姜 波 時冉冉 王 濤

（1.山東省濟(jì)南市畜產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)測中心，濟(jì)南 250002；2.山東省濟(jì)南市動物衛(wèi)生監(jiān)督所，濟(jì)南 250002）

畜產(chǎn)品質(zhì)量安全已成為我國乃至全世界共同關(guān)注的話題，尤其是近幾年不斷出現(xiàn)牛奶、奶粉的安全問題，更加大了監(jiān)管部門的責(zé)任。如何控制藥物殘留，確保畜產(chǎn)品質(zhì)量安全，保證人們能喝到“放心奶”，監(jiān)督和檢測就成為了至關(guān)重要的環(huán)節(jié)。畜產(chǎn)品質(zhì)量安全包括“肉、蛋、奶”等很多方面，其中牛奶中藥物殘留始終備受關(guān)注。國家對牛奶中藥物殘留的控制使用、監(jiān)督檢查和檢測方面都投入了相當(dāng)大的人力、物力。對監(jiān)督檢測部門十分重視，檢測方法也不斷的更新發(fā)展。那么，我們需要更科學(xué)、高效、準(zhǔn)確的檢測方法來監(jiān)督監(jiān)測藥物殘留。下面就介紹了牛奶中四環(huán)素類的快速檢測方法。

1 常見的四環(huán)素類藥物

四環(huán)素類藥物為廣譜抗生素，主要包括四環(huán)素、土霉素、金霉素和強(qiáng)力霉素。其抗菌作用強(qiáng)，價格低廉，被廣泛用于臨床各種感染性疾病的治療。其在動物性食品中的殘留可導(dǎo)致諸多不良反應(yīng)，如胃腸道反應(yīng)及二重感染等。臨床廣泛應(yīng)用也可導(dǎo)致對四環(huán)素類藥物的耐藥菌株迅速增加。因此，對動物性食品中四環(huán)素類藥物的殘留檢測非常重要也很必要。

2 牛奶中四環(huán)素類藥物殘留快速檢測方法

試紙條是一種快速篩選檢測的方法，能快速檢測出牛奶中是否含有四環(huán)素類藥物，對監(jiān)督檢查牛奶藥物殘留工作提供了便利的條件，為保證食品安全提供了一種高效的檢測手段。

2.1 優(yōu)勢與不足

牛奶樣品不需要復(fù)雜的特殊處理，經(jīng)過簡單的水浴可以直接用于檢測，監(jiān)督檢查人員和檢測人員可進(jìn)行現(xiàn)場檢測，快速高效判斷結(jié)果，節(jié)省人力和物力，提高了工作效率。但本檢測方法的結(jié)果易受樣品、溫度、濕度等環(huán)境因素和其他條件影響，可能出現(xiàn)假陽性結(jié)果，所以需要積累經(jīng)驗(yàn)，或做進(jìn)一步的試驗(yàn)。

2.2 原理

牛奶中四環(huán)素類藥物快速檢測試紙條含有被事先固定于硝酸纖維素膜的抗原檢測線（T線）和質(zhì)控線（C線）。微孔中的金標(biāo)抗體經(jīng)牛奶樣品復(fù)溶后在50℃水浴中溫育3 min，將試紙條插入金標(biāo)微孔中反應(yīng)8～10 min，若樣品為陰性，在T區(qū)出現(xiàn)一條紫紅色條帶；若樣品為陽性，則T區(qū)不會出現(xiàn)紫紅色條帶。無論樣品中有無四環(huán)素類藥物的存在，C區(qū)都會出現(xiàn)一條紫紅色條帶。牛奶中四環(huán)素類藥物的快速檢測方法需要用到水浴鍋或者是溫育器、微量移液器。

2.3 靈敏度

金霉素的檢測靈敏度為30 ppb；強(qiáng)力霉素的檢測靈敏度為30 ppb；四環(huán)素的檢測靈敏度為50 ppb；土霉素的檢測靈敏度為100 ppb。

2.4 檢測樣品的制備和要求

牛奶中四環(huán)素類藥物快速檢測方法適用于原奶或者是混合奶樣，檢測前需要將牛奶樣品混勻。被測牛奶樣品要避免使用結(jié)塊或者是感官性狀有問題的液態(tài)奶，待測奶樣應(yīng)冷藏保存，保存時間不得超過4 d。

