楊衛(wèi)軍，張珍珍

（河北省秦皇島市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)督檢驗(yàn)中心，河北秦皇島 066000）

豬鏈球菌疫苗研究進(jìn)展

楊衛(wèi)軍，張珍珍

（河北省秦皇島市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)督檢驗(yàn)中心，河北秦皇島 066000）

豬鏈球菌為革蘭氏陽(yáng)性菌，是一種能夠引起人和多種動(dòng)物發(fā)病的重要人畜共患病病原。豬鏈球菌病分布廣泛，英國(guó)于1954年最早報(bào)道該病，此后在養(yǎng)豬業(yè)發(fā)達(dá)的其他國(guó)家均有發(fā)生。我國(guó)最早由吳碩顯（1949年）報(bào)道，在上海郊區(qū)發(fā)現(xiàn)本病散發(fā)病例。1963年在廣西部分地區(qū)開始流行，繼之蔓延開來(lái)。1968年丹麥?zhǔn)状螆?bào)道了人感染豬鏈球菌2型導(dǎo)致腦膜炎，1998年、2005年分別在我國(guó)江蘇省海安縣和四川省資陽(yáng)市暴發(fā)豬鏈球菌病，這兩次疫病的暴發(fā)不僅造成生豬死亡，引起養(yǎng)殖戶巨大經(jīng)濟(jì)損失，還導(dǎo)致人感染，引起人的死亡，嚴(yán)重地威脅著人類的公共衛(wèi)生安全。

目前對(duì)于豬鏈球菌病的預(yù)防和治療仍主要采用抗生素療法，由于長(zhǎng)期大量的濫用抗菌藥物，導(dǎo)致耐藥菌株的不斷出現(xiàn)，疾病得不到控制，造成疫病不斷暴發(fā)。為了控制豬鏈球菌病的感染，應(yīng)該以預(yù)防為主，輔以藥物治療。疫苗在疫病的控制發(fā)面發(fā)揮了重要的作用，選擇安全、可靠的疫苗對(duì)動(dòng)物進(jìn)行接種免疫，能夠使動(dòng)物體產(chǎn)生高的抗體水平來(lái)抵抗細(xì)菌的感染，從而達(dá)到控制本病的目的。本文對(duì)豬鏈球菌疫苗目前的研究情況作一簡(jiǎn)述。

一、滅活菌苗

滅活疫苗是把病原微生物經(jīng)物理或化學(xué)的方法滅活后制成，但是保留了其抗原性，而沒有致病力。滅活疫苗由于接種后在動(dòng)物體內(nèi)不能繁殖，因此使用劑量較大，保護(hù)期較短，一般要加入免疫佐劑來(lái)增強(qiáng)其免疫效果。滅活疫苗常需多次接種，往往接種1次不產(chǎn)生具有保護(hù)作用的免疫，僅僅是“初始化”免疫系統(tǒng)，必須進(jìn)行第二次加強(qiáng)免疫才能產(chǎn)生免疫保護(hù)。滅活疫苗作為傳統(tǒng)的疫苗，由于其具有研制周期短，使用安全可靠，易于保存等優(yōu)點(diǎn)，至今仍應(yīng)用在生產(chǎn)實(shí)踐中。

有研究報(bào)道為使菌苗能夠達(dá)到更好的保護(hù)力，挑選目前流行的優(yōu)勢(shì)菌株作為疫苗候選株,研制多價(jià)滅活疫苗，用于該地區(qū)的免疫預(yù)防，解決了各血清群之間交互免疫能力差和保護(hù)力低等缺點(diǎn)。該多價(jià)滅活疫苗不僅安全性好，而且免疫效果確實(shí)。Reams 及Hott 等對(duì)鏈球菌的全細(xì)胞菌苗持否定態(tài)度，而王建以馬鏈球菌獸疫亞種ATCC35246株和豬鏈球菌2型HA9801株作為疫苗候選菌株，制備氫氧化鋁膠二聯(lián)滅活疫苗，免疫保護(hù)率達(dá)到100%，優(yōu)于Reams 及Hott等報(bào)道的結(jié)果，可能是由于使用的菌株不同而造成的結(jié)果差異。余玲娜等人在研究豬鏈球菌疫苗方面報(bào)道，蜂膠作為佐劑的疫苗對(duì)動(dòng)物體的刺激性較少，并且蜂膠還是一種天然的抗菌藥物，具有一定發(fā)展前景。山東濱州華宏生物制品有限責(zé)任公司研制的豬鏈球菌病蜂膠滅活疫苗(馬鏈球菌獸疫亞種+豬鏈球菌2型）系用致病性馬鏈球菌獸疫亞種(豬鏈球菌C群）BHZZ-L1株和豬鏈球菌2型BHZZ-L4株分別接種適宜培養(yǎng)基培養(yǎng)，收獲培養(yǎng)物，經(jīng)甲醛溶液滅活后，加入蜂膠佐劑混合乳化制成，主要用于預(yù)防馬鏈球菌獸疫亞種和豬鏈球菌2型感染引起的豬鏈球菌，并被批準(zhǔn)為三類新獸藥。王金合等配制鋁膠佐劑，制備自家鋁膠滅活苗對(duì)豬鏈球菌病進(jìn)行防治，利用本場(chǎng)分離菌株制備自家菌苗保護(hù)率高，成本低。在豬場(chǎng)分離到致病性菌株制成的自家滅活菌苗能夠降低豬的死亡率，但這種自家滅活菌苗由于其血清型的局限性，只能用作預(yù)防同種血清型的菌株，而對(duì)其它新暴發(fā)的血清型菌株保護(hù)力差。建議豬場(chǎng)在合理的免疫程序下使用了鏈球菌的商品疫苗仍不能得到有效地保護(hù)，可以考慮制備豬鏈球菌自家滅活疫苗進(jìn)行預(yù)防豬鏈球菌病。

