李先偉，杜 潔，李元建△

（1.皖南醫(yī)學(xué)院藥理學(xué)教研室，安徽 蕪湖241002；2.中南大學(xué)藥學(xué)院藥理學(xué)系，湖南 長(zhǎng)沙410078）

肺動(dòng)脈高壓是眾多心肺血管疾病發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的重要病理生理環(huán)節(jié)，血管重構(gòu)是肺動(dòng)脈高壓（pulmonary arterial hypertension，PAH）的重要病理特征，肺小血管肌化可引起肺血管阻力增加，最終導(dǎo)致失代償性心衰甚至死亡［1］。膠原作為細(xì)胞外基質(zhì)的重要組成部分，在肺血管結(jié)構(gòu)重建過(guò)程中發(fā)揮了極其重要的作用［2］。大量研究表明，降鈣素基因相關(guān)肽（calcitonin gene related peptide，CGRP）在 PAH血管重構(gòu)中起著重要的作用［3，4］。我們前期的研究發(fā)現(xiàn)，CGRP能夠抑制低氧誘導(dǎo)的肺動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞（PASMCs）的增殖，其機(jī)制與其抑制細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白激酶 1／2（ERK1／2）信號(hào)通路有關(guān)［5］，但其對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)重構(gòu)是否有作用尚不清楚。本研究首先通過(guò)低氧性PAH動(dòng)物模型，研究?jī)?nèi)源性CGRP對(duì)低氧性PAH肺血管膠原代謝的影響。然后在培養(yǎng)的PASMCs中，觀察外源性CGRP是否可以抑制低氧誘導(dǎo)的細(xì)胞膠原的表達(dá)，進(jìn)而探討CGRP對(duì)PAH血管重構(gòu)的作用及其可能機(jī)制，希望能為低氧性PAH發(fā)病機(jī)制提供新的實(shí)驗(yàn)證據(jù)，并為尋找治療低氧性PAH藥物提供思路。

1 材料與方法

1.1 材料

雄性SD大鼠，體重180～220 g（湖南斯萊克）。小鼠抗大鼠 ERK1／2及 phospho-ERK1／2（p-ERK1／2）單克隆抗體（美國(guó) cell signaling）。Masson染色試劑盒（南京凱基）。CGRP放射免疫試劑盒（北京東亞）。BrdU增殖檢測(cè)試劑盒（美國(guó) Roche）；CGRP、CGRP8-37及 ERK1／2抑制劑 PD 98059（美國(guó) sigma）；PrimeScriptTM RT reagent Kit、Power SYBR Green PCR Master Mix（大連寶生物工程有限公司），引物設(shè)計(jì)合成（上海生物）。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物分組及模型的制備 大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)一周，按體重隨機(jī)分為 3組：（1）常氧組（Normoxia）；（2）低氧組（Hypoxia）；（3）Hypoxia＋辣椒素（Capsaicin）組：低氧前4 d大鼠皮下注射辣椒素（50 mg／（kg·d）），耗竭內(nèi)源性 CGRP。Hypoxia與 Hypoxia＋Capsaicin組放入含10%氧氣的低氧倉(cāng)中，倉(cāng)中用無(wú)水氯化鈣吸收水分，鈉石灰吸收二氧化碳。維持3周即可成模。

1.2.2 血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)的測(cè)定 造模后3周用2%戊巴比妥鈉（60mg／kg）腹腔注射麻醉大鼠。將連有壓力換能器的聚乙烯導(dǎo)管經(jīng)右頸外靜脈插入右心室及肺動(dòng)脈，分別記錄右心室收縮壓（RVSP）和平均肺動(dòng)脈壓（mPAP）。

