鞠亞菲隋牮箐宋明全姜相君

1. 青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院，山東 青島 266000；

2. 青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬青島市市立醫(yī)院，山東 青島 266000

RUNX3基因rs760805多態(tài)性與胃癌的關(guān)系

鞠亞菲1隋牮箐2宋明全2姜相君2

1. 青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院，山東 青島 266000；

2. 青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬青島市市立醫(yī)院，山東 青島 266000

背景與目的：人類Runt相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子3(runt-related transcription factor 3，RUNX3)基因與胃癌發(fā)生、發(fā)展有著極其密切的關(guān)系，rs760805 AA基因型與胃癌的發(fā)病有關(guān)。本研究擬初步探討RUNX3基因rs760805多態(tài)性與中國漢族人群胃癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系。方法：以DNA直接測序法判定310例胃癌患者(胃癌組)和327例健康對照者(對照組)的RUNX3 rs760805的基因型，分析rs760805基因型與胃癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)之間的關(guān)系。結(jié)果：胃癌組與對照組的RUNX3 rs760805基因型分布頻率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。與TT基因型相比，攜帶AA基因型能顯著增加胃癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)(AA：OR=1.83，95%CI：1.15～2.92，AT：OR=1.24，95%CI：0.81～1.92)。結(jié)論：RUNX3 rs760805 AA基因型與中國漢族人群的胃癌發(fā)病有關(guān)。

RUNX3基因；基因多態(tài)性；胃癌

胃癌是嚴(yán)重威脅人類健康的消化道腫瘤，其發(fā)病的地域特征明顯，以東亞、東歐和南美最高，其中中國占全球發(fā)病總數(shù)的42%［1］。江蘇、浙江、山東、上海、遼寧及福建等地區(qū)為胃癌高發(fā)區(qū)［2］。我國胃癌的發(fā)病年齡還呈現(xiàn)出年輕化趨勢，以往以40～60歲居多，現(xiàn)在則以35～55歲居多，19～35歲發(fā)病率也明顯上升［3］。單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphism，SNP)是人類基因組DNA序列可遺傳變異的主要形式，是決定人類疾病易感性的核心信息，RUNX3基因與胃癌的發(fā)生、發(fā)展有極其密切的關(guān)系，其基因多態(tài)性與部分腫瘤發(fā)生有關(guān)［4］。本研究擬通過大宗病例，初步探討人類Runt相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子3(runt -related transcription factor 3，RUNX3)基因rs760805多態(tài)性與中國漢族人群胃癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系。

1 材料和方法

1.1 臨床資料

從2011年3月—2013年4月在青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬青島市市立醫(yī)院住院的胃癌患者中選擇無血緣關(guān)系的漢族患者310例(胃癌組)，抽取外周血。胃癌患者全部經(jīng)胃鏡或手術(shù)后病理組織學(xué)證實(shí)，且未接受放化療。其中男性206例，女性104例，平均年齡56.4±13.1歲。另從青島市市立醫(yī)院體檢中心收集健康漢族個(gè)體327人外周血作為對照(對照組)，所有對照組人員均排除胃部疾病及家族中有腫瘤病史者，其中男性219人，女性108人，平均年齡56.4±14.6歲。標(biāo)本采集獲得研究對象的知情同意，研究方案經(jīng)青島大學(xué)醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 主要儀器和試劑

主要儀器和試劑包括Platinum?Taq DNA聚合酶、ABI9700 PCR儀、3730XL型DNA測序儀。引物由Invitrogen公司提供。

1.2.2 檢測方法

基因組DNA提?。喝DTA抗凝靜脈血2 mL，用血液基因組DNA提取試劑盒(離心柱型)提取基因組DNA，紫外分光光度計(jì)測定DNA濃度。提取DNA置-20 ℃冰箱保存。

