王 秋

甘寒養(yǎng)陰藥抗小鼠光老化損傷的實(shí)驗(yàn)研究

王 秋

光老化；甘寒養(yǎng)陰藥；抗衰老

皮膚光老化是由日光尤其是紫外線(xiàn)導(dǎo)致的一種皮膚慢性損傷，臨床表現(xiàn)如色斑、皺紋、皮膚干燥、發(fā)黃及紅血絲等。中藥治療是常用的一種治療手段。甘寒養(yǎng)陰藥是指藥性甘寒之品以生津養(yǎng)陰，主要是治療肺胃陰虛證的一種“養(yǎng)陰”方法，屬于八法中的“補(bǔ)法”范疇。國(guó)內(nèi)外對(duì)甘寒生津藥進(jìn)行了大量研究，認(rèn)為甘寒生津藥不僅可以扶正，而且還有一定的祛邪作用。甘寒養(yǎng)陰藥是否能有效預(yù)防或治療皮膚光老化，相關(guān)的實(shí)驗(yàn)研究尚不多[1]。本實(shí)驗(yàn)選擇麥冬、玉竹、石斛三味甘寒養(yǎng)陰藥作為代表藥物，旨在觀察其對(duì)光老化模型小鼠的拮抗效應(yīng)。研究報(bào)道如下。

1 材料和方法

1.1 材料麥冬、玉竹、石斛均購(gòu)自南京市藥材公司，經(jīng)中國(guó)藥科大學(xué)中藥鑒定教研室鑒定為正品（麥冬為百合科植物麥冬Ophiopogonjaponicas(Thunb.) Ker-Gawt.的塊根，玉竹為百合科植物玉竹Polygonatumodoratum(Mill.) Druce的干燥根莖，石斛為蘭科植物金釵石斛DendrobiumnobileLindl.的干燥莖。藥材粉碎后，分別稱(chēng)取麥冬、玉竹和石斛各100g，加水煎煮2次，合并濾液，濃縮至100ml，水煎液濃度1g/ml。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物采用昆明種小白鼠50只，體重20～24g，雌雄各半，由中國(guó)藥科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物分組和處理實(shí)驗(yàn)室溫度控制在23～25℃，全價(jià)顆粒飼料喂養(yǎng)。隨機(jī)分為麥冬組、石斛組、玉竹組、空白組及模型組，共五組，每組各10只。各組小鼠背部剃毛，面積3cm×3cm，以后在每次紫外線(xiàn)照射前重復(fù)剃毛；各中藥組小鼠中藥服藥量以臨床常用量為標(biāo)準(zhǔn)，按李儀奎《中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》[2]加大給藥量公式換算出小鼠中藥飼喂量，每天2次灌胃飼藥；空白組和模型組給予等量生理鹽水，每天2次灌胃，直至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。

1.2.2 光老化皮膚損傷小鼠造模方法除空白組外，各組小鼠在首次灌胃后，從第2周起進(jìn)行紫外線(xiàn)照射。照射時(shí)將小鼠用固定器固定，頭部區(qū)遮光，置于SS-04P型光療儀下照射，光療儀紫外燈管以UVA/320～420nm加UVB/280～320nm模擬日光組合配置。用紫外線(xiàn)輻照計(jì)監(jiān)控輻照強(qiáng)度，UVA輻照強(qiáng)度1.12mW/cm2，UVB 輻照強(qiáng)度0.118mW/cm2。輻照時(shí)間以小鼠開(kāi)始出現(xiàn)皮膚輕度泛紅為準(zhǔn)。每天照射一次，連續(xù)12周。

1.2.3 指標(biāo)測(cè)定最后一次紫外線(xiàn)照射后24h，斷頸處死小鼠，立即取下小鼠背部脫毛處全層皮膚（去除去皮下脂肪組織），再用6mm皮膚活檢鉆孔器，在處理好的脫毛區(qū)皮膚相對(duì)應(yīng)位置鉆取8片相等面積的皮膚組織。測(cè)定方法詳細(xì)參照試劑盒說(shuō)明書(shū)，分別測(cè)定SOD、GSH-Px活性和MDA、HYP含量[3]。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS 15.0統(tǒng)計(jì)軟件包，結(jié)果以（±s）表示，組間按方差分析進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)，P＜0.05為有顯著差異，P＜0.01為有極顯著差異。

2 結(jié)果

麥冬組SOD、GSH-Px的表達(dá)有極顯著性差異（P＜0.01），MDA、HYP表達(dá)有顯著性差異（P＜0.05）；石斛組SOD、GSH-Px、MDA、HYP的表達(dá)均有極顯著性差異（P＜0.01）；玉竹組SOD、GSH-Px的表達(dá)有極顯著性差異（P＜0.01），MDA、HYP表達(dá)有顯著性差異（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 麥冬、石斛、玉竹對(duì)UV慢性光損傷小鼠皮膚組織SOD、GSH-Px活性和MDA、HYP含量的影響(±s,n=10)

表1 麥冬、石斛、玉竹對(duì)UV慢性光損傷小鼠皮膚組織SOD、GSH-Px活性和MDA、HYP含量的影響(±s,n=10)