1.2.3 肺組織血管形態(tài)學(xué)觀察及Masson染色 取大鼠左肺以4%多聚甲醛固定48 h，石蠟包埋切片，行HE染色。每只大鼠選1張肺結(jié)構(gòu)完整的切片，利用Nikon＆spot圖像采集處理系統(tǒng)，每張切片隨機(jī)計(jì)算20根管徑50～100μm的肺小動(dòng)脈管壁厚度（血管內(nèi)膜和外膜之間距離）和外徑，將肺小動(dòng)脈管壁厚度占外徑的百分比WT%（WT%＝管壁厚度／外徑×100%）作為肺血管重構(gòu)的量化指標(biāo)。肺組織Masson膠原染色按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.2.4 血漿CGRP濃度測(cè)定 頸動(dòng)脈采血2 ml集中于含10%Na2EDTA 40μl和抑肽酶40μl的試管中，3 500 r／min，4℃離心 20 min，收集血漿，按 CGRP放免試劑盒說(shuō)明書(shū)測(cè)定血漿中CGRP的濃度。

1.2.5 大鼠原代肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞（PASMCs）的培養(yǎng)及細(xì)胞實(shí)驗(yàn)分組 按文獻(xiàn)采用組織貼塊法制備PASMCs［6］，經(jīng) alpha-smooth muscle actin（α-SMA）免疫熒光染色鑒定后3～8代用于實(shí)驗(yàn)。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)分8組，每組9個(gè)樣本：（1）Normoxia組：細(xì)胞用 21%O2處理 48 h；（2）Hypoxia組：細(xì)胞用 3%O2處理 48 h；（3）Hypoxia＋二甲基亞砜（DMSO）組：細(xì)胞用PD98059溶媒DMSO預(yù)處理1 h，再低氧處理48 h；（4）Hypoxia＋PD98059 1μmol／L組：細(xì)胞用 PD98059 1μmol／L預(yù)處理 1 h，再低氧處理 48 h；（5）Hypoxia＋CGRP 1 nmol／L組：細(xì)胞用 CGRP（1 nmol／L）預(yù)處理 1 h，再低氧處理 48 h；（6）Hypoxia＋CGRP 10 nmol／L組：細(xì)胞用 CGRP（10 nmol／L）預(yù)處理1 h，再低氧處理48 h；（7）Hypoxia＋CGRP 100 nmol／L組：細(xì)胞用CGRP（100 nmol／L）預(yù)處理 1 h，再低氧處理 48 h；（8）Hypoxia＋CGRP8-371μmol／L和 CGRP 100 nmol／L組：細(xì)胞用 CGRP8-37（1μmol／L）和 CGRP（100 nmol／L）預(yù)處理1 h，再低氧處理48 h。

1.2.6 BrdU法測(cè)定細(xì)胞增殖 細(xì)胞以6×103cells／well的密度種于96孔板，貼壁后用1%FBS的DMEM高糖培基處理24 h。細(xì)胞分別根據(jù)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)進(jìn)行處理，處理結(jié)束時(shí)，每孔加入10μl BrdU，正常培養(yǎng)條件下孵育4 h，固定液室溫孵育30 min，室溫孵育BrdU抗體90min，PBS洗滌5min×3，加入200μl底物室溫反應(yīng) 15 min，每孔加入 1 mol／L硫酸 25μl，2 min之內(nèi)在450 nm波長(zhǎng)下用酶標(biāo)儀檢測(cè)光密度值（OD值）。每組9個(gè)復(fù)孔。

1.2.7 Real Time PCR檢測(cè) CGRP、collagenⅠ和 collagenⅢmRNA的表達(dá) 用Trizol等試劑提取組織或細(xì)胞總RNA后，按逆轉(zhuǎn)錄試劑盒操作步驟進(jìn)行RT反應(yīng)。所得cDNA在實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀（7300 Real Time PCR System，Applied Biosystem）上進(jìn)行反應(yīng)。按照說(shuō)明，使用Power SYBR Green PCRMaster Mix試劑盒，以2μl cDNA為模板，以 GAPDH為內(nèi)參照，PCR擴(kuò)增基因片段（表1）。PCR反應(yīng)參數(shù)：預(yù)變性95℃ 30 s，95℃變性 5 s，60℃退火和延伸 31 s，共 40個(gè)循環(huán)，在延伸的過(guò)程中搜集熒光信號(hào)。于每次擴(kuò)增的同時(shí)設(shè)置無(wú)cDNA的陰性對(duì)照，將PCR產(chǎn)物做熔解曲線，以證實(shí)以上 PCR反應(yīng)產(chǎn)物特異性良好。用7300 System SDS Software分析數(shù)據(jù)，統(tǒng)計(jì)ΔΔCt值，計(jì)算RQ值以比較各組mRNA的表達(dá)。

