張博琛，張志，鄭湘臨*

(1.山東大學(xué) 化學(xué)與化工學(xué)院，山東 濟(jì)南 250100；2.通化谷紅制藥有限公司，吉林 梅河口 135000)

谷紅注射液的過(guò)敏性研究

張博琛1，張志2，鄭湘臨2*

(1.山東大學(xué) 化學(xué)與化工學(xué)院，山東 濟(jì)南 250100；2.通化谷紅制藥有限公司，吉林 梅河口 135000)

目的：評(píng)價(jià)谷紅注射液誘發(fā)過(guò)敏反應(yīng)的可能性。方法：通過(guò)腹腔注射0.5 mL/只受試制劑致敏豚鼠，14 d后靜脈注射2 mL/只受試制劑激發(fā)豚鼠，評(píng)價(jià)豚鼠全身主動(dòng)過(guò)敏反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)；另外通過(guò)腹腔注射受試制劑致敏大鼠，14 d后收集大鼠血清，皮下注射該血清用以致敏正常大鼠，24 h后靜脈注射受試制劑激發(fā)大鼠，評(píng)價(jià)大鼠皮膚被動(dòng)過(guò)敏反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)。結(jié)果：均未見(jiàn)過(guò)敏反應(yīng)發(fā)生。結(jié)論：受試制劑谷紅注射液誘發(fā)動(dòng)物產(chǎn)生過(guò)敏反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)較小。

谷紅注射液；全身主動(dòng)過(guò)敏；皮膚被動(dòng)過(guò)敏

谷紅注射液為乙酰谷酰胺和紅花提取物制成的滅菌水溶液，具有抗氧自由基、抗血小板聚集、舒張血管的作用，改善微循環(huán)，改善神經(jīng)細(xì)胞代謝，維持神經(jīng)應(yīng)激能力，改善腦功能，還可改善血流變及降低血脂。臨床廣泛用于腦血管疾病、腦外傷、神經(jīng)外科手術(shù)后、冠心病等[1]。但中藥注射劑成分較復(fù)雜，原料及提取工藝不穩(wěn)定，很多小分子物質(zhì)沒(méi)有相應(yīng)的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)，臨床對(duì)中藥注射劑變態(tài)反應(yīng)需引起足夠重視[2]。谷紅注射液在臨床使用過(guò)程中亦發(fā)現(xiàn)過(guò)敏性休克等不良反應(yīng)[3-7]。本研究根據(jù)I型變態(tài)反應(yīng)原理，分析谷紅注射液誘導(dǎo)試驗(yàn)動(dòng)物引起過(guò)敏反應(yīng)的可能性及原因。

1 材料

1.1 試藥

谷紅注射液(規(guī)格：5 mL，批號(hào)：20120814，通化谷紅制藥有限公司)、卵白蛋白(Sigma，批號(hào)：A5253)、吸附百白破聯(lián)合疫苗(武漢生物制品研究所，批號(hào)：201100603-1)、硫化鈉(上海統(tǒng)亞化工科技發(fā)展有限公司，批號(hào)：080108)、伊文斯藍(lán)(北京化學(xué)試劑公司，批號(hào)：000525)。

1.2 動(dòng)物

10周齡雄性Hartley豚鼠，體重300～400 g，由遼寧長(zhǎng)生生物技術(shù)有限公司提供，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(遼)2010-0001；10周齡Wistar大鼠，雌雄兼用，體重250～300 g，由中國(guó)醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(遼)2008-0005。

2 方法

2.1 豚鼠全身主動(dòng)過(guò)敏試驗(yàn)[8-11]

2.1.1 豚鼠致敏 受試動(dòng)物隨機(jī)分為陽(yáng)性對(duì)照組、陰性對(duì)照組、谷紅注射液低劑量組、谷紅注射液高劑量組，每組6只。陽(yáng)性對(duì)照組腹腔注射1%卵白蛋白0.5 mL/只；陰性對(duì)照組腹腔注射0.9%氯化鈉溶液0.5 mL/只；谷紅注射液低劑量組腹腔注射谷紅注射液0.9%氯化鈉溶液2倍稀釋液0.5 mL/只；谷紅注射液高劑量組腹腔注射谷紅注射液0.5 mL/只(即低劑量組的2倍劑量)。上述給藥，隔日1次，共3次。

