秦 南，蘇艷芳 ，*，王亞笛，張 慧，吳振海，高秀梅

1天津大學藥物科學與技術學院，天津 300072;2天津中醫(yī)藥大學天津市中藥化學與分析重點實驗室，天津 300193;3西北農(nóng)林科技大學生命科學學院，楊凌 712100

城口東俄芹(Tongoloa silaifolia)別名甜三七(秦嶺)，為傘形科東俄芹屬(Tongoloa)植物。該屬植物全世界有15種，其中13種為我國特有［1］。城口東俄芹生長在海拔2000～3500 m的山坡林下或高山草地，分布于陜西(秦嶺及太白山等地)、四川、湖北、云南等省。其性平，味甘、微苦，具有止血鎮(zhèn)痛、活血散瘀、祛風濕、強筋骨等功效，用于跌打損傷、外傷出血、崩漏、風濕性腰腿及周身疼痛、勞傷等［2］。尚未見有關城口東俄芹和東俄芹屬植物的化學成分研究報道，本實驗從城口東俄芹的乙醇提取物中分離鑒定了6個化合物，分別為suberosin(1)、crenulatin(2)、7-羥基-8-甲氧基香豆素(3)、luteolin-7-O-α-L-arabinopyranosyl(1→6)-β-D-glucopyranoside(4)、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷 (5)、daphnolin(6)。以上化合物均首次從東俄芹屬中分離得到，其中3、4和6首次從傘形科植物中分離得到。

圖1 化合物1～6的化學結(jié)構(gòu)Fig.1 The chemical structures of compounds 1-6

1 儀器與材料

核磁共振譜用 Bruker AvanceⅢ 400 MHz和Varian INOVA 500 MHz核磁共振儀測定;柱色譜用硅膠(100～200、200～300目)及薄層色譜用硅膠GF254均為青島海洋化工廠產(chǎn)品;ODS(Chromatorex，20～45 μm)為 Fuji Silysia Chemical Ltd 生產(chǎn);柱色譜用聚酰胺(60～80目)及聚酰胺薄膜均為浙江臺州市路橋四甲生化塑料廠生產(chǎn);D101型大孔吸附樹脂為天津市海光化工有限公司產(chǎn)品;葡聚糖凝膠Sephadex LH-20為Pharmacia產(chǎn)品;所用試劑均為分析純。

城口東俄芹全草于2007年7～8月采自陜西省眉縣，經(jīng)西北農(nóng)林科技大學吳振海教授鑒定，植物標本(No.S200709001)保存于天津大學藥學院天然藥物化學實驗室。

2 提取與分離

城口東俄芹干燥全草0.935 kg，用95%乙醇于室溫下冷浸2 d后分別用95%乙醇回流提取3次，60%乙醇回流提取2次，每次2 h，合并提取液，減壓回收乙醇得到無醇味濃縮液，加適量水混懸，依次用乙酸乙酯和正丁醇萃取，得到乙酸乙酯萃取物45.0 g，正丁醇萃取物 62.5 g。

乙酸乙酯萃取物(45.0 g)經(jīng)硅膠柱色譜，用石油醚-乙酸乙酯，乙酸乙酯-甲醇-水梯度洗脫，共得到132個流分:流分16～22合并后經(jīng)兩次硅膠柱色譜，石油醚-乙酸乙酯梯度洗脫，得到化合物1(50 mg);流分57～72合并后經(jīng)聚酰胺柱色譜，二氯甲烷-丙酮梯度洗脫，結(jié)合重結(jié)晶純化(石油醚)，得到2(10 mg)，3(15 mg)。