PCR反應(yīng)：以RUNX3基因組序列為依據(jù)，設(shè)計(jì)RUNX3基因rs760805位點(diǎn)PCR引物。順義鏈序列：5’-CTGGCGCATATT GAGAGCTGTA-3，反義鏈：5’-TCTCCCACTC AGCAGTTCACAC-3’，PCR反應(yīng)體系及擴(kuò)增條件：PCR反應(yīng)總體系為25 μL；含100 μg/L DNA模板，10×PCR緩沖液2.5 μL，50 mmol/L MgCl20.8 μL，10 mmol/L dNTP混合液0.5 μL，5 μmol/L引物正反向各1 μL，Platinum?Taq DNA聚合酶0.2 μL，加入滅菌蒸餾水至25 μL。反應(yīng)在ABI9700PCR儀中進(jìn)行，反應(yīng)條件：94 ℃預(yù)變性5 min，94 ℃變性30 s，58 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，進(jìn)行35個(gè)循環(huán)，72℃后延伸5 min。PCR產(chǎn)物2 μL行2%瓊脂糖凝膠電泳鑒定擴(kuò)增產(chǎn)物。DNA測序分析基因型：ABI PRISMTM 3700 DNA Analyzer上用Applied BioSystems公司的POP-6膠，使用儀器默認(rèn)的3700測序程序電泳。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

統(tǒng)計(jì)分析使用SPSS 13.0軟件。人群資料先進(jìn)行Hardy-Weinberg遺傳平衡檢驗(yàn)，以χ2檢驗(yàn)確定胃癌組與對照組之間3個(gè)位點(diǎn)基因型頻數(shù)分布的差異，以O(shè)R及其95%CI表示相對危險(xiǎn)度，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

胃癌組和對照組在年齡、性別、吸煙及飲酒方面差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值分別為0.891、0.889、0.055和0.627，表1)。RUNX3基因rs760805位點(diǎn)AA、AT及TT基因型測序結(jié)果(圖1～3)。攜帶RUNX3 rs760805位點(diǎn)AT基因型的個(gè)體罹患胃癌的風(fēng)險(xiǎn)是攜帶TT基因型的1.24倍(AT：OR=1.24，95%CI：0.8～1.92)，攜帶RUNX3 rs760805位點(diǎn)AA基因型的個(gè)體罹患胃癌的風(fēng)險(xiǎn)是攜帶TT基因型的1.83倍(AA：OR=1.83，95%CI：1.15～2.92)，均能顯著增加胃癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)(表2)。

表 1 胃癌組與對照組基本特征比較Tab. 1 Characteristics of study subjects

圖 1 RUNX3 rs760805 AA基因型Fig. 1 AA genotype of RUNX3 rs760805

圖 2 RUNX3 rs760805 AT基因型Fig. 2 AT genotype of RUNX3 rs760805

圖 3 RUNX3 rs760805 TT基因型Fig. 3 TT genotype of RUNX3 rs760805

表 2 胃癌組與對照組RUNX3 rs760805基因型與分布頻率Tab. 2 Genotype distributions of the RUNX3 rs760805 in gastric cancer cases and controls and risk estimates

3 討 論

SNPs是人類基因組DNA序列可遺傳變異的主要形式之一，是決定人類疾病易感性的核心信息，目前已經(jīng)被廣泛用于疾病病因、治療及預(yù)后評估等反映個(gè)體間易感性差異的研究領(lǐng)域中。

RUNX3是新發(fā)現(xiàn)的抑癌基因，長67 kb，位于染色體1p36區(qū)，含有P1、P2兩個(gè)啟動(dòng)子，6個(gè)外顯子，編碼由415個(gè)氨基酸殘基組成的核心結(jié)合因子(core binding factors，CBFs)的a亞單位，其基因序列上有一段由128個(gè)氨基酸組成的高度保守域成為Runt結(jié)構(gòu)域(runt domain，RD)，能夠特異性識(shí)別目的基因進(jìn)而與之結(jié)合［5］。