2.1.2 豚鼠激發(fā) 致敏末次給藥后第14天一次性靜脈注射2 mL/只相應(yīng)藥物進(jìn)行激發(fā)。

2.1.3 結(jié)果評(píng)價(jià) 激發(fā)后觀察癥狀3 h，參照表1，反映級(jí)數(shù)達(dá)2級(jí)(含2級(jí))以上，認(rèn)為該受試物出現(xiàn)過(guò)敏反應(yīng)。

表1 過(guò)敏癥狀評(píng)價(jià)表

2.2 大鼠皮膚被動(dòng)過(guò)敏試驗(yàn)[8，11-12]

2.2.1 抗血清的制備 受試動(dòng)物隨機(jī)分為陽(yáng)性對(duì)照組、陰性對(duì)照組、谷紅注射液低劑量組、谷紅注射液高劑量組，每組6只，雌雄各半。陽(yáng)性對(duì)照組腹腔注射5 mg·mL-1卵白蛋白溶液3.57 mL·kg-1，及白百破疫苗0.5 mL/只(含百日咳疫苗效價(jià)≥4.0 IU，僅第一次使用)；陰性對(duì)照組腹腔注射0.9%氯化鈉溶液3.57 mL·kg-1；谷紅注射液低劑量組腹腔注射谷紅注射液0.9%氯化鈉溶液2倍稀釋液3.57 mL·kg-1(由成人臨床最大用量換算得)；谷紅注射液高劑量組腹腔注射谷紅注射液3.57 mL·kg-1(即低劑量組的2倍劑量)。上述給藥，隔日1次，共3次。14 d后采血，2 000 r·min-1離心10 min，分離血清。

2.2.2 大鼠被動(dòng)致敏 上述各組抗血清以0.9%氯化鈉溶液稀釋成1∶2，1∶8，1∶32 3種不同濃度。取正常大鼠24只，隨機(jī)分為陽(yáng)性對(duì)照組、陰性對(duì)照組、谷紅注射液低劑量組、谷紅注射液高劑量組，每組6只，雌雄各半，在其背中線兩側(cè)預(yù)先脫毛(3×4)cm2共3處，皮內(nèi)注射相應(yīng)組別的3種不同濃度抗血清各0.1 mL。

2.2.3 大鼠激發(fā) 大鼠被動(dòng)致敏24 h后，各組靜脈注射與致敏劑量相同的激發(fā)抗原加等量的伊文思蘭染料(1%)共1 mL。

2.2.4 結(jié)果評(píng)價(jià) 30 min后斷頭處死各組動(dòng)物，剪取背部皮膚，測(cè)量皮膚內(nèi)層的斑點(diǎn)大小。皮膚內(nèi)層斑點(diǎn)直徑大于5 mm者判定為被動(dòng)過(guò)敏陽(yáng)性。

2.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS 16.0軟件包，大鼠被動(dòng)過(guò)敏陽(yáng)性率差異采用x2檢驗(yàn)，定義P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 受試藥物對(duì)受試動(dòng)物體重變化的影響

全身主動(dòng)過(guò)敏試驗(yàn)過(guò)程中，各組豚鼠體重變化趨勢(shì)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)圖1；制備抗血清的各組大鼠在試驗(yàn)過(guò)程中體重變化趨勢(shì)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)圖2。

3.2 豚鼠全身主動(dòng)過(guò)敏反應(yīng)

給藥激發(fā)后，陽(yáng)性對(duì)照組6只豚鼠均出現(xiàn)痙攣、抽搐、休克死亡；陰性對(duì)照組、谷紅注射液低劑量組、谷紅注射液高劑量組均未見(jiàn)明顯反應(yīng)。評(píng)分結(jié)果見(jiàn)表2。

