)算潰瘍指數(shù)(UI)=潰瘍最長徑與垂直于最大長徑的最大寬徑之積［3］。

2.5.2 測定血清 TNF-α 各組大鼠取血清用放射免疫分析法測定大鼠血清 TNF-α水平，嚴(yán)格按試劑盒步驟進(jìn)行。

2.5.3 測 SOD用黃嘌呤氧化酶法測定，方法嚴(yán)格按試劑盒說明書操作。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

4 結(jié)果

4.1 各組大鼠胃潰瘍

光鏡下可見，空白組與中藥高劑量治療組大鼠胃竇壁結(jié)構(gòu)無變化，且均未見明顯的炎性細(xì)胞浸潤。模型組大鼠胃竇壁結(jié)構(gòu)破壞，漿膜面見有瘢痕組織，并有大量炎性細(xì)胞浸潤，潰瘍周圍黏膜腺體間質(zhì)有充血、水腫。西藥治療組與中藥低劑量治療組均見胃竇壁結(jié)構(gòu)接近正常，有少量炎性細(xì)胞浸潤。

4.2 各組大鼠胃潰瘍指數(shù)(UI)比較

表1顯示，治療組均能明顯降低 UI，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，中藥低劑量治療組與西藥治療組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

4.3 各組大鼠血清TNF-α含量的比較

表2顯示，與正常組比較，模型組 TNF-α含量升高(P＜0.05);與模型組比較，各治療組 TNF-α含量均顯著降低(P＜0.05)，各治療組之間中藥低劑量組與西藥組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。與正常組比較，模型組大鼠胃黏膜SOD含量均顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);與模型組比較，各治療組量組大鼠胃黏膜SOD含量均有顯著增高，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，各治療組之間中藥小劑量組與西藥組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

表1 各組大鼠胃潰瘍指數(shù)(±s)mm2

表1 各組大鼠胃潰瘍指數(shù)(±s)mm2

注:與模型組比較:#P＜0.01;與雷尼替丁組比較:▲P＞0.05(n=10)

組別只數(shù) 潰瘍指數(shù)(mm2)模 型 組10 25.06±1.68雷 尼 替 丁 組 10 8.02±1.23#中藥低劑量組 10 7.95±1.08#▲中藥高劑量組 10 7.21±1.67#▲

表2 各組大鼠血清TNF-α和胃黏膜SOD含量比較(±s)

表2 各組大鼠血清TNF-α和胃黏膜SOD含量比較(±s)

注:與正常對(duì)照組比較:#P＜0.05;與模型組比較:▲P＜0.05;與西藥治療組比較:△P ＞0.05(n=10)

組別 只數(shù) TNF-α (μg/g prot) SOD(u/mg prot)模 型 組 10 0.998±0.185# 95±50.12#正 常 組 10 0.421±0.098▲ 235±40.82▲中藥高劑量組 10 0.456±0.172▲ 224±30.12▲中藥低劑量組 10 0.531±0.187▲△ 179±28.23▲△西 藥 治 療 組 10 0.565±0.206▲ 184±20.65▲

5 討論

TNF-α又名惡液質(zhì)素，由單核、巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，是可造成組織廣泛損傷的促炎癥因子。TNF-α是引起潰瘍形成的烈性介質(zhì)，在胃黏膜損傷過程中發(fā)揮作用。TNF-α是重要的致炎因子，可促進(jìn)其他細(xì)胞因子包括 IL-1、IL-6、IL-8、TNF-α、PAF、PGs等繼發(fā)性釋放，并引起中性粒細(xì)胞活化，急性期蛋白生成，凝血過程啟動(dòng)產(chǎn)生小血管內(nèi)凝血，影響?zhàn)つぱ豕┙o加劇損傷，甚至形成潰瘍［4］。TNF與機(jī)體的炎癥免疫反應(yīng)有密切關(guān)系［5］。蘇彩女等［6］通過檢測慢性胃炎患者血TNF-α水平顯著高于正常人的結(jié)果表明，TNF在胃炎的病理損傷過程中起重要的作用，并認(rèn)為其升高原因可能是患者炎癥反應(yīng)激活巨噬細(xì)胞的結(jié)果。于海等［4］通過實(shí)驗(yàn)觀察到除單寒組外，消炎痛型胃潰瘍各模型大鼠血清TNF-α含量均顯著升高。腫瘤壞死因子(tumor necrosis factorα，TNF-α)是促炎癥反應(yīng)因子，具有廣泛的生物學(xué)功能，在細(xì)胞生長死亡、腫瘤形成、免疫反應(yīng)和應(yīng)激反應(yīng)諸方面都具有重要作用［7］。它也能更強(qiáng)地誘導(dǎo)一氧化氮(NO)和誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶(iN0S)的合成，進(jìn)一步加重炎癥反應(yīng)［8］。一定含量的自由基對(duì)人體有生理作用，但其產(chǎn)生過多就會(huì)超出機(jī)體的清除能力，進(jìn)而對(duì)機(jī)體造成損傷［9］。過氧化物歧化酶(SOD)在自由基清除系統(tǒng)是占重要位置的酶類，在胃壁細(xì)胞內(nèi)活性很強(qiáng)。SOD能夠及時(shí)有效地清除體內(nèi)自由基，從而免除自由基對(duì)機(jī)體造成的損害作用。體內(nèi)SOD含量的大小，在一定程度上反映了機(jī)體清除自由基能力的大小。

