范瑾 張玨

（上海市中醫(yī)藥大學(xué)附屬曙光醫(yī)院血庫 上海 200021）

ABO血型是人類最早發(fā)現(xiàn)也是對(duì)輸血安全影響最大的血型系統(tǒng)。ABO定型錯(cuò)誤會(huì)導(dǎo)致溶血性輸血反應(yīng)，輕者可能導(dǎo)致無效輸血，重者危及受血者的生命[1]。當(dāng)發(fā)現(xiàn)ABO正反定型不一致時(shí)如何查找原因并快速正確地鑒定患者血型就顯得尤為重要。我們?cè)谳斞霸囼?yàn)中應(yīng)用ABO疑難血型3步分析法[2]，對(duì)20例疑難血型進(jìn)行鑒定分析及總結(jié)，報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源

上海市中醫(yī)藥大學(xué)附屬曙光醫(yī)院2011年1月至2012年6月擬輸血患者中ABO血型正反定型不符20例，年齡3個(gè)月～80歲。

1.2 試劑和儀器

抗A、抗B和抗AB血型定型試劑（單克隆抗體），抗H、抗A1和RhD（IgM）血型定型試劑（單克隆抗體），人ABO血型反定型用紅細(xì)胞試劑盒（其中包括：A1細(xì)胞、B細(xì)胞、O細(xì)胞）、直接抗人球蛋白試劑（抗IgG，C3d多特異性）、抗體篩檢紅細(xì)胞試劑盒等由上海血液生物醫(yī)藥公司生產(chǎn)；抗人球蛋白檢測(cè)卡、ABO血型微柱凝膠卡、37 ℃專用孵育器、卡式離心機(jī)由強(qiáng)生醫(yī)療器材有限公司生產(chǎn)；2002-2型血清學(xué)專用離心機(jī)由臺(tái)灣貝索公司生產(chǎn)。

1.3 方法

根據(jù)ABO疑難血型3步分析法。第1步：排除人為因素進(jìn)行分析。重新采集血樣鑒定血型，核對(duì)試劑有效期及操作規(guī)程和注意事項(xiàng)，核對(duì)離心機(jī)轉(zhuǎn)速、時(shí)間、離心力以及其他器材有無污染。第2步：復(fù)習(xí)臨床資料。分析可能導(dǎo)致正反定型不一致的原因，并予以歸納分類。分類類型按照患者的年齡、性別、家系調(diào)查、臨床診斷、臨床治療等進(jìn)行歸類分析。第3步：根據(jù)第2步的分類結(jié)果，設(shè)計(jì)針對(duì)性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。

用常規(guī)試管法和微柱凝膠法做正反定型，必要時(shí)加做抗H、抗A1、吸收放散實(shí)驗(yàn)、唾液血型物質(zhì)測(cè)定和亞型檢測(cè)[3]確定是否亞型，不規(guī)則抗體的篩選和鑒定可用于檢查血清中是否存在干擾反定型實(shí)驗(yàn)的額外抗體。所有試驗(yàn)嚴(yán)格按照操作規(guī)程進(jìn)行。

2 結(jié)果

20例正反定型不符中，2例（10%）由于人為因素造成，另外18例原因分別是：生理因素2例，占10%；檢出自身抗體2例，占10%；檢出不規(guī)則抗體8例，占40%；血漿蛋白異常3例，占15%；血液病導(dǎo)致抗原減弱3例，占15%。

3 討論

3.1 生理因素

老年人免疫力下降，血清中抗體效價(jià)降低，新生兒[4]紅細(xì)胞抗原弱，抗體未形成，屬于生理性因素。老年人病例樣本可適當(dāng)延長(zhǎng)抗原抗體反應(yīng)時(shí)間或加大反定型實(shí)驗(yàn)的血清量，也可以通過加入低離子溶液增強(qiáng)抗原抗體反應(yīng)，使正反定型結(jié)果一致；新生兒則可以不做反定型實(shí)驗(yàn)或反定型實(shí)驗(yàn)僅供參考，加做吸收放散實(shí)驗(yàn)確認(rèn)是否為亞型，并根據(jù)病情需要定期追蹤確認(rèn)。

3.2 自身抗體

自身免疫性溶血性貧血病例樣本由于存在自身抗體[5]，通過用37 ℃鹽水洗滌紅細(xì)胞和自身紅細(xì)胞4℃吸收試驗(yàn)，直至直接抗人球蛋白陰性再進(jìn)行血型鑒定，最終正反定型結(jié)果一致。

3.3 不規(guī)則抗體

8例患者均有輸血史，不規(guī)則抗體篩查為陽性，分別進(jìn)行抗體特異性鑒定測(cè)定, 抗D 4例，抗E 2例，抗C 2例。為各受血者選擇了不含相應(yīng)抗原以及交叉配血試驗(yàn)相合的血液進(jìn)行輸注, 輸血后血紅蛋白達(dá)到臨床預(yù)期值，保證了臨床輸血治療的安全和有效。