圖1 谷紅注射液對(duì)豚鼠體重變化的影響

圖2 谷紅注射液對(duì)大鼠體重變化的影響

表2 谷紅注射液主動(dòng)過(guò)敏試驗(yàn)

3.3 大鼠皮膚被動(dòng)過(guò)敏反應(yīng)

試驗(yàn)中陰性對(duì)照組和谷紅注射液低、高劑量組受試動(dòng)物各滴度皮膚內(nèi)層斑點(diǎn)直徑均小于5 mm，陽(yáng)性率均為0；陽(yáng)性對(duì)照組受試動(dòng)物各滴度皮膚內(nèi)層斑點(diǎn)直徑均大于5 mm，陽(yáng)性率均為100%，見(jiàn)圖3；谷紅注射液低、高劑量組各滴度抗血清致皮膚被動(dòng)過(guò)敏的陽(yáng)性率顯著低于陽(yáng)性對(duì)照組(P=0.002)；而谷紅注射液低、高劑量組與陰性對(duì)照組比較，陽(yáng)性率均為0，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)表3。

圖3 谷紅注射液大鼠皮膚被動(dòng)過(guò)敏試驗(yàn)反應(yīng)

表3 大鼠皮膚被動(dòng)過(guò)敏試驗(yàn)結(jié)果/mm

注：(1)括號(hào)內(nèi)數(shù)字為陽(yáng)性率；(2)*表示與陽(yáng)性對(duì)照組比較，P=0.002；△表示與陰性對(duì)照組比較，陽(yáng)性率均為0，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

4 討論

臨床上藥物過(guò)敏反應(yīng)常見(jiàn)遲發(fā)型過(guò)敏反應(yīng)(Ⅳ型)，但癥狀常常較輕，易于控制，而過(guò)敏性休克(屬Ⅰ型過(guò)敏反應(yīng))一旦發(fā)生，若處置不當(dāng)，常常危及生命。因此本研究著重考察谷紅注射液導(dǎo)致Ⅰ型過(guò)敏反應(yīng)發(fā)生的可能性。

研究以原國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局頒發(fā)的《化學(xué)藥物刺激性、過(guò)敏性和溶血性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》為依據(jù)，結(jié)合受試制劑具體情況，設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案。全身主動(dòng)過(guò)敏試驗(yàn)是根據(jù)藥物初次進(jìn)入體內(nèi)，可刺激機(jī)體產(chǎn)生相應(yīng)的抗體，當(dāng)藥物再次進(jìn)入體內(nèi)時(shí)與其抗體結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物，導(dǎo)致肥大細(xì)胞釋放組胺等過(guò)敏介質(zhì)，從而引起過(guò)敏反應(yīng)。皮膚被動(dòng)過(guò)敏試驗(yàn)(PCA)則是將致敏動(dòng)物的血清皮內(nèi)注射于正常動(dòng)物，血清中IgE抗體與肥大細(xì)胞受體結(jié)合，使動(dòng)物被動(dòng)致敏，當(dāng)應(yīng)用致敏抗原激發(fā)時(shí)，引起局部肥大細(xì)胞釋放過(guò)敏介質(zhì)，從而使局部血管的通透性增加，激發(fā)時(shí)一同注入的染料可于皮內(nèi)注射部位滲出，形成藍(lán)斑。二者均可評(píng)價(jià)受試藥品誘發(fā)動(dòng)物產(chǎn)生Ⅰ型過(guò)敏反應(yīng)的可能性。