二、活菌苗

目前，市場(chǎng)上應(yīng)用的活菌苗大多為弱毒菌苗。弱毒菌苗是一種病原致病力減弱但仍保持原有的抗原性，也就是用人工致弱或自然篩選的弱毒菌株，經(jīng)合適條件培養(yǎng)后制備的疫苗。該疫苗的優(yōu)點(diǎn)是病原可在免疫動(dòng)物機(jī)體內(nèi)繁殖，且用量小，免疫原性好，免疫期長(zhǎng)，使用方便，不影響動(dòng)物產(chǎn)品的品質(zhì)。缺點(diǎn)是弱毒菌株的毒力易返強(qiáng)，且容易散毒，對(duì)一些極易感動(dòng)物存在一定的危險(xiǎn)性。由于其運(yùn)輸和貯存受一定的條件限制，而且保存期較短，故將其制成凍干弱毒菌苗可延長(zhǎng)疫苗的保存期。

Holt用活的無(wú)毒菌株反復(fù)進(jìn)行免疫，能夠使豬得到堅(jiān)強(qiáng)的免疫保護(hù)，但不能清除已經(jīng)定居在扁桃體和關(guān)節(jié)里的鏈球菌，亦不能清除隱性感染豬扁桃體內(nèi)的細(xì)菌。Busque用豬鏈球菌2型無(wú)毒株(#1330）對(duì)4周齡的小豬進(jìn)行接種免疫，接種21天后用豬鏈球菌2型有毒株（#999）進(jìn)行攻毒實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示用#1330株進(jìn)行3次接種免疫的15頭仔豬中只有1頭表現(xiàn)出一些中度的臨床癥狀，接種3次的保護(hù)力明顯優(yōu)于接種2次的保護(hù)力，證明了該無(wú)毒株具有高的免疫保護(hù)力。高云飛采用ST171弱毒菌種，經(jīng)過培養(yǎng)后，加入適當(dāng)保護(hù)劑，制成豬鏈球菌病活疫苗，經(jīng)動(dòng)物攻毒保護(hù)試驗(yàn)證明免疫保護(hù)力為9/12（75%），經(jīng)過安全試驗(yàn)和效力試驗(yàn)等證明，具有良好的免疫原性和免疫保護(hù)力。

三、生物技術(shù)疫苗

生物技術(shù)疫苗是利用生物技術(shù)制備的分子水平的疫苗，包括基因工程亞單位疫苗、合成肽疫苗、抗獨(dú)特型疫苗、基因工程活疫苗以及DNA疫苗。目前研究主要集中在對(duì)致病菌的一些具有免疫原性的蛋白進(jìn)行基因分析、重組和表達(dá)，進(jìn)而對(duì)其免疫原性進(jìn)行檢測(cè)，從而篩選出疫苗的候選菌株，以期制造出能夠?qū)χ虏【M(jìn)行有效預(yù)防的基因工程疫苗。

Zhang Anding等通過蛋白原核表達(dá)，表達(dá)了烯醇化酶基因的重組蛋白，并應(yīng)用到小鼠攻毒保護(hù)性試驗(yàn)中，其能夠?qū)关i鏈球菌2型和7型的攻擊，起到了免疫保護(hù)作用。試驗(yàn)證明烯醇化酶可作為新的亞單位疫苗的候選蛋白，是一種保護(hù)性蛋白。一個(gè)大小為110KD的Sao蛋白被發(fā)現(xiàn)，通過電子顯微鏡技術(shù)利用其抗血清與豬鏈球菌結(jié)合發(fā)現(xiàn)其定位在細(xì)菌表面，且高度的保守。用重組Sao蛋白免疫豬能夠得到顯著的體液免疫應(yīng)答，并能保護(hù)豬免受有毒株的感染，可作為疫苗候選株進(jìn)行研究。Elliott SD研究發(fā)現(xiàn)，CPS與弗氏不完全佐劑制成的油乳劑苗，接種小豬并能夠誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生CPS抗體，具有一定的保護(hù)力。JacobsAA從豬鏈球菌2型中分離純化出SLY，將純化的SLY接種動(dòng)物，免疫2次以后，免疫血清與血溶素的中和活性明顯提高，攻毒后只是產(chǎn)生輕度臨床的病癥并很快消退，而用不含SLY的其他蛋白接種豬攻毒后僅產(chǎn)生很弱的免疫保護(hù)作用。劉麗娜等人利用基因工程手段獲得的純化重組纖連蛋白結(jié)合蛋白免疫小鼠，間接ELISA檢測(cè)鼠抗血清效價(jià)，結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)纖連蛋白結(jié)合蛋白能刺激小鼠機(jī)體產(chǎn)生強(qiáng)大的體液免疫應(yīng)答，說明纖連蛋白結(jié)合蛋白確實(shí)具有良好的免疫原性，并且不同分離株的纖連蛋白結(jié)合蛋白基因同源性很高，氨基酸序列相當(dāng)保守，符合作為疫苗保護(hù)性抗原的條件，所以可將基因工程手段獲得的純化重組蛋白作為豬鏈球菌疫苗候選分子參與后續(xù)的研究。

（略）