Tab.1 Primer sequences used for determination of CGRP、collagenⅠand collagenⅢgene expression

1.2.8 Western blot檢測(cè) ERK1／2及 p-ERK1／2蛋白表達(dá) 低溫提取組織或細(xì)胞蛋白，BCA法測(cè)定蛋白濃度。每孔上樣50μg蛋白，12%SDS-PAGE分離樣品，轉(zhuǎn)膜，封閉，一抗（1∶1 000）4℃過(guò)夜。洗膜，二抗（1∶2 000）室溫孵育1 h。洗膜后將高靈敏的 LunimataTM Crescendo發(fā)光劑加到膜的正面，采用 Bio-Rad ChemiDoc XRS＋成像系統(tǒng)進(jìn)行拍照用，Image J 1.43（National Institutes of Health）軟件進(jìn)行灰度值分析并比較各組蛋白表達(dá)差異。

1.3 統(tǒng)計(jì)分析

所有數(shù)據(jù)均表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（±s），統(tǒng)計(jì)分析采用 SPSS l3.0軟件。多組均數(shù)比較采用ANOVA及Newman-Keuls-Student多重比較t檢驗(yàn)分析。

2 結(jié)果

2.1 Capsaicin對(duì)低氧誘導(dǎo)的 PAH大鼠 RVSP、mPAP及血管重構(gòu)的影響

經(jīng)過(guò)3周持續(xù)低氧，Hypoxia組 RVSP、mPAP均顯著高于Normoxia組（P＜0.01）；HE染色顯示Hypoxia組肺小血管顯著增厚，WT%明顯升高。而用辣椒素預(yù)先耗竭內(nèi)源性CGRP后能夠加重低氧誘導(dǎo)的上述改變（P＜0.05，圖 1，表 2）。

Tab.2 Effectof capsaicin on RVSP，mPAPandWT%in hypoxia-induced pulmonary arterial hypertension of rats（±s，n＝8）

Tab.2 Effectof capsaicin on RVSP，mPAPandWT%in hypoxia-induced pulmonary arterial hypertension of rats（±s，n＝8）

RVSP：Right ventricle systolic pressure；mPAP：Mean pulmonary arterial pressure；WT%：Wall thickness／external diameter×100%**P＜0.01 vs Normoxia；＃P＜0.05 vs Hypoxia

Group RVSP（mmHg） mPAP（mmHg） WT（%）Normoxia 26.83±2.68 19.09±2.01 36.28±6.09 Hypoxia 37.03±4.18**25.21±1.88**52.19±7.59**Hypoxia＋capsaicin 42.51±3.81＃ 28.49±2.24＃ 63.16±9.79＃

Fig.1 Effect of capsaicin on pulmonary vascular remodeling in hypoxia-induced pulmonary arterialhypertension of rats（HE×200）

2.2 Capsaicin對(duì)低氧誘導(dǎo)的PAH大鼠肺動(dòng)脈膠原表達(dá)的影響

Masson染色結(jié)果顯示Normoxia組僅少數(shù)肺動(dòng)脈外膜出現(xiàn)藍(lán)染的膠原纖維，小動(dòng)脈中膜和內(nèi)膜層未見(jiàn)藍(lán)染的膠原纖維；Hypoxia組小動(dòng)脈中膜增厚、中膜和內(nèi)膜層出現(xiàn)藍(lán)染的膠原纖維沉積，而Capsaicin＋Hypoxia組的這種病理變化進(jìn)一步加重（圖2）。與Normoxia組相比，Hypoxia組肺動(dòng)脈Ⅰ型和Ⅲ型膠原mRNA表達(dá)水平明顯增高（P＜0.01），而辣椒素預(yù)處理組膠原的表達(dá)進(jìn)一步增高（P＜0.05，表3）。