正丁醇萃取物和水部分(260.0 g)經(jīng)D101大孔吸附樹脂柱，依次用水、30%乙醇、50%乙醇和95%乙醇洗脫，30%乙醇洗脫物(29.0 g)經(jīng)聚酰胺柱色譜，乙酸乙酯-甲醇梯度洗脫，共得到90個流分:流分73～82合并后經(jīng)聚酰胺柱色譜，乙酸乙酯-甲醇-水梯度洗脫，再經(jīng)聚酰胺柱色譜，二氯甲烷-甲醇梯度洗脫，結(jié)合重結(jié)晶純化(甲醇)，得到4(8 mg)。50%乙醇洗脫物(15.9 g)經(jīng)硅膠柱色譜，二氯甲烷-甲醇-水梯度洗脫，共得到87個流分:流分49～59合并后經(jīng)聚酰胺柱色譜，二氯甲烷-甲醇梯度洗脫，再經(jīng)ODS反相硅膠柱色譜純化，44%甲醇-水洗脫，得到化合物5(12 mg)。流分60～63合并后經(jīng)兩次聚酰胺柱色譜，二氯甲烷-甲醇梯度洗脫，再經(jīng)硅膠柱色譜，二氯甲烷-甲醇梯度洗脫，最后經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜，甲醇洗脫，得到化合物6(15 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1 白色針狀結(jié)晶，C15H16O3，易溶于氯仿，1H NMR(CDCl3，400 MHz)δ:7.64(1H，d，J=9.6 Hz，4-H)，7.20(1H，s，5-H)，6.80(1H，s，8-H)，6.25(1H，d，J=9.6 Hz，3-H)，5.30(1H，t，J=7.6 Hz ，2'-H)，3.92(3H，s，7-OCH3)，3.33(2H，d，J=7.2 Hz，1'-H)，1.72(3H，s，4'-CH3)，1.79(3H，s，5'-CH3);13C NMR(CDCl3，100 MHz)δ:161.7(C-2)，160.9(C-9)，154.7(C-7)，143.8(C-4)，133.9(C-3')，127.7(C-10)，127.6(C-5)，121.6(C-2')，113.0(C-3)，112.1(C-6)，98.7(C-8)，56.1(7-OCH3)，28.0(C-1')，26.0(C-5')，18.0(C-4')。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻［3，4］報道基本一致，鑒定化合物1為suberosin。

化合物2 淺灰黃色片狀結(jié)晶，C11H8O4，易溶于氯仿，1H NMR(CDCl3，400 MHz)δ:10.4(1H，s，6-CHO)，8.02(1H，s，5-H)，7.72(1H，d，J=9.6 Hz，4-H)，6.91(1H，s，8-H)，6.36(1H，d，J=9.6 Hz，3-H)，4.04(3H，s，8-OCH3);13C NMR(CDCl3，100 MHz)δ:187.9(6-CHO)，164.4(C-7)，159.9(C-2)，159.8(C-9)，143.4(C-4)，129.2(C-5)，122.4(C-10)，114.8(C-3)，112.7(C-6)，100.1(C-8)，56.6(7-OCH3)。1H NMR 波譜數(shù)據(jù)與文獻［5］報道基本一致，鑒定化合物2為crenulatin。

化合物3 淺灰黃色片狀結(jié)晶，C10H8O4，易溶于甲醇、氯仿，1H NMR(CD3OD，400 MHz)δ:7.86(1H，d，J=9.6 Hz，4-H)，7.23(1H，d，J=8.4 Hz，5-H)，6.87(1H，d，J=8.4 Hz，6-H)，6.22(1H，d，J=9.6 Hz，3-H)，3.96(3H，s，8-OCH3);13C NMR(CD3OD，100 MHz)δ:163.2(C-2)，155.5(C-4)，149.7(C-7)，146.5(C-9)，136.0(C-8)，124.9(C-5)，114.8(C-10)，114.2(C-3)，112.5(C-6)，61.8(8-OCH3)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻［6］報道基本一致，鑒定化合物3為7-羥基-8-甲氧基香豆素。

化合物4 黃色粉末，C26H28O15，易溶于二甲基亞砜，1H NMR(DMSO-d6，400 MHz)δ:7.48(1H，d，J=8.4 Hz，6'-H)，7.46(1H，d，J=8.4 Hz，2'-H)，6.91(1H，d，J=8.0 Hz，5'-H)，6.79(1H，d，J=1.6 Hz，8-H)，6.75(1H，s，3-H)，6.46(1H，d，J=1.6 Hz，6-H)，5.01(1H，d，J=7.2 Hz，1''-H)，4.18(1H，d，J=6.0 Hz，1'''-H)，3.95(1H，br d，J=10.4 Hz，6''-H)，3.27 ～3.66(m，8H，2''-H ～5''-H and 2'''-H ～ 5'''-H);13C NMR(DMSO-d6，100 MHz)δ:182.4(C-4)，165.1(C-2)，163.4(C-7)，161.6(C-5)，157.5(C-9)，150.4(C-4')，146.2(C-3')，121.9(C-1')，119.8(C-6')，116.5(C-5')，114.1(C-2')，105.9(C-10)，103.6(C-3)，103.5(C-1''')，100.4(C-1'')，100.1(C-6)，95.2(C-8)，76.7(C-5'')，76.1(C-3'')，73.6(C-2'')，72.9(C-2''')，71.0(C-3''')，70.0(C-4'')，68.1(C-6'')，67.6(C-4''')，65.0(C-5''')。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻［7］報道基本一致，鑒定化合物4為luteolin-7-O-α-L-arabinopyranosyl(1 → 6)-β-D-glucopyranoside。

