劉冰松 袁昕蓉

（1 遼寧中醫(yī)藥大學附屬第四醫(yī)院，遼寧 沈陽 110101；2 沈陽市食品藥品檢驗所，遼寧 沈陽 110013）

HPLC法測定婦科調(diào)經(jīng)顆粒中阿魏酸的含量

劉冰松1袁昕蓉2

（1 遼寧中醫(yī)藥大學附屬第四醫(yī)院，遼寧 沈陽 110101；2 沈陽市食品藥品檢驗所，遼寧 沈陽 110013）

目的 采用 HPLC 法測定婦科調(diào)經(jīng)顆粒中阿魏酸的含量。方法 采用 Diamonsil C18 （200mm×4.6mm，5μm）色譜柱，以甲醇 -0.1%磷酸水溶液（30 ∶ 70）為流動相，檢測波長 320nm。結(jié)果 阿魏酸進樣量在 0.0104 ～ 0.1040μg 范圍內(nèi)線性關系良好（r=0.9999），加樣回收率為 98.89%，RSD 為 1.05%。結(jié)論 本方法準確靈敏，重復性好，可用于婦科調(diào)經(jīng)顆粒中阿魏酸的含量測定。

阿魏酸；婦科調(diào)經(jīng)顆粒；高效液相色譜法

婦科調(diào)經(jīng)顆粒為2005年版中國藥典收載品種。處方由當歸、川芎、香附、白芍、赤芍、熟地等10味藥材組成，具有養(yǎng)血，調(diào)經(jīng)，止痛的功效，用于治療月經(jīng)不調(diào)，經(jīng)期腹痛。原標準中含量測定指標為芍藥苷。由于當歸為方中主藥，有必要對其進行含量測定。而且藥典同期收載的婦科調(diào)經(jīng)片的含量測定指標也是阿魏酸。所以我們選取了當歸中的有效成分阿魏酸作為含量測定的指標。由于方中另一味藥材川芎中也含有阿魏酸，所以本含量測定項是測定其中的當歸和川芎兩味藥材中的阿魏酸。我們在參考有關文獻[1,2]的基礎上，制定了婦科調(diào)經(jīng)顆粒有效成分—阿魏酸的含量測定方法，并進行了方法學考察，結(jié)果表明該方法靈敏、準確，重復性好，可用于該制劑中阿魏酸的含量測定。

1 儀器與試藥

島津LC-10A液相色譜儀，SPD-10A vp Plus檢測器，N2000色譜工作站；TB-114 電子分析天平（丹佛）；阿魏酸對照品（含量測定用，中檢所，批號：0773-9910），婦科調(diào)經(jīng)顆粒（自制，批號：20081101、20081102、20081103）；甲醇為色譜純，水為重蒸水；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 檢測波長的確定

精密稱取阿魏酸對照品適量，加甲醇稀釋至適當?shù)臐舛?，?90～400nm波長范圍內(nèi)掃描。掃描結(jié)果顯示：在320nm波長處，阿魏酸有最大吸收，故選擇320nm為檢測波長。

2.2 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱：Diamonsil C18 （200mm×4.6mm，5μm）流動相：甲醇-0.1%磷酸水溶液（30∶70）；檢測波長：320nm；流速：1mL/ min；理論板數(shù)以阿魏酸色譜峰計不低于5000。

2.3 專屬性試驗

2.3.1 對照品溶液制備：取阿魏酸對照品適量，制成每1mL約含2.5μg阿魏酸的甲醇溶液，即得。

2.3.2 供試品溶液制備：取本品細粉約5g，精密稱定，置于具塞錐形瓶里，精密加甲醇20mL，稱量，超聲處理（功率160W，頻率50kHz）20min，放冷，再稱重，加甲醇補足重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.3.3 陰性對照液制備：按工藝制備不含有當歸與川芎的陰性顆粒，取細粉適量，照上述方法制備陰性對照液。