Fig.2 Effect of capsaicin on collagen accumulation of pulmonary arteries in hypoxia-induced pulmonary arterial hypertension of rats（Masson×200）

Tab.3 Effect of capsaicin on collagenⅠand collagenⅢ mRNA expression of pulmonary arteries in hypoxia-induced pulmonary arterial hypertension of rats（±s，n＝8）

Tab.3 Effect of capsaicin on collagenⅠand collagenⅢ mRNA expression of pulmonary arteries in hypoxia-induced pulmonary arterial hypertension of rats（±s，n＝8）

PA：Pulmonary artery**P＜0.01 vs Normoxia；＃P＜0.05 vs Hypoxia

Group CollagenⅠmRNA level in PA（relative unit，RQ value）CollagenⅢmRNA level in PA（relative unit，RQ value ）Normoxia 1.08±0.36 1.05±0.19 Hypoxia 3.16±0.67** 1.91±0.48**Hypoxia＋capsaicin 4.23±0.84＃ 2.58±0.55＃

2.3 Capsaicin對(duì)低氧誘導(dǎo)的PAH大鼠血漿CGRP含量的影響

與Normoxia組相比，低氧能明顯降低大鼠血漿CGRP水平及肺組織 CGRP mRNA的表達(dá)（P＜0.01）；而用辣椒素預(yù)先耗竭內(nèi)源性CGRP后能夠進(jìn)一步降低血漿CGRP水平肺組織CGRP的表達(dá)（P＜0.05，表 4）。

2.4 Capsaicin對(duì)低氧誘導(dǎo)的 PAH大鼠肺組織CGRP表達(dá)的影響

與Normoxia組相比，低氧能明顯降低大鼠血漿CGRP水平及肺組織 CGRP mRNA的表達(dá)（P＜0.01）；而用辣椒素預(yù)先耗竭內(nèi)源性CGRP后能夠進(jìn)一步降低血漿CGRP水平肺組織CGRP的表達(dá)（P＜0.05，表 4）。

2.5 Capsaicin對(duì)低氧誘導(dǎo)的PAH大鼠肺動(dòng)脈p-ERK1／2蛋白表達(dá)的影響

Western blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，低氧能明顯促進(jìn)肺動(dòng)脈p-ERK1／2的表達(dá)（P＜0.01），而用辣椒素預(yù)先耗竭內(nèi)源性CGRP后進(jìn)一步增加p-ERK1／2的表達(dá)（P＜0.05，表 4，圖 3）。

Tab.4 Effect of capsaicin on CGRP level and p-ERK1／2 protein expression of pulmonary arteries in hypoxia-induced pulmonary arterial hypertension of rats（±s，n＝8）

Tab.4 Effect of capsaicin on CGRP level and p-ERK1／2 protein expression of pulmonary arteries in hypoxia-induced pulmonary arterial hypertension of rats（±s，n＝8）

PA：Pulmonary artery；CGRP：Calcitonin gene-related peptide；p-ERK1／2：Phosphorylated ERK1／2**P＜0.01 vs Normoxia；＃P＜0.05 vs Hypoxia

Group CGRP concentration in plasma（pg／ml）α-CGRPmRNA level in lung（relative unit，RQ value） β-CGRPmRNA level in lung（relative unit，RQ value）p-ERK1／2 protein level in PA（p-ERK1／2／ERK1／2）Normoxia 69.95±9.63 1.02±0.23 1.01±0.25 0.99±0.11 Hypoxia 47.11±8.01** 0.68±0.11** 0.65±0.14** 1.98±0.12**Hypoxia＋capsaicin 34.21±9.41＃ 0.44±0.12＃ 0.41±0.13＃ 2.41±0.22＃