化合物5 黃色固體，C21H20O10，易溶于二甲基亞砜，1H NMR(DMSO-d6，400 MHz)δ:12.97(1H，s，5-OH)，10.41(1H，s，4'-OH)，7.97(2H，d，J=8.4 Hz，2'-H and 6'-H)，6.95(2H，d，J=8.8 Hz，3'-H and 5'-H)，6.88(1H，s，3-H)，6.84(1H，s，8-H)，6.45(1H，s，6-H)，5.07(1H，d，J=6.8 Hz，1''-H)，3.19 ～ 3.73(m，5H，2''-H ～ 6''-H);13C NMR(DMSO-d6，100 MHz)δ:182.5(C-4)，164.8(C-2)，163.5(C-7)，161.9(C-5)，161.6(C-4')，157.4(C-9)，129.1(C-2'and C-6')，121.5(C-1')，116.5(C-3'and C-5')，105.8(C-10)，103.6(C-3)，100.5(C-1'')，100.0(C-6)，95.4(C-8)，77.7(C-5'')，76.9(C-3'')，73.6(C-2'')，70.1(C-4'')，61.1(C-6'')。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻［8］報道基本一致，鑒定化合物5為芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物6 淡黃色粉末，C24H20O13，易溶于二甲基亞砜，1H NMR(DMSO-d6，400 MHz)δ:8.32(1H，d，J=9.6 Hz，4-H)，8.02(1H，d，J=9.6 Hz，4'-H)，7.50(1H，d，J=8.8 Hz，5'-H)，7.00(1H，d，J=8.4 Hz，6'-H)，6.38(1H，d，J=9.6 Hz，3-H)，6.25(1H，s，6-H)，6.25(1H，d，J=9.2 Hz，3'-H)，4.46(1H，d，J=7.6 Hz，1''-H);13C NMR(DMSO-d6，125 MHz)δ:160.6(C-2)，160.3(C-2')，154.6(C-7')，148.9(C-7)，148.8(C-9')，146.9(C-5)，145.4(C-4')，143.6(C-9)，139.7(C-4)，129.7(C-8)，128.5(C-8')，126.7(C-5')，114.3(C-3)，113.2(C-3')，113.0(C-6')，112.6(C-10')，105.3(C-10)，102.9(C-1'')，97.7(C-6)，77.6(C-3'')，76.4(C-5'')，73.5(C-2'')，69.1(C-4'')，60.1(C-6'')。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻［9］報道基本一致，鑒定化合物6為daphnolin。

1 Pan ZH，Watson MF.20.Tongoloa H，Wolff，Notizbl.Bot.Gart.Berlin-Dahlem.9:279.1925.東俄芹屬 dong e qin shu.Flora of China，2005，14:34-37.

2 Guo ZJ(郭增軍).Shaanxi Qiyao(陜西七藥).Shaanxi:Shaanxi Science and Technology Press，2001.60-61.

3 Tosum A.Occurrence of coumarins in Seseli hartvigii growing in Turkey.Chem Nat Compd，2006，42:608-609.

4 El-Shafae AM，Ibrahim MA.Bioactive kaurane diterpens and coumarins from Fortunella margarita.Pharmazie，2003，58:143-147.

5 Wu TS，F(xiàn)urukawa H.Acridone alkaloids.Ⅶ.1)Constituents of Citrus sinensis Osbeck var.brasiliensis Tanaka.Isolation and characterization of three new acridone alkaloids，and a new coumarin.Chem Pharm Bull，1983，31:901-906.

6 Wu LJ(吳立軍).Shi yong you ji hua he wu guang pu jie xi(實用有機化合物光譜解析).Beijing:People's Health Press，2009.182-183.

7 Bylka W，Matlawska I.Rutinosides and vicianosides of quercetin，apigenin and luteolin from Symphoricarpus albus L.Blake(Caprifoliaceae).Acta Pol Pharm，1999，56:249-252.

8 Ma YM，Zhang ZW，F(xiàn)eng CL.Flavonoids of Broussonetia papyrifera.Chem Nat Compd，2009，45:881-882.

9 Sun WX，Zhang Q，Jiang JQ.Chemical constituents of Daphne giraldii Nitsche.J Integr Plant Biol，2006，48:1498-1501.