王麗娜， 汪 巍， 徐 馳， 許 枏，賈天柱

（遼寧中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，遼寧大連 116600）

柴胡醋制前后抗炎作用比較研究

王麗娜， 汪 巍， 徐 馳， 許 枏，賈天柱*

（遼寧中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，遼寧大連 116600）

目的 比較柴胡與醋柴胡抗炎作用的差異。方法 采用角叉菜膠致大鼠足跖腫脹法、二甲苯致大鼠耳腫脹和毛細(xì)血管通透性增加、棉球致大鼠肉芽增生法，及炎性介質(zhì)前列腺素E2（PGE2）的量，觀察比較柴胡和醋柴胡的抗炎作用。結(jié)果 生柴胡對角叉菜膠所致大鼠足跖腫脹，棉球引起的肉芽增生，二甲苯所致大鼠耳腫脹和毛細(xì)血管通透性增加均有拮抗作用 （P＜0.05），醋柴胡對二甲苯所致大鼠耳腫脹有拮抗作用 （P＜0.05）。生柴胡與醋柴胡抗炎作用有差異 （P＜0.05）。結(jié)論 以腫脹和滲出為指標(biāo)，生柴胡抗炎作用優(yōu)于醋柴胡。

柴胡；醋柴胡；炮制；抗炎

柴胡為傘形科植物柴胡Bupleurum chinense DC.或狹葉柴胡Bupleurum scorzonerifolium Willd.的干燥根，按性狀不同，分別習(xí)稱“北柴胡”及“南柴胡”。性味辛、苦，微寒，歸肝、膽、肺經(jīng)。具有疏散退熱，疏肝解郁，升舉陽氣之功，臨床用于感冒發(fā)熱，寒熱往來，胸脅脹痛，月經(jīng)不調(diào)，子宮脫垂，脫肛等［1］。

柴胡主要含有柴胡皂苷 （Saikosaponins）、揮發(fā)油、α-菠菜甾醇、多糖等。根據(jù)化學(xué)結(jié)構(gòu)不同，柴胡皂苷又分為柴胡皂苷a、b、c和d等，柴胡皂苷元有 F、E、G等［2］。柴胡皂苷和揮發(fā)油均有顯著的抗炎作用。其中柴胡皂苷對許多炎癥過程包括滲出、毛細(xì)血管通透性、炎癥介質(zhì)釋放、白細(xì)胞游走和結(jié)締組織增生等都有影響［3］。柴胡傳統(tǒng)炮制方法有：醋柴胡、鱉血柴胡、酒柴胡、蜜炙柴胡，《中國藥典》目前只收載醋柴胡。柴胡醋制后，柴胡皂苷d等多種成分含量降低，但柴胡醋制前后抗炎作用和機(jī)制差異研究報(bào)道較少。

為考察醋制前后柴胡抗炎作用及其機(jī)制差異，本實(shí)驗(yàn)選用急性炎癥和亞急性炎癥動物模型，分別以腫脹抑制率和血管通透性、炎性介質(zhì)等為評價(jià)指標(biāo)，考察柴胡醋制前后對抗炎作用的影響，為臨床合理應(yīng)用柴胡提供參考。

1 材料和方法

1.1 藥物和試劑 柴胡飲片購于遼寧正大祥和藥業(yè)集團(tuán)有限公司，批號201105245，產(chǎn)地遼寧；醋柴胡為生柴胡加入定量米醋 （每100 kg用米醋20 kg）拌勻，稍燜潤，待醋被吸盡后，置炒制容器內(nèi)，用文火加熱，炒干，取出晾冷。

樣品：分別將生柴胡、醋柴胡水煎煮后濃縮至每1 mL折合生藥1 g，備用；阿司匹林：拜耳醫(yī)藥保健有限公司，批號BJ04066。

角叉菜膠、伊文思藍(lán)、PGE2ELISA試劑盒購于上?？婆d商貿(mào)有限公司。

1.2 儀器 日立U-3010紫外-可見分光光度計(jì)

