張宏敏

膠質(zhì)母細(xì)胞瘤PTEN基因突變和Ki-67表達(dá)的研究

張宏敏

目的對(duì)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤內(nèi)部PTEN基因突變以及Ki-67表達(dá)情況進(jìn)行研究，并對(duì)兩者關(guān)系展開探討。方法取膠質(zhì)瘤石蠟切片102例為研究對(duì)象，其中膠質(zhì)母細(xì)胞瘤切片42例，對(duì)所選樣本行聚合酶鏈反應(yīng)-單鏈構(gòu)象多態(tài)性處理分析（PCR-SSCP），對(duì)其PTEN基因突變進(jìn)行檢測(cè)；并對(duì)Ki-67在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)行免疫組化SP檢測(cè)法進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中，PTEN基因突變發(fā)生率與剩余60例相比明顯更高（P＜0.05）；在Ki-67平均標(biāo)記指數(shù)方面，膠質(zhì)母細(xì)胞瘤與其它膠質(zhì)瘤相比數(shù)值更高（P＜0.05）。結(jié)論在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中，PTEN基因突變對(duì)其發(fā)生以及發(fā)展具有重要作用；其病理惡性程度則與Ki-67表達(dá)程度呈明顯的正相關(guān)；Ki-67表達(dá)程度同PTEN基因突變之間的關(guān)系也表現(xiàn)為正相關(guān)。

PTEN基因；Ki-67表達(dá)；膠質(zhì)母細(xì)胞瘤；基因突變

在膠質(zhì)瘤分型中，膠質(zhì)母細(xì)胞瘤具有極高的惡性程度，而相關(guān)治療技術(shù)的發(fā)展并未對(duì)其術(shù)后復(fù)發(fā)率以及致殘率產(chǎn)生任何有效改善，患者平均生存時(shí)間極低[1]。要使膠質(zhì)母細(xì)胞瘤當(dāng)前的治療狀況得到有效改善，則應(yīng)對(duì)影響瘤體發(fā)生及發(fā)展的主要相關(guān)因素進(jìn)行研究?；诖?，筆者對(duì)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤內(nèi)部PTEN基因突變以及Ki-67表達(dá)情況進(jìn)行研究，并對(duì)兩者關(guān)系展開探討，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料取2007年7月～2012年8月期間的膠質(zhì)瘤石蠟切片102例，其中膠質(zhì)母細(xì)胞瘤切片42例，其它類型膠質(zhì)瘤切片為60例。所有切片均與WHO相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)相符，均排除Cowden病家族史以及其它各類惡性腫瘤，所有患者術(shù)前均未進(jìn)行化學(xué)治療或放射治療。其中男71例，女31例，年齡12～79歲；35例為星形細(xì)胞瘤，15例為間變型星形細(xì)胞瘤，5例為少枝膠質(zhì)細(xì)胞瘤，5例為混合性少支-星形細(xì)胞瘤，42例為膠質(zhì)母細(xì)胞瘤。

1.2 試驗(yàn)方法①PCR-SSCP法檢測(cè)：在分級(jí)酒精中置入石蠟切片作脫蠟處理，并在PCR反應(yīng)管內(nèi)置入載玻片刮取物，同時(shí)取基因釋放劑加入并用微波爐進(jìn)行加熱后于PCR擴(kuò)增儀上放置。PCR擴(kuò)增：PCR反應(yīng)體積總量為40μl，其中包括1μmol/L每對(duì)引物、200μmol/L每種dNTP、雙蒸水0.5μl、amplitaq酶0.5μl、1×amplitaq PCR buffer，鎂離子濃度數(shù)值設(shè)定為2mmol/L；PCR反應(yīng)條件：94℃預(yù)變性10min，然后循環(huán)35或38次，每循環(huán)過(guò)程中均有94℃與56℃各30s以及72℃ 40s，72℃增加至10min[2]。檢測(cè)突變：取適量聚丙烯酰胺凝膠（12.0%），在其中置入PCR產(chǎn)物后實(shí)施SSCP檢測(cè)，若與正常腦組織相比，凝膠內(nèi)部的瘤組織2條待位置存在差異性則證實(shí)為基因突變[3]。②免疫組化檢測(cè)：采用微波抗原修復(fù)處理石蠟切片，然后實(shí)施免疫組化染色并判斷染色結(jié)果：陽(yáng)性細(xì)胞判定依據(jù)為細(xì)胞核呈現(xiàn)出棕黃色[4]，高倍鏡下計(jì)數(shù)為5個(gè)視野，細(xì)胞500個(gè)，對(duì)其中陽(yáng)性細(xì)胞所占比率進(jìn)行計(jì)算，并以計(jì)算結(jié)果為Ki-67LI數(shù)值，即Ki-67標(biāo)記指數(shù)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)本次試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，膠質(zhì)母細(xì)胞瘤及其它分型膠質(zhì)瘤內(nèi)部PTEN基因突變差異采用卡方檢驗(yàn)；膠質(zhì)母細(xì)胞瘤及其它分型膠質(zhì)瘤內(nèi)部Ki-67的表達(dá)差異、Ki-67表達(dá)與PTEN基因突變?cè)谀z質(zhì)母細(xì)胞瘤內(nèi)部的關(guān)系則用秩和檢驗(yàn)分析，P＜0.05表明差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 膠質(zhì)母細(xì)胞瘤及其它分型膠質(zhì)瘤內(nèi)部PTEN基因突變差異對(duì)比行PCR擴(kuò)增后，采用SSCP方法對(duì)所有擴(kuò)增物進(jìn)行檢測(cè)[5]，結(jié)果表明在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤病例中，PTEN基因發(fā)生突變例數(shù)為11（26%）；其它分型膠質(zhì)瘤中PTEN基因發(fā)生突變者僅1例。因此與其它分型膠質(zhì)瘤相比，膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中PTEN基因發(fā)生突變幾率更高[6]，差異顯著（P＜0.05），見表1。