3.4 血漿蛋白異常

2例多發(fā)性骨髓瘤患者標(biāo)本，血漿中M蛋白升高，直接抗人球蛋白試驗(yàn)陽性，導(dǎo)致反定型時(shí)紅細(xì)胞呈串錢樣凝集，在反定型時(shí)加適量生理鹽水看凝集是否消失，或者紅細(xì)胞洗滌后再配置為生理鹽水混懸液，也可以稀釋反定型的血清。了解患者臨床診斷后，臨床醫(yī)師給予藥物治療15 d以上，再次檢測(cè)患者樣本，正反定型一致。

3.5 血液病

急性粒細(xì)胞性白血病的患者樣本時(shí)常導(dǎo)致弱抗原或抗原缺失，急性粒細(xì)胞性白血病時(shí)由于H轉(zhuǎn)移酶缺乏或合成受抑制，使血型抗原減弱，另外再生障礙性貧血時(shí)成熟紅細(xì)胞顯著減少或紅細(xì)胞形態(tài)發(fā)生改變，也使血型抗原減弱[6]。常見的解決辦法：①洗滌紅細(xì)胞并增加反應(yīng)時(shí)間，如果洗滌紅細(xì)胞后反應(yīng)加強(qiáng)，則考慮是血型物質(zhì)被抑制。②增加正定型紅細(xì)胞濃度。③吸收放散實(shí)驗(yàn)排除亞型。④了解輸血史(尤其是O型紅細(xì)胞輸注)及病情診斷(如白血病)。⑤將樣本在4 ℃放置后再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)或更換不同批號(hào)標(biāo)準(zhǔn)血清進(jìn)行血型鑒定[7]。

3.6 人為因素

2例人為因素中，1例由于選擇離心力超過1 000 g，導(dǎo)致串錢狀凝集結(jié)果,選擇正確的離心力后，正反定型相符。1例是由于標(biāo)本未放置2~6 ℃冰箱，室溫放置時(shí)間過長(zhǎng)導(dǎo)致樣本溶血污染。

從1900年Landsteiner發(fā)現(xiàn)ABO血型起，才進(jìn)入科學(xué)輸血的時(shí)代，正確鑒定ABO血型是確保臨床輸血安全的關(guān)鍵。與輸血相關(guān)的死亡病例中，有51%是由輸入ABO血型不合的血液制品所引起，其中1/3是由ABO血型鑒定錯(cuò)誤造成的。臨床ABO疑難血型主要表現(xiàn)為正、反定型不一致，由于抗原抗體的復(fù)雜性，圍繞“正反定型不一致”原因和結(jié)果的判斷和分析的多樣性，輸血沒有一種規(guī)范性的原因分析及標(biāo)準(zhǔn)的試驗(yàn)操作規(guī)程，導(dǎo)致血型鑒定工作者遇到疑難血型鑒定情況時(shí)，沒有規(guī)范的程序參考，試驗(yàn)分析思路混亂，給臨床血型鑒定工作帶來了很大的困難，耗費(fèi)了血型鑒定工作者的精力和時(shí)間。同時(shí)，由于血型鑒定是一項(xiàng)具有高度責(zé)任性的工作。標(biāo)本的正確采集、熟練的技術(shù)、規(guī)范的操作都是不可缺少的。鑒于以上原因和現(xiàn)狀，自2012年開始，我們針對(duì)ABO正反定型不一致引起的疑難血型鑒定問題進(jìn)行了分析和總結(jié)，把ABO正反定型不一致的原因劃分為4類：①抗體效價(jià)過低，②抗體異常凝集，③抗原減弱或缺失，④人為因素。當(dāng)發(fā)現(xiàn)正反定型結(jié)果不一致時(shí)，必須查明原因，在排除操作及試劑因素后，結(jié)合臨床以及進(jìn)一步的輔助血清學(xué)試驗(yàn)得出正確的血型鑒定結(jié)果，提高輸血的安全性。

[1] 范瑾. 輸血前不規(guī)則抗體篩查的臨床意義[J]. 上海醫(yī)藥,2012, 33(7): 24-25.

[2] 蘭炯采, 陳靜嫻, 馬紅麗, 等. 推薦ABO疑難血型三步分析法[J]. 中國輸血雜志, 2010, 23(3): 165-168.

[3] 中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司. 全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程[M]. 南京: 東南大學(xué)出版社, 1997: 100.

[4] 楊志誠. 微柱凝膠法在新生兒ABO血型鑒定中的應(yīng)用[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床, 2008, 5(24): 1500.

[5] 鄧家棟. 臨床血液學(xué)[M]. 上海: 上海科學(xué)技術(shù)出版社,2001: 628-641.

[6] 曹奎杰, 何鳴鏑, 劉鋒, 等. 再障引起A型血型抗原減弱1例[J]. 臨床血液學(xué)雜志, 2007, 4(4): 187-188.

[7] 李志強(qiáng). 簡(jiǎn)明臨床輸血理論與實(shí)踐[M]. 上海: 上海世界圖書出版公司, 2010: 81-82.