1.3 動物 SD成年大鼠40只，雄性，體質(zhì)量 （160±20）g，由大連醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供，清潔級 （CL）。按體質(zhì)量隨機(jī)分為4組，每組10只，分別為生柴胡組、醋柴胡組；空白對照組；陽性對照組 （阿司匹林）。各給藥組和陽性對照組分別灌胃給予相應(yīng)藥物 ［5 g/（kg·d）］，空白對照組給同體積生理鹽水，連續(xù)7 d。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 大鼠棉球肉芽腫形成實(shí)驗(yàn)［4］取各組動物。實(shí)驗(yàn)時(shí)首先將大鼠腹腔注射20%烏拉坦溶液0.3 mL/100 g麻醉，然后在各鼠的腋窩用碘酒消毒，75%酒精脫碘后，各切開1 cm長之小口，將已稱定質(zhì)量為20 mg的滅菌棉球，經(jīng)高壓滅菌，每個(gè)棉球加上青霉素溶液1 mg/0.1 mL，50℃烘干后，用眼科鑷子從小切口處植入腋窩皮下，隨即縫合皮膚。連續(xù)給藥7 d后處死大鼠，打開原切口，剝離并取出棉球肉芽組織。于60℃烘箱中干燥1 h后稱定質(zhì)量，將稱得質(zhì)量減去棉球原質(zhì)量即得肉芽腫的質(zhì)量。比較各組肉芽腫質(zhì)量。

1.3.2 角叉菜膠致大鼠足跖腫脹及組織中炎癥遞質(zhì)的影響實(shí)驗(yàn)［5］取各組動物，采用容積測量法。實(shí)驗(yàn)前先測量每鼠正常足跖容積，末次給藥30 min后將大鼠右后肢拉直，自足跖中部皮下注射1%角叉菜膠0.1 mL/爪致炎。分別于

在致炎后6 h，眼眶取血并處死大鼠。自踝關(guān)節(jié)下剪下致炎足，稱質(zhì)量，劃破足跖部皮膚投入有2.5 mL生理鹽水的離心管中，浸泡并不停地振搖，2 h后棄足，將浸泡液和血于3 000 r/min離心15 min。各取上清液 0.15 mL，加入0.5 mol/L的KOH甲醇2 mL。于50℃下溫育。20 min后每管加入2.5 mL甲醇。于278 nm波長下比色，以每克炎性組織相當(dāng)?shù)奈舛?（A）表示前列腺素E2（PGE2）的量。

1.3.3 二甲苯致大鼠耳腫脹實(shí)驗(yàn)［6］取各組動物，在

1.3.2 項(xiàng)實(shí)驗(yàn)致炎4 h后再次灌胃給藥，30 min后在大鼠左耳前后兩面涂抹二甲苯0.2 mL，1 h后將大鼠處死，剪下左右兩耳片，用7 mm直徑打孔器分別在同一部位打下圓耳片，用電子天平稱兩耳質(zhì)量，用每只鼠的左耳質(zhì)量減去右耳片質(zhì)量，即為耳腫脹度。比較各組的耳片腫脹度。致炎后0.5 h、1 h、2 h、4 h、6 h測定其足跖容積，觀察給藥前后各鼠足趾容積的變化 （即腫脹度），比較各組差異。

1.3.4 大鼠毛細(xì)血管通透性實(shí)驗(yàn)［6］1.3.3項(xiàng)實(shí)驗(yàn)大鼠在耳部涂抹二甲苯后立即靜脈注射1%的伊文思藍(lán)5 mL/kg。待測定耳腫脹度后將左耳切碎，放入水-丙酮溶液 （3∶7）內(nèi)浸泡48 h后，離心，上清液于721分光光度計(jì)610 nm下測吸光度，比較給藥組與對照組著色程度的差異。結(jié)果見表2。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析

2.1 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 見表1，表2，圖1。

表1 柴胡、醋柴胡對大鼠棉球肉芽及耳腫脹的影響（±s）

表1 柴胡、醋柴胡對大鼠棉球肉芽及耳腫脹的影響（±s）

注：與對照組比較，*P＜0.05；與生柴胡組比較，ΔP＜0.05。

組 別 動物數(shù)/只 肉芽質(zhì)量/mg 耳腫脹度/mg對照組10 15.7±39.82 13.6±4.8生柴胡組 10 86.4±26.10* 10.0±5.7*醋柴胡組 10 94.7±29.87 12.9±4.7Δ陽性對照組 10 85.6±37.77* 7.2±6.1*