郭喜軍等［10］認(rèn)為，濁毒的形成是致病因素之一，濁毒相關(guān)為害乃胃潰瘍病機(jī)關(guān)鍵之所在?；瘽峤舛居儨砂咨?、甘草、黃連、茯苓、白術(shù)、煅瓦楞粉、煅牡蠣、當(dāng)歸、苦參、蒲公英、積雪草、地錦草等組成，用于治療濕熱內(nèi)運(yùn)型胃潰瘍，具有燥濕化濁、清熱解毒、抑酸止痛作用。方中的苦參、蒲公英、黃連燥濕化濁解毒;茯苓、白術(shù)健脾祛濕解毒;瓦楞粉、煅牡蠣抑酸止痛;當(dāng)歸、白芍、甘草益氣養(yǎng)血緩急止痛?，F(xiàn)代藥理研究證實(shí)，黃連含黃連堿、甲基黃連堿等，具有較強(qiáng)的抗菌、抗炎、抗癌作用，對(duì)幽門螺旋桿菌有較強(qiáng)的抑菌作用，能夠協(xié)同西藥根除幽門螺旋桿菌［11］。白芍、炙甘草均能抑制胃酸分泌、抗炎、緩解胃腸平滑肌痙攣［12］;蒲公英有良好的抗菌活性，對(duì)幽門螺旋桿菌有很好的抑制作用［13］。施之琪等［14］通過實(shí)驗(yàn)研究認(rèn)為，雪草總苷在一定程度上可以刺激胃黏膜肉芽組織生長，促進(jìn)炎癥修復(fù)和潰瘍愈合，對(duì)于胃潰瘍具有一定的預(yù)防及治療作用。曹瑞珍［15］等研究表明，地錦草提取物可明顯提高小鼠血液SOD活性，提高機(jī)體的抗氧化能力。胡素敏等［16］研究發(fā)現(xiàn)，中藥張氏益胃湯有明顯修復(fù)潰瘍作用，其機(jī)制可能是通過降低潰瘍大鼠血清TNF-α水平。本實(shí)驗(yàn)研究表明，胃潰瘍模型組與正常對(duì)照組比較大鼠血清TNF-α明顯升高;胃黏膜SOD含量顯著降低，中藥及西藥均能明顯降低大鼠血清 TNF-α含量及增加胃黏膜SOD含量且潰瘍指數(shù)明顯減小(P＜0.01)，說明中藥化濁解毒愈瘍湯與西藥雷尼替丁均對(duì)實(shí)驗(yàn)性胃潰瘍大鼠具有良好的治療作用。其機(jī)制可能是通過降低潰瘍大鼠血清TNF-α含量、增加胃黏膜SOD含量、減輕自由基對(duì)胃黏膜造成的損害，從而達(dá)到治療的目的。實(shí)驗(yàn)還說明，中藥與西藥在治療本病近期療效方面無明顯優(yōu)勢，且中藥的劑量越大越明顯。但是從長遠(yuǎn)療效方面，中藥無明顯毒副作用更應(yīng)值得推廣與應(yīng)用，可創(chuàng)造社會(huì)及經(jīng)濟(jì)效益。

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