Fig.3 Effectof capsaicin on p-ERK1／2 protein expression of pulmonary arteries in hypoxia-induced pulmonary arterial hypertension of rats

2.6 CGRP對(duì)低氧誘導(dǎo)的PASMCs細(xì)胞增殖的影響

BrdU檢測(cè)發(fā)現(xiàn)低氧可明顯促進(jìn)細(xì)胞增殖（P＜0.01），而此作用可以明顯的被 ERK1／2抑制劑PD98059所抵消（P＜0.01）。CGRP（1，10，100 nmol／L）可劑量依賴性的抑制低氧誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖，而CGRP的這些作用可以被CGRP阻斷劑CGRP8-37所抵消（表 5）。

2.7 CGRP對(duì)低氧誘導(dǎo)大鼠PASMCs p-ERK1／2蛋白表達(dá)的影響

Western blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，低氧能明顯促進(jìn)PASMCs p-ERK1／2蛋白表達(dá)，而此作用可以明顯的被ERK1／2抑制劑 PD98059所抵消（P＜0.01）。CGRP（1，10，100 nmol／L）可劑量依賴性的抑制低氧誘導(dǎo)的 p-ERK1／2蛋白表達(dá)，而CGRP8-37可以抵消 CGRP的這些作用（表 5，圖 4）。

2.8 CGRP對(duì)低氧誘導(dǎo)的大鼠PASMCs collagenⅠ和collagenⅢmRNA表達(dá)的影響

Real time PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，低氧能明顯促進(jìn)細(xì)胞collagenⅠ和collagenⅢ mRNA的表達(dá)，而此作用可以明顯的被ERK1／2抑制劑 PD98059所抵消（P＜0.01）。CGRP（1，10，100 nmol／L）可劑量依賴性的抑制低氧誘導(dǎo)的collagenⅠ和collagenⅢ mRNA的表達(dá)，而CGRP8-37可以抵消CGRP的這些作用（表5）。

Tab.5 Effect of CGRP on hypoxia-induced proliferation of pulmonary artery smoothmuscle cells and expression of p-ERK1／2，collagenⅠand collagenⅢ（±s，n＝9）

Tab.5 Effect of CGRP on hypoxia-induced proliferation of pulmonary artery smoothmuscle cells and expression of p-ERK1／2，collagenⅠand collagenⅢ（±s，n＝9）

PASMCs：Pulmonary arterial smoothmuscle cells；p-ERK1／2：Phosphorylated ERK1／2**P＜0.01 vs Normoxia；＃P＜0.05，＃＃P＜0.01 vs Hypoxia；△△P＜0.01 vs CGRP（100 nmol／L）

Group BrdU incorporation（OD value）p-ERK1／2 protein level in PASMCs（p-ERK1／2／ERK1／2）CollagenⅠmRNA level in PASMCs（relative unit，RQ value）CollagenⅢmRNA level in PASMCs（relative unit，RQ value ）Normoxia 0.29±0.09 1.03±0.10 1.02±0.15 1.04±0.17 Hypoxia 0.91±0.15** 4.48±0.20** 6.66±0.42** 4.75±0.45**Hypoxia＋DMSO 0.94±0.19 4.51±0.18 6.68±0.54 4.73±0.36 Hypoxia＋PD98059（1μmol／L） 0.37±0.13＃＃ 0.13±0.03＃＃ 2.80±0.18＃＃ 1.90±0.24＃＃Hypoxia＋CGRP（1 nmol／L） 0.63±0.12＃ 3.94±0.26＃ 4.85±0.36＃ 3.31±0.27＃Hypoxia＋CGRP（10 nmol／L） 0.58±0.16＃＃ 3.27±0.19＃＃ 4.36±0.42＃＃ 3.03±0.25＃＃Hypoxia＋CGRP（100 nmol／L） 0.44±0.14＃＃ 2.56±0.18＃＃ 3.46±0.27＃＃ 2.76±0.26＃＃Hypoxia＋CGRP8-37（1μmol／L） 0.89±0.12△△ 4.49±0.16△△ 6.55±0.62△△ 4.57±0.38△△

