李 芳 張軍茹 郭 妮 馮一凡 王衛(wèi)鋒 陜西省中醫(yī)藥研究院（西安710003）

青白通痹膠囊由青風(fēng)藤、白芍、甘草等藥物組成，具有消腫通痹止痛，舒筋活絡(luò)之功效，用于風(fēng)濕、痛風(fēng)、骨關(guān)節(jié)病等所致的關(guān)節(jié)腫脹、僵硬、疼痛、屈伸不利。該藥是在陜西省中醫(yī)醫(yī)院內(nèi)分泌科多年臨床經(jīng)驗(yàn)方的基礎(chǔ)上開發(fā)而成。為了有效控制青白通痹膠囊的質(zhì)量，本實(shí)驗(yàn)采用薄層色譜法對處方中青風(fēng)藤、白芍進(jìn)行了定性鑒別；采用反相高效液相色譜法對青風(fēng)藤中的青藤堿進(jìn)行了含量測定，并對其方法學(xué)進(jìn)行考察，旨在為該產(chǎn)品的質(zhì)量控制提供客觀的定性定量評價(jià)方法。

1 儀器與試藥 1.1 儀器 Waters高效液相色譜儀；C18色譜柱（Diamosil 4.6×250mm，5μm）、KH－300DE型數(shù)控超聲清洗器（昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司）、BP211D 型電子分析天平（德國賽多利斯天平有限公司）、939薄層制板器（重慶市南岸貝爾德儀器技術(shù)廠）；101型電熱鼓風(fēng)干燥箱（北京市永光明醫(yī)療儀器廠）；UV－8三用紫外分析儀（無錫科達(dá)儀器廠）；超純水器（Millipore）。

1.2 試藥 青風(fēng)藤對照藥材（批號121055－200302）；白芍對照藥材（批號121049－200502；青藤堿對照品（批號：0774－200206）；芍藥苷對照品（批號：110736－200833）均購自中國藥品生物制品檢定所。

硅膠G（薄層層析用，化學(xué)純）購自青島海洋化工廠；色譜用水均為超純水；乙腈為HPLC 級試劑（美國Fisher scintific），其它試劑均為分析純（天津富宇化學(xué)試劑廠）。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層色譜鑒別［1－3］2.1.1 青風(fēng)藤的薄層鑒別：取本品內(nèi)容物約1.5g研細(xì)，加乙醇20 mL，加熱回流30min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)右掖? mL 使溶解，作為供試品溶液。另取青風(fēng)藤對照藥材1g，同法制成對照藥材溶液。再取青藤堿對照品，加甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。另外，同法制備缺青風(fēng)藤的陰性對照溶液。照薄層色譜法（中國藥典2010年版一部附錄ⅥB）試驗(yàn)，吸取上述4種溶液各2μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G 薄層板上，以甲醇－濃氨水－水（8：1：1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以改良碘化鉍鉀試液。結(jié)果供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對照無干擾。

2.1.2 白芍的薄層鑒別：取本品內(nèi)容物約1.5g，研細(xì)，加50%的甲醇50mL，超聲30min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0mL 超聲振蕩使溶解，用乙醚萃取兩次，每次30mL，取水層，用水飽和的正丁醇萃取兩次，每次30mL，合并正丁醇液，水浴蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，作為供試品溶液。另取白芍對照藥材1g，同法制備，作為對照藥材溶液。再取芍藥苷對照品，加甲醇制成每1mL 含1mg的溶液，作為對照品溶液。另外，同法制成缺失白芍的陰性對照溶液。照薄層色譜法（中國藥典2010年版一部附錄ⅥB）試驗(yàn)，吸取上述4種溶液各10μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G 薄層板上，以三氯甲烷－乙酸乙酯－甲醇－甲酸（40：5：10：0.25）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸液，在105℃加熱至斑點(diǎn)清晰。結(jié)果供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對照無干擾。

2.2 含量測定［4－8］2.2.1 色譜條件：色譜柱：Diamosil C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：乙腈－0.78%磷酸二氫鈉（12：88）；檢測波長為262nm；流速為1.0mL·min－1；柱溫：室溫；進(jìn)樣量：10μL。理論塔板數(shù)按青藤堿峰計(jì)算不低于1500，樣品中青藤堿與其他成分分離度大于1.5，陰性對照無干擾。色譜圖見圖1。

2.2.2 對照品溶液的制備：取青藤堿對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1mL 含0.15mg的溶液，作為對照品溶液。

2.2.3 供試品溶液的制備：取本品內(nèi)容物約0.4g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入70%乙醇25mL，稱定重量，超聲處理（功率250W，頻率40KHz）30min，放冷，再稱定重量，用70%乙醇補(bǔ)足減失的重量，用0.45μm 微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

圖1 青藤堿對照品及樣品色譜圖

2.2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線：取濃度為0.15792 mg·mL－1的青藤堿對照品溶液2、4、6、8、10、12uL，按2.2.1項(xiàng)下進(jìn)行測定，以峰面積（Y）對進(jìn)樣量（X）進(jìn)行線性回歸，標(biāo)準(zhǔn)曲線方程Y＝146481X＋35053，r＝0.9999（n＝6）。結(jié)果表明，青藤堿在0.31584～1.89504ug呈良好的線性關(guān)系。

2.2.5 精密度試驗(yàn)：精密吸取對照品溶液（0.15792mg·mL－1），按2.2.1項(xiàng)下色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6次，測定峰面積，RSD＝0.75%，表明儀器精密度良好。

2.2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)： 取同一份樣品，按2.2.3項(xiàng)下方法制成供試品溶液，分別于0、1、2、3、4、5、6h進(jìn)樣，測定峰面積，RSD＝0.64%。表明供試品溶液在6h內(nèi)較穩(wěn)定。

2.2.7 重復(fù)性試驗(yàn)： 取同一批樣品6份，分別按2.2.3項(xiàng)下方法制成供試品溶液，測定青藤堿含量，平均含量為1.68mg／粒，RSD＝1.22%，說明重復(fù)性良好。

2.2.8 回收率試驗(yàn)：取已知青藤堿含量的同一批號的樣品0.2g，精密稱定，平行6份，分別精密加入青藤堿對照品溶液（0.5264mg·mL－1）2mL，再按2.2.3項(xiàng)下方法制成供試品溶液，測定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.2.9 樣品含量測定：分別取三批樣品，按上述方法制備供試品溶液，測定，青藤堿含量分別為1.65 mg／粒、1.57mg／粒、1.72mg／粒。

3 討 論 3.1 青風(fēng)藤是處方中的君藥 而青藤堿是青風(fēng)藤的主要活性成分，具有抗炎、免疫抑制、鎮(zhèn)痛、抗心律失常、降血壓等藥理作用［9］，為本制劑的主要有效成分之一，因此對青藤堿進(jìn)行定量分析，可更好地控制本品的質(zhì)量。

3.2 在對青風(fēng)藤中的青藤堿進(jìn)行含量測定時(shí)，曾對提取溶媒、提取時(shí)間、提取方法都進(jìn)行了考察，結(jié)果以70%的乙醇超聲提取30min為佳。

3.3 本試驗(yàn)所建立的青風(fēng)藤等藥材的薄層鑒別方法具有專屬性，陰性無干擾；反相高效液相色譜法定量青藤堿的方法準(zhǔn)確可靠、專屬性強(qiáng)、重復(fù)性良好，可有效地用于青白通痹膠囊的質(zhì)量分析與控制。

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