通過(guò)豚鼠全身主動(dòng)過(guò)敏試驗(yàn)及大鼠皮膚被動(dòng)過(guò)敏試驗(yàn)研究受試制劑谷紅注射液誘發(fā)動(dòng)物產(chǎn)生Ⅰ型過(guò)敏反應(yīng)的可能性，結(jié)果未發(fā)現(xiàn)谷紅注射液誘發(fā)試驗(yàn)動(dòng)物出現(xiàn)過(guò)敏反應(yīng)現(xiàn)象，與陽(yáng)性對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而與0.9%氯化鈉溶液陰性對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明該制劑誘發(fā)Ⅰ型過(guò)敏反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)較小。雖然谷紅注射液引起變態(tài)反應(yīng)的病例少見(jiàn)，但谷紅注射液中的紅花提取液本身成分復(fù)雜，含有鞣質(zhì)、酶、皂苷、角質(zhì)蛋白等多種大分子物質(zhì)，靜脈滴注后，上述物質(zhì)作為抗原，具有高度致敏活性，易導(dǎo)致變態(tài)反應(yīng)。因此，臨床使用本品前應(yīng)詳細(xì)詢問(wèn)患者有無(wú)紅花制劑過(guò)敏史；另外，對(duì)有過(guò)敏體質(zhì)患者應(yīng)慎用本品；并且在用藥過(guò)程中，應(yīng)密切觀察，加強(qiáng)用藥監(jiān)護(hù)，防止過(guò)敏反應(yīng)的發(fā)生，以保證用藥安全。

[1] 張茁.谷紅注射液治療急性腦梗死有效性和安全性的多中心、隨機(jī)、開(kāi)放性臨床觀察[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2010，37(22)：4382-4385.

[2] 王輝.中藥注射劑致過(guò)敏性休克448例文獻(xiàn)分析[J].中國(guó)藥物應(yīng)用與監(jiān)測(cè)，2008，5(4)：45-46，62.

[3] 金立軍.金特佳注射液致皮膚瘙癢癥2例分析[J].中國(guó)誤診學(xué)雜志，2007，7(19)：4670-4671.

[4] 鄭剛，張震，馬軍.谷紅注射液致遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)1例[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2006，15(24)：3416.

[5] 李慧，劉順良，尹曉飛.谷紅注射液致過(guò)敏反應(yīng)1例[J].藥物流行病學(xué)雜志，2008，17(2)：87.

[6] 楊玲，劉向龍，王玲勉.谷紅注射液致遲發(fā)性過(guò)敏性休克1例[J].中國(guó)誤診學(xué)雜志，2006，6(20)：4092.

[7] 彭均，金淑萍.谷紅注射液不良反應(yīng)[J].中國(guó)誤診學(xué)雜志，2009，9(33)：8308.

[8] 國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局.化學(xué)藥物刺激性、過(guò)敏性和溶血性研究技術(shù)指導(dǎo)原則[M].2005：13-14，19-21，25-27.

[9] 陳奇.中藥藥理研究方法學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1993：163-169.

[10] 孫敬方.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物方法學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2001：210.

[11] 徐叔云，卞如溓，陳修，等.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)[M].第3版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2002：234-237，1407-1409.

[12] 國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局.中藥、天然藥物免疫毒性(過(guò)敏性、光過(guò)敏反應(yīng))研究的技術(shù)指導(dǎo)原則[M].2005：25.

AnaphylacticResponseofSafflowerExtractandAceglutamideInjection

ZHANG Bo-chen1，ZHANG Zhi2，ZHENG Xiang-lin2*

(1.ChemistryandChemicalEngineeringCollegeofShandongUniversity，Jinan250100，China；2.TonghuaguhongPharmaceuticalCompanyLimited，Meihekou135000，China)

Objective:To evaluate the probability of anaphylactic response induced by Safflower Extract and Aceglutamide Injection.Methods：In this study，every cavia cobaya was given the product 0.5 mL by intraperitoneal injection for sensitization，and excitation was performed 14 days later by intravenous injecting 0.2 mL the same product，to evaluate the risk of active systemic anaphylaxis(ASA)； Every rat was given the product by intraperitoneal injection for sensitization，and its serum was collected 14 days later to give normal rats by intraperitoneal injection.The excitation of normal rats was done after 24 hours for evaluate the risk of passive cutaneous anaphylaxis(PCA).Results：No anaphylactic response induced by the product was found in this study.Conclusion：Safflower Extract and Aceglutamide Injection has little probability of anaphylactic response.

Safflower Extract and Aceglutamide Injection；ASA；PCA

2012-12-05)

*

鄭湘臨，E-mail：df-zhangxianglin@163.com