注：與模型組比較，*P＜0.01，**P＜0.05；與空白對(duì)照組比較，#P＜0.01

組別 SOD (U/mg prot) GSH-Px (U/mg prot) MDA (nmol/mg prot) HYP (ug/mg prot)麥冬組石斛組玉竹組空白組模型組245.00±14.93*246.20±28.09*236.67±18.98*158.55±21.23 268.63±19.88#17.44±3.12*18.76±1.45*16.33±2.14*21.89±2.69 9.93±1.78#8.99±1.21**8.03±0.95*9.12±1.34**6.45±0.88 11.35±0.69#0.52±0.04**0.43±0.05*0.55±0.06**0.39±0.03 0.61±0.05#

3 討論

皮膚老化包括自然老化和光老化，皮膚光老化是在自然老化的基礎(chǔ)上，由于長(zhǎng)期紫外線(xiàn)照射所致的皮膚結(jié)構(gòu)和功能的特征性改變。日光中的UVA和UVB是引起光老化最重要的因素。目前認(rèn)為紫外線(xiàn)照射皮膚后可致高度反應(yīng)的氧自由基形成，這些自由基通過(guò)與各種細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)相互作用，破壞皮膚的抗氧化系統(tǒng)，從而使皮膚細(xì)胞抗氧化酶活性降低（如超氧化物歧化酶和谷胱甘肽氧化酶）[4-5]，脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)產(chǎn)物如丙二醛（MDA）含量明顯升高。長(zhǎng)時(shí)間的紫外線(xiàn)照射，可導(dǎo)致真皮膠原合成受到明顯抑制；此外，過(guò)氧化脂質(zhì)或丙二醛（MDA）又能加速膠原蛋白的老化[6-7]，羥脯氨酸（HYP）是膠原蛋白特有的氨基酸之一，它的含量可以反映出真皮內(nèi)膠原蛋白的含量變化，而膠原含量又可反應(yīng)出皮膚的衰老程度?，F(xiàn)代研究表明中草藥及其提取物有改善組織結(jié)構(gòu)，清除體內(nèi)自由基，增強(qiáng)機(jī)體抗氧化酶活性，提高機(jī)體皮膚免疫功能等作用，故中藥是拮抗皮膚光老化的一種有效手段[8]。甘寒生津藥是指藥性甘寒之品以生津養(yǎng)陰，主要是治療肺胃陰虛證的一種“養(yǎng)陰”方法，屬于八法中的“補(bǔ)法”范疇。國(guó)內(nèi)外對(duì)甘寒生津藥進(jìn)行了大量研究，認(rèn)為甘寒生津藥不僅可以扶正，而且還有一定的祛邪作用，實(shí)驗(yàn)研究，甘寒生津藥多方面的藥理作用，如補(bǔ)充水電解質(zhì)及各種營(yíng)養(yǎng)成分、解熱抗炎、改善血液流變學(xué)、清除自由基等；但對(duì)于抗皮膚光老化的研究卻缺少系統(tǒng)性、深入性。本課題即在前人研究的基礎(chǔ)上，以傳統(tǒng)中醫(yī)基礎(chǔ)理論為指導(dǎo)，以動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方法為主，系統(tǒng)深入地研究甘寒生津藥的作用機(jī)理。有人認(rèn)為正虛是邪實(shí)是皮膚光老化的主要病理[9]，“邪之所湊，其氣必虛”，正虛即是陰津虧損，不能滋養(yǎng)濡潤(rùn)皮毛腠理，以致風(fēng)、熱、光毒等邪侵襲，光毒之邪性質(zhì)屬陽(yáng)，陽(yáng)邪傷陰，故光毒傷人，灼傷陰津，陰津虧損，無(wú)以制火，則邪熱更盛；“津液被火灼竭，則血行愈滯”，從而引發(fā)津虧熱盛血瘀即正虛邪實(shí)的病理變化，損傷機(jī)體的皮膚組織而導(dǎo)致光老化。光毒熱邪必需借助于充足的陰津方可制勝，甘寒養(yǎng)陰藥既可生津增液，又可清熱，也可活血，滋而不膩，清而不燥，即傳統(tǒng)中醫(yī)學(xué)“壯水制火”、“沃焦救焚”、“增水行舟”。故甘寒生津藥用于皮膚光老化是可行的，實(shí)驗(yàn)也證實(shí)了甘寒養(yǎng)陰藥對(duì)小鼠皮膚光老化有一定拮抗作用，如降低光老化小鼠皮膚中的丙二醛，增加羥脯氨酸含量，使超氧化物歧化酶和谷胱甘肽氧化酶活性增加。研究結(jié)果將拓展皮膚光老化臨床治療的新思路，擴(kuò)大甘寒養(yǎng)陰藥的臨床應(yīng)用，為臨床用藥提供新的理論指導(dǎo)，指導(dǎo)新藥開(kāi)發(fā)。

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R73-33

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1673-5846(2013)08-0275-02

中國(guó)藥科大學(xué)中藥學(xué)院，江蘇南京 211198