2.3.4 取對照品溶液、供試品溶液、陰性液各20μL，分別進樣，結(jié)果顯示，處方中其他藥材及輔料不干擾阿魏酸的檢出（圖1）。

2.4 線性范圍

精密稱取阿魏酸對照品10.40mg，置100mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度。分別精密吸取0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、5.0mL上述溶液，置100mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度。分別吸取20μL注入色譜儀中，測定峰面積。將進樣量作為橫坐標，峰面積作為縱坐標，制作標準曲線，得回歸方程：Y=5459812.0x+1306.5 r=0.9999。結(jié)果表明：阿魏酸的進樣量在0.0104～0.1040μg范圍內(nèi)時，其線性關系良好。

2.5 精密度試驗

精密量取阿魏酸對照品溶液（濃度2.5μg/mL）20μL，連續(xù)進樣6針，照上述色譜條件分析，測定峰面積，RSD為0.65%，說明儀器精密度良好。

2.6 溶液穩(wěn)定性試驗

精密量取供試品溶液20 μL，分別在0、2、4、6、8、10h進樣，測定峰面積，RSD為0.95%，說明供試品溶液在10h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復性試驗

取一批婦科調(diào)經(jīng)顆粒（批號：20081101），制備6份供試品溶液，測定出樣品中的阿魏酸含量為11.51μg/g，RSD為1.03%，符合規(guī)定。

2.8 加樣回收率

精密稱取樣品（批號：20081101）細粉6份，每份約2.5g，每份精密加入對照品溶液2.5mL（10.40μg/mL），照供試品溶液制備方法操作，進樣20μL，測定其加樣回收率，結(jié)果見表1。

2.9 樣品含量測定

取3批樣品，按上述方法測定每批樣品的阿魏酸含量，結(jié)果見表2。

文中加樣回收率的問題，取同一濃度的供試品，用六個測定結(jié)果評價的方法是可行的。根據(jù)：中國藥典2010版一部附錄P130《中藥質(zhì)量標準分析方法驗證指導原則》中指出，取同一濃度的供試品，用6個測定結(jié)果進行評價，或設計3個不同濃度，用9個測定結(jié)果進行評價。說明我文中的驗證方法和專家所提的按3個量級加入的方法都是正確的。因此沒有修改。在中藥新藥研制中，用6個結(jié)果評價的方法更常用，化藥是必須要用9個結(jié)果評價的。

圖1 HPLC 色譜圖

表1 阿魏酸加樣回收率試驗結(jié)果

表2 三批樣品含量測定結(jié)果

回收率表中“樣品中的量”，個人認為其數(shù)值應該是取樣量乘以已知含量，即所取的樣品中總共含有多少目標待測物。如果按專家的意見換算成μg，其實上是進樣體積的樣品溶液中含有多少目標待測物，表1的第一列為“取樣量”，如果在第二列的“樣品中的量”給出的是進樣的量的話，容易引起誤解。同理，“加入量”、“測得量”也應該是總量，而非進樣量。至于說“測得量應在線性范圍內(nèi)”應該指進樣體積乘以進樣濃度的乘積即進樣量在線性范圍內(nèi)。我們在新藥申報資料中一般按文中的方法進行加樣回收率試驗并進行數(shù)據(jù)整理，沒有遇到過問題。在此，作者保留個人看法，但尊重專家和編輯的意見，將回收率表的第二、三、四列的數(shù)據(jù)換算成進樣質(zhì)量。

3 討 論

進行色譜條件篩選時，曾經(jīng)對乙腈-0.085%磷酸水溶液（17∶83）[1]，乙腈-0.3%乙酸水溶液（30∶70），甲醇-0.1%磷酸水溶液（30∶70）等不同流動相系統(tǒng)進行了比較，結(jié)果表明，以甲醇-0.1%磷酸水溶液（30∶70）作為流動相時，分離效果較好[2]，峰形對稱，保留時間適當，作為婦科調(diào)經(jīng)顆粒中阿魏酸的含量測定方法可行。

[1]國家藥典藥典委員會.中華人民 共和國藥典(一 部 )[M].北京:化 學工業(yè)出版社,2005:461.

[2]蔣心惠,張丹.RP-HPLC法測定普藏紅膠囊中阿魏酸的含量[J].華西藥學雜志,2001,16(4):374-375.

R927.2

：B

：1671-8194（2013）10-0070-03