Fig.4 Effect of CGRP on expression of p-ERK1／2 in pulmonary artery smoothmuscle cells

3 討論

肺血管重構(gòu)是低氧性PAH形成過(guò)程中重要的病理基礎(chǔ)，其主要特征包括肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞增生、腫脹，中膜平滑肌細(xì)胞增生、肥大和向合成表型轉(zhuǎn)化，以及細(xì)胞外基質(zhì)的異常沉積［1］。膠原是細(xì)胞外基質(zhì)主要組成部分，膠原的增生、沉積在肺血管重構(gòu)和肺動(dòng)脈高壓的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要而又直接的作用。肺血管壁的主要膠原成分是Ⅰ型和Ⅲ型膠原，Ⅰ型膠原與血管壁的韌性和抗張力有關(guān)，Ⅲ型膠原與血管壁的彈性有關(guān)［2］。CGRP是由37個(gè)氨基酸組成的感覺(jué)神經(jīng)肽，廣泛分布于中樞和外周神經(jīng)系統(tǒng)及心血管及肺血管床內(nèi)［7］。研究發(fā)現(xiàn)，新生大鼠持續(xù)低氧三周能夠引起持續(xù)性PAH并伴隨著血漿CGRP水平的下降［4］，靶向敲除CGRP受體基因能夠加重低氧誘導(dǎo)的PAH［8］。本研究結(jié)果提示大鼠低氧3周后大鼠RVSP、mPAP明顯升高，肺小血管肌化程度明顯增強(qiáng)，肺動(dòng)脈中膜厚度明顯增加，提示肺小血管發(fā)生重構(gòu)。同時(shí)肺動(dòng)脈Ⅰ型和Ⅲ型膠原的表達(dá)明顯增強(qiáng)，提示膠原堆積在低氧性肺血管重構(gòu)中發(fā)揮重要作用。膠原的堆積將導(dǎo)致肺動(dòng)脈管壁增厚，管腔變小，血管順應(yīng)性下降，促進(jìn)肺動(dòng)脈高壓的形成。同時(shí)我們還發(fā)現(xiàn)，在大鼠低氧性PAH形成的過(guò)程中伴隨著CGRP表達(dá)的下調(diào)，而用大劑量辣椒素耗竭內(nèi)源性CGRP后能夠加重上述的病理變化，表明CGRP可能參與了低氧性PAH膠原沉積和血管重構(gòu)的發(fā)生與發(fā)展。更重要的是我們還發(fā)現(xiàn)，外源性CGRP能夠劑量依賴性地抑制低氧誘導(dǎo)的PASMCs增殖及Ⅰ型和Ⅲ型膠原的表達(dá)，而這種抑制作用能夠被CGRP受體阻斷劑CGRP8-37所抵消。提示 CGRP可能通過(guò)抑制肺動(dòng)脈膠原異常堆積參與對(duì)低氧性PAH肺血管重構(gòu)的調(diào)節(jié)作用。