表1 PTEN基因在不同腫瘤分型下突變幾率對(duì)比[n(%)]

2.2 Ki-67LI在不同分型膠質(zhì)瘤中的表達(dá)差異對(duì)比Ki-67LI在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中平均數(shù)值為（24.62 ±6.79），而在其它分型膠質(zhì)瘤中的平均數(shù)值則為（6.71±4.67），兩者數(shù)值具有顯著差異（P＜0.05）。

2.3 Ki-67表達(dá)與PTEN基因突變?cè)谀z質(zhì)母細(xì)胞瘤內(nèi)部的關(guān)系在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤患者中，PTEN基因發(fā)生突變的11例瘤體內(nèi)Ki-67指數(shù)明顯比未變異的31例更高，差異顯著（P＜0.05）。

3 討論

在本次研究中，與膠質(zhì)母細(xì)胞瘤相比，PTEN基因在非膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中的突變發(fā)生率明顯更低，這充分證明了PTEN基因發(fā)生突變的情況一般存在于具有高惡性程度的膠質(zhì)母細(xì)胞瘤體組織內(nèi)部，而很少發(fā)生于低惡性程度的其它膠質(zhì)瘤體組織內(nèi)[7-8]。而結(jié)合分子生物學(xué)相關(guān)研究數(shù)據(jù)可發(fā)現(xiàn)，與表皮生長(zhǎng)因子受體的過(guò)度表達(dá)及P53基因突變相比，PTEN基因發(fā)生突變對(duì)于膠質(zhì)母細(xì)胞瘤體組織的發(fā)生及發(fā)展進(jìn)程具有同樣重要的作用。

作為大分子蛋白質(zhì)的一種，Ki-67分布于細(xì)胞核內(nèi)部，并在細(xì)胞G1、S、G0周期中表達(dá)，其峰值位于M期，因而對(duì)于全增殖期的細(xì)胞來(lái)說(shuō)，Ki-67可作為一種有效的標(biāo)記物[9]。本次試驗(yàn)中，在Ki-67平均標(biāo)記指數(shù)方面，膠質(zhì)母細(xì)胞瘤與其它膠質(zhì)瘤相比數(shù)值更高，差異明顯，說(shuō)明膠質(zhì)瘤體組織的病理惡性程度與Ki-67在瘤體組織內(nèi)部表達(dá)呈顯著的正相關(guān)。也就是說(shuō)，隨著Ki-67表達(dá)的增高，瘤細(xì)胞所具有的增殖活性也隨之更大，因而對(duì)于膠質(zhì)瘤來(lái)說(shuō)，Ki-67表達(dá)指數(shù)可對(duì)其惡性程度作出標(biāo)志性判斷[10]。此外，在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤患者中，PTEN基因發(fā)生突變的11例瘤體內(nèi)Ki-67指數(shù)明顯比未變異的31例更高，也提示了Ki-67的表達(dá)強(qiáng)度與PTEN基因發(fā)生突變幾率之間存在正相關(guān)的關(guān)系[11]。

綜上所述，在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中，PTEN基因突變對(duì)其發(fā)生以及發(fā)展具有重要作用；其病理惡性程度則與Ki-67表達(dá)程度呈明顯的正相關(guān)；Ki-67表達(dá)程度同PTEN基因突變之間的關(guān)系也表現(xiàn)為正相關(guān)。

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Study on the Expression of Ki-67 and Mutation of PTEN Gene in Glioblastoma

Zhang Hongmin

ObjectiveTo study the glioblastoma internal PTEN gene mutation and Ki-67 expression,and to probe into the relationship between the two.Methods102 cases of gliomas paraffin section as the object of study, including 42 patients with glioblastoma, analysis of the sampling of the polymerase chain reaction, single strand conformation polymorphism (PCR-SSCP) treatment, the PTEN gene mutations were detected; and on the expression of Ki-67 in gliomas immune groups were detected with SP assay.ResultsIn glioblastoma, mutation rate and the remaining 60 cases significantly higher PTEN gene (P＜0.05); in the average Ki-67 labeling index, glioblastomas compared with other glioma higher (P＜0.05).ConclusionIn glioblastoma,the mutation of PTEN gene plays an important role in the occurrence and development; the malignant degree and the expression of Ki-67 was positively related to the degree of expression of Ki-67 degree; relationship between mutations of the PTEN gene also showed positive correlation.

PTEN gene; Ki-67 expression; Glioma; Gene mutation

R739.4

A

1673-5846(2013)06-0141-02

佛山市第二人民醫(yī)院，廣東佛山 528000