表2 柴胡、醋柴胡對角叉菜致大鼠足拓腫脹的影響（±s）

表2 柴胡、醋柴胡對角叉菜致大鼠足拓腫脹的影響（±s）

注：與模型組比較，*P＜0.05；與生柴胡組比較，△P＜0.05。

組 別0.5 h 2 h 4 h 6 h腫脹率/% 抵制率/% 腫脹率/% 抵制率/% 腫脹率/% 抵制率/% 腫脹率/% 抵制率/%對照組26.95±4.1 － 17.2±2.0 － 16.7±4.3 － 15.0±3.1 －生柴胡組 19.15±2.2 28.9 7.6±2.9* 55.8 4.85±3.3* 70.9 5.65±2.9* 62.3醋柴胡組 17.45±3.4 35.2 16.58±6.5Δ 3.6 12.97±3.9Δ 22.3 13.34±3.2Δ 11.1陽性對照組 14.6±4.5* 45.8 8.2±4.5* 52.3 6.77±2.3* 59.5 5.98±2.1*60.1

圖1 柴胡、醋柴胡對大鼠毛細(xì)血管通透性及組織中炎癥遞質(zhì)的影響

2.2 結(jié)果分析

2.2.1 角叉菜膠致大鼠足跖腫脹及組織中炎癥遞質(zhì)的影響實(shí)驗(yàn) 結(jié)果表明，大鼠致炎后足跖腫脹差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），說明造模成功。生柴胡組與陽性對照組比較，足跖腫脹度有顯著性差異 （P＜0.05），且抑制率＞30%，說明生柴胡可對抗角叉菜膠所致大鼠足跖腫脹。醋柴胡組與模型組比較無顯著改善。結(jié)果提示，生柴胡具有明顯的抗炎作用，且抗炎作用持久，效果優(yōu)于醋柴胡。生柴胡組與空白組比較PGE2量均降低，有顯著性差異，結(jié)果提示生柴胡有較好的抑制炎性組織中PGE2的滲出。

2.2.2 大鼠棉球肉芽腫形成實(shí)驗(yàn) 結(jié)果表明，生柴胡組與陽性對照組比較，肉芽質(zhì)量有顯著性差異 （P＜0.05），說明生柴胡對棉球引起的肉芽腫有拮抗作用。醋柴胡與模型組比較無顯著作用。結(jié)果提示，生柴胡具有拮抗亞急性炎癥作用，且作用優(yōu)于醋柴胡。

2.2.3 二甲苯致大鼠耳腫脹實(shí)驗(yàn) 結(jié)果表明，造模后左耳腫脹度明顯增加，左右耳差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.01），說明造模成功。生柴胡組與模型組比較，耳腫脹度明顯降低 （P＜0.05），說明生柴胡可對抗二甲苯所致大鼠耳腫脹。生柴胡組與醋柴胡組比較，耳腫脹度有明顯差異 （P＜0.05），提示，生柴胡抗炎效果優(yōu)于醋柴胡。

2.2.4 大鼠毛細(xì)血管通透性實(shí)驗(yàn) 結(jié)果表明，生柴胡組與陽性對照組比較，毛細(xì)血管通透性有顯著性差異 （P＜0.05），說明生柴胡對二甲苯所致毛細(xì)血管通透性增加有拮抗作用。醋柴胡與模型組比較無顯著性差異。結(jié)果提示，生柴胡具有抗炎作用，且作用優(yōu)于醋柴胡。

3 討論

柴胡為解表藥，現(xiàn)代藥理研究表明解表藥主要具有解熱發(fā)汗、抗炎鎮(zhèn)痛等作用。而柴胡主要有效成分柴胡皂苷具有明顯抗炎活性 （既有直接的抗炎作用，又有間接地通過腎上腺皮質(zhì)產(chǎn)生抗炎作用［7］），且醋制后柴胡皂苷成分有明顯變化，如柴胡醋制后柴胡皂苷a、d、揮發(fā)油、多糖等成分量降低［8-9］，而浸出物、柴胡皂苷b1、b2等成分的量增加［10］；揮發(fā)油組成發(fā)生變化［11］，部分成分轉(zhuǎn)化，引起相應(yīng)的藥效學(xué)變化［12-15］；總皂苷的量都有所下降，柴胡皂苷b2的量從10.7%～78.2%都有不同程度的提高，柴胡皂苷a+c+d的量略有下降［16］，醋制品中柴胡皂苷 a、d的量低于生品，同時(shí)其相對應(yīng)降解產(chǎn)物柴胡皂苷b1、b2的量高于生品［10］。因此以抗炎作用研究柴胡醋制前后藥效變化，不僅可以揭示柴胡醋制前后抗炎作用變化，而且也可為炮制前后成分變化與藥效作用的關(guān)聯(lián)性研究提供依據(jù)。實(shí)驗(yàn)所用的藥物為柴胡煎劑的濃縮液，與臨床傳統(tǒng)用藥方法一致，且柴胡皂苷溶出率較高。