目前低氧性PAH肺動(dòng)脈膠原沉積的原因還不完全清楚。血管壁過(guò)多的膠原主要來(lái)自中膜平滑肌細(xì)胞和外膜成纖維細(xì)胞。絲裂原活化蛋白激酶（MAPKs）是細(xì)胞內(nèi)的一類絲氨酸／蘇氨酸蛋白激酶。MAPKs信號(hào)通路包括：ERK1／2信號(hào)通路、c-Jun氨基末端激酶（JNK）信號(hào)通路及p38 MAPK信號(hào)通路，其中ERK1／2在調(diào)節(jié)血管平滑肌細(xì)胞增殖和膠原合成過(guò)程中起著重要的作用［9］。我們前期的研究發(fā)現(xiàn)，CGRP能夠抑制低氧誘導(dǎo)的肺動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞（PASMCs）的增殖，其機(jī)制與其抑制 ERK1／2信號(hào)通路有關(guān)［6］。本研究結(jié)果也顯示在低氧性肺動(dòng)脈高壓大鼠肺動(dòng)脈膠原堆積的同時(shí)，肺動(dòng)脈ERK1／2磷酸化水平明顯增高。同時(shí)我們還發(fā)現(xiàn)在低氧誘導(dǎo)PASMCs增殖的同時(shí)伴隨著p-ERK1／2表達(dá)的上調(diào)，而外源性CGRP在抑制PASMCs膠原表達(dá)的同時(shí)也劑量依賴性的抑制p-ERK1／2蛋白表達(dá)，CGRP的這些作用與 ERK1／2的抑制劑 PD98059相似，也可以被CGRP受體阻斷劑CGRP8-37所抵消。

綜上所述，CGRP能夠抑制低氧誘導(dǎo)的PAH血管重構(gòu)，其機(jī)制可能與抑制ERK1／2的磷酸化，降低肺動(dòng)脈膠原異常沉積有關(guān)。這將為臨床防治低氧性肺動(dòng)脈高壓提供了新的思路和靶點(diǎn)。但是低氧性PAH只是肺動(dòng)脈高壓的一種，而CGRP是否通過(guò)上述的機(jī)制參與非低氧性肺動(dòng)脈高壓的發(fā)生與發(fā)展，目前還不清楚，有待進(jìn)一步研究。

［1］ Morrell NW，Adnot S，Archer S L，et al.Cellular and molecular basis of pulmonary arterial hypertension［J］.J Am Coll Cardiol，2009，54（1 Suppl）：S20-31.

［2］ Ooi C Y，Wang Z，Tabima DM，etal.The role of collagen in extralobar pulmonary artery stiffening in response to hypoxia-induced pulmonary hypertension［J］.Am J Physiol Heart Circ Physiol，2010，299（6）：H1823-1831.

［3］ Keith IM，Tjen-A-LooiS，Kraiczi H，et al.Three-week neonatal hypoxia reduces blood CGRP and causes persistent pulmonary hypertension in rats［J］.Am JPhysiolHeartCirc Physiol，2000，279（4）：H1571-1578.

［4］ Chattergoon N N，D’Souza FM，DengW，et al.Antiproliferative effects of calcitonin gene-related peptide in aortic and pulmonary artery smoothmuscle cells［J］.Am JPhysiol Lung CellMol Physiol，2005，288（1）：L202-211.

［5］ LiXW，Hu CP，WuW H，etal.Inhibitory effectof calcitonin gene-related peptide on hypoxia-induced rat pulmonary artery smoothmuscle cells proliferation：role of ERK1／2 and p27［J］.Eur JPharmacol，2012，679（1-3）：117-126.

［6］ Li X H，Peng J，Tan N，et al.Involvement of asymmetric dimethylarginine and Rho kinase in the vascular remodeling in monocrotaline-induced pulmonary hypertension［J］.Vascul Pharmacol，2010，53（5-6）：223-229.

［7］ Bell D，McDermott B J.Calcitonin gene-related peptide in the cardiovascular system：characterization of receptor populations and their（patho）physiological significance［J］.Pharmacol Rev，1996，48（2）：253-288.

［8］ Qing X，Keith IM.Targeted blocking of gene expression for CGRP receptors elevates pulmonary artery pressure in hypoxic rats［J］.Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol，2003，285（1）：L86-96.

［9］ Li L F，Liao SK，Huang C C，et al.Serine／threonine kinase-protein kinase B and extracellular signal-regulated kinase regulate ventilator-induced pulmonary fibrosis after bleomycininduced acute lung injury：a prospective，controlled animal experiment［J］.Crit Care，2008，12（4）：R103.