2.5 快速檢測試紙條的存放

快速檢測試紙條的存放要求不是非常嚴(yán)格，一般控制在溫度15℃～24℃之內(nèi)，密封、陰涼干燥、避光存放，嚴(yán)防受潮。并在有效期內(nèi)使用，一般有效期為6個月。

2.6 檢測方法

2.6.1 檢測步驟

（1）將水浴鍋或者是溫育器打開，設(shè)置溫度為50℃，待溫度穩(wěn)定后使用；（2）取待測牛奶樣品600 ul加入到樣品管中，充分混勻；（3）打開鋁箔袋，取適量金標(biāo)微孔，置于桌面上（注意：取出微孔后，立即將鋁箔袋放入自封袋中密封，以防試紙條受潮）；（4）取150 ul處理好的奶樣于金標(biāo)微孔中，充分混勻至孔底的紫紅色顆粒完全溶解；（5）將加入樣品溶液后的金標(biāo)微孔置于50℃水浴鍋（或溫育器）中，溫育3 min；（6）從反應(yīng)的鋁箔袋中，取出適量的試紙條（注意：請勿用手觸碰吸水紙外的其他區(qū)域），并在吸水紙上做標(biāo)記；（7）將試紙條插入溫育后的金標(biāo)微孔中，使樣品墊充分浸入樣品溶液中，并將其置于50℃水浴鍋（或溫育器）中，反應(yīng)8～10 min后，觀察顯色區(qū)，判斷結(jié)果，其他時間判斷無效。

2.6.2 結(jié)果判定

陰性：C線顯色，T線肉眼可見，無論顏色深淺都判為陰性。

陽性：C線顯色，T線不顯色，結(jié)果判為陽性。

無效：C不顯色，無論T線是否顯色，該檢測卡均判為無效，說明操作不當(dāng)或者是檢測試紙失效。

結(jié)果如圖所示：

2.7 影響因素和注意事項(xiàng)

2.7.1 奶牛個體差異

由于奶牛的個體差異，受年齡、品種、性別和養(yǎng)殖環(huán)境的影響，抽取牛奶樣品略有所差異，在檢測過程中，可能會影響檢測線顏色深淺，一般并不影響結(jié)果的判斷，只要檢測線出現(xiàn)條帶，不論深淺，就可以判定結(jié)果為陰性結(jié)果。

2.7.2 檢測環(huán)境及條件

檢測時，檢測溫度、濕度和檢測時間都會對實(shí)驗(yàn)結(jié)果有所影響。試驗(yàn)過程中，環(huán)境的溫度盡量控制在20℃左右進(jìn)行；環(huán)境濕度不要太大；試紙條開封后1 h之內(nèi)使用，觀察結(jié)果時間也盡量控制在每個樣品10 min之內(nèi)，以保證試紙條不受潮，減少對檢測結(jié)果的影響因素。

2.7.3 檢測樣品

牛奶樣品為冷凍狀態(tài)，應(yīng)使其化凍回溫再進(jìn)行檢測，以免影響檢測結(jié)果，必須保證樣品在正常溫度之內(nèi)；被測牛奶樣品要避免使用結(jié)塊或者是感官性狀有問題的液態(tài)奶，待測奶樣應(yīng)冷藏保存，保存時間不得超過4 d。

2.7.4 牛奶樣品吸管不可混用，以免交叉感染

如果樣品中污染有雜物或呈渾濁狀時要經(jīng)離心或者過濾后再用于檢測，嚴(yán)重污染或渾濁者不可用于檢測。

2.7.5 假陽性

由于各種原因，牛奶樣品檢測時有可能會出現(xiàn)假陽性，對可疑樣品或陽性樣品，可重復(fù)實(shí)驗(yàn)（每支試紙只能使用1次），也可用酶聯(lián)免疫法做進(jìn)一步確定。

2.7.6 試紙條和金標(biāo)微孔

不要混用來自不同批號的試紙條和金標(biāo)微孔；應(yīng)避免延誤將試紙條插入和取出金標(biāo)微孔的操作，以保證各樣品溫育時間一致。

2.7.7 廢棄物處理

實(shí)驗(yàn)后的廢棄物要妥善處理，試紙條也要嚴(yán)格按照保存條件保存，在有效期內(nèi)使用。