RUNX3作為TGF信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中非常重要的調(diào)節(jié)因子，與TGF成員共同調(diào)控細(xì)胞的生長發(fā)育和凋亡［6］。截至目前，RUNX3基因遺傳變異與腫瘤的研究報(bào)道較少。Hishida等［7］報(bào)道了RUNX3外顯子上的多態(tài)性位點(diǎn)rs6672420T＞A和內(nèi)含子中的rs760805T＞A與日本胃癌患者的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)在幽門螺桿菌感染者中，攜帶rs760805 AA基因型患胃癌的風(fēng)險(xiǎn)增高59%(OR=1.59，95%CI：1.08～2.33)。胡勝等［8］分析了位于RUNX3 Runt保守區(qū)域的C364T這一突變位點(diǎn)，未發(fā)現(xiàn)該點(diǎn)與胃癌發(fā)生相關(guān)。此外，Keller等［9］分析了RUNX3基因突變與德國胃癌患者遺傳傾向的關(guān)系，共檢測了34例胃癌患者(20例彌散型，9例腸型和5例混合型)外周血淋巴細(xì)胞中提取的基因組DNA，包括5個(gè)外顯子和內(nèi)含子－外顯子交接區(qū)域，結(jié)果均未發(fā)現(xiàn)種系突變。Guo等［10］為證實(shí)R122C突變的意義，將野生型和突變型RUNX3基因(R122C)分別轉(zhuǎn)染至胃癌細(xì)胞株MKN74，觀察細(xì)胞的生長曲線。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，野生型RUNX3可以明顯抑制胃癌細(xì)胞株MKN74生長，而突變型RUNX3與空載體組生長曲線相似，提示突變型RUNX3的活性降低或失活，不能抑制胃癌細(xì)胞株MKN74的生長。Ito等［11］發(fā)現(xiàn)，R122C突變的RUNX3在結(jié)合TCF4轉(zhuǎn)錄因子時(shí)是不完全的，說明該突變能增強(qiáng)腫瘤的生長。Hishida等［12］證實(shí)了在同時(shí)伴有幽門螺桿菌感染的日本胃癌患者中，攜帶AA基因型的患病率較高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Zhang等［4］在研究中發(fā)現(xiàn)，攜帶RUNX3 AA基因型的個(gè)體膀胱癌發(fā)病率較攜帶RUNX3 AT、TT基因型高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

綜上所述，本研究結(jié)果顯示，rs760805 AA基因型與中國漢族人群的胃癌發(fā)病有關(guān)，今后尚需行更大樣本的多中心研究以驗(yàn)證上述結(jié)果。

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Relationship between the rs760805 polymorphism of the RUNX3 gene and susceptibility to gastric cancer

JU Ya-fei1, SUI Jian-qing2, SONG Ming-quan2, JIANG Xiang-jun (Municipal Hospital Affiliated to Qingdao University Medical College, Qingdao Shandong 266000, China)

JIANG Xiang-jun E-mail: drjxj@163.com

Background and purpose: Runt-related transcription factor 3 (RUNX3) has a significant relation with gastric cancer. Many researches have confirmed that rs760805 AA can increase the risk of gastric cancer. The purpose of the study was to investigate the relationship between the rs760805 polymorphism of the RUNX3 gene and gastric cancer. Methods: The rs760805 genotypes were determined by PCR-based DNA sequence measuring analysis and direct DNA sequencing in 310 incident cases with gastric cancer and 327 controls recruited in Shandong. Results: The frequency of TT genotype was 15.16% in gastric cancer patients and 20.49% in normal controls, and the corresponding percentages for AT and AA genotypes were 48.39% and 36.45%, and 52.60% and 26.91%, respectively. Compared to TT genotype, AT genotypes were associated with an increased risk of gastric cancer (OR=1.24, 95%CI`: 0.81-1.92; OR=1.83, 95%CI: 1.15-2.92). Conclusion: The rs760805 polymorphism of the RUNX3 gene is associated with increased susceptibility to gastric cancer.

Runt-related transcription factor 3 gene; Gene polymorphism; Gastric cancer

10.3969/j.issn.1007-3969.2013.09.003

R735.2

：A

：1007-3639(2013)09-0709-04

2013-02-25

2013-07-02 ）

青島市公共領(lǐng)域科技支撐計(jì)劃（No: 2012-1-3-1-(10)-nsh）。

姜相君 E-mail:drjxj@163.com