前列腺素作為一類重要的炎性介質(zhì)，在炎癥的全過程中都存在PGs的合成與釋放，前列腺素E2（PGE2）不僅能增強(qiáng)組胺和緩激肽的作用，提高血管通透性，而且還有很強(qiáng)的擴(kuò)張血管和致熱，致痛的作用。根據(jù)本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，柴胡能夠抑制角叉菜膠、二甲苯致炎后引起的局部腫脹，降低角叉菜膠致炎后血清及炎性部位的PGE2的量，對二甲苯所致毛細(xì)血管通透性增加有拮抗作用，提示柴胡抗炎作用可能與抑制前列腺素合成有關(guān)。而棉球肉芽腫模型為亞急性炎癥模型，與臨床上某些炎癥的后期病理改變相似，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，生柴胡可抑制棉球引起炎癥及結(jié)締組織的增生。本實(shí)驗(yàn)采用3種不同機(jī)制的炎癥模型，可以為多角度研究生、醋柴胡抗炎作用差異提供依據(jù)。生柴胡對急性炎癥和亞急性炎癥均有較好的抑制作用，醋柴胡與生柴胡相比抗炎作用較弱，雖對各炎癥模型有一定緩解，但經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)統(tǒng)計(jì)無顯著作用，提示醋制后柴胡抗炎作用降低，這與傳統(tǒng)炮制理論認(rèn)為柴胡“入解表藥生用”、 “外感生用”等相符，藥效的改變可能與醋制后柴胡皂苷轉(zhuǎn)化有關(guān)。

柴胡傳統(tǒng)炮制方法有醋柴胡、鱉血柴胡、酒柴胡、蜜炙柴胡，《中國藥典》目前只收載醋柴胡。醋柴胡重養(yǎng)肝柔肝，可以緩和升散之性，降低解表退熱作用，取其引藥入肝和養(yǎng)肝柔肝之功，并可增強(qiáng)疏肝止痛作用，多用于肝郁氣滯的脅痛、腹痛及月經(jīng)不調(diào)等癥，如肝氣郁結(jié)用柴胡疏肝散（《景岳全書》），肝郁血虛、月經(jīng)不調(diào)用逍遙散（《處方集》）等。現(xiàn)代臨床上運(yùn)用醋柴胡治療慢性肝炎、慢性胃炎、膽汁反流性胃炎、痛經(jīng)崩漏、焦慮抑郁等［17-23］肝郁病癥均有很好療效。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果也提示，從解表作用來看，醋柴胡作用不及生柴胡，本實(shí)驗(yàn)組將另文發(fā)表關(guān)于生醋柴胡疏肝解郁等作用的比較研究。

現(xiàn)今中藥研究已從“整體-器官-細(xì)胞”水平發(fā)展到在分子、細(xì)胞水平探討中藥的作用機(jī)制。然而，中藥抗炎作用的分子機(jī)制十分復(fù)雜，往往是通過多途徑、多環(huán)節(jié)發(fā)揮作用的。因此本實(shí)驗(yàn)僅作為基礎(chǔ)，今后將從更多的抗炎途徑和環(huán)節(jié)對柴胡進(jìn)行深入研究，解析柴胡解表作用機(jī)制的同時(shí)解析柴胡炮制原理。

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R285.5

B

1001-1528（2013）05-1079-03

10.3969/j.issn.1001-1528.2013.05.054

2012-11-13

國家中醫(yī)藥管理局中醫(yī)藥行業(yè)科研專項(xiàng)項(xiàng)目 （201107007）

王麗娜 （1979—），女，講師，研究方向：中藥炮制與中藥化學(xué)。Tel：（0411）87586014

*通信作者：賈天柱 （1951—），男，教授，研究方向：中藥炮制工藝與原理解析研究。Tel：（0411）87586329