吳小娟,李宏喜,張婷婷,單有全
(1.甘肅省清水縣畜牧獸醫(yī)局,甘肅 清水 741400;2.甘肅省清水縣紅堡鎮(zhèn)動物疫病防控與畜牧技術服務中心,甘肅 清水 741400;3.甘肅省清水縣黃門鄉(xiāng)動物疫病防控與畜牧技術服務中心,甘肅 清水 741400)
2013年清水縣牛口蹄疫抗體水平的檢測與分析
吳小娟1,李宏喜1,張婷婷2,單有全*3
(1.甘肅省清水縣畜牧獸醫(yī)局,甘肅 清水 741400;2.甘肅省清水縣紅堡鎮(zhèn)動物疫病防控與畜牧技術服務中心,甘肅 清水 741400;3.甘肅省清水縣黃門鄉(xiāng)動物疫病防控與畜牧技術服務中心,甘肅 清水 741400)
口蹄疫(foot and mouth disease,FMD)是由口蹄疫病毒(FMDV)引起,多種偶蹄動物共患的一種急性、熱性、高度傳染性疫病。口蹄疫病毒具有多型性、易變性的特點。根據其血清學特征,現已知有7個血清型即A、O、C、南非1、南非2、南非3及亞洲Ⅰ型[1]其病理特征是患病動物口腔黏膜以及蹄部和乳房皮膚等處發(fā)生水泡和潰爛。本病被世界衛(wèi)生組織(WHO)列為A類動物疫病之首,被我國農業(yè)部列為一類疫病。是我國重點防御的疾病。
近幾年,口蹄疫病毒造成的危害時有發(fā)生,已造成了相當大的經濟損失并直接威脅到人類生命及公共衛(wèi)生安全。免疫疫苗是我國采取的主要措施之一。為了防控重大動物疫病的發(fā)生和傳播,全國各地相繼進行??谔阋咭呙缑庖呓臃N工作。同時,通過實驗室檢測手段掌握疫苗免疫后畜體內產生的抗體水平是否具有保護作用,并對免疫失敗個體進行補免,最大程度提高疫苗免疫保護作用,確保牲畜健康生產。在本地區(qū)抽取885份被免牛的血清進行抗體檢測,以便了解抗體水平變化規(guī)律。并將獲得的血清學檢測資料進行分析。結果通報如下。
1.1.1 主要儀器 96孔110°反應板、微量移液器、震蕩器、H-25型離心機、DK-8AD型定熱恒溫水槽。
1.1.2 血清 實驗采用血清來自清水縣13鄉(xiāng)鎮(zhèn),實驗份數為885份,血液采集時間一般在接種后20 d左右。
1.1.3 試劑 口蹄疫O型免疫抗體正向間接血凝診斷試劑,口蹄疫O型正向血凝抗原,陰性血清,口蹄疫O型陽性血清,稀釋液。(生產廠家:中國農科院蘭州獸醫(yī)研究所)。
1.2.1 抗原標定 操作方法:以《2008動物防疫新技術標準規(guī)程與管理法規(guī)手冊》為依據進行抗原標定[2]。
1)用微量移液器向V型微量反應板(110°)每孔分別加間接血凝診斷試劑25μL。
2)換一吸頭吸取25μL抗原液,加于第1孔的間接血凝診斷試劑中,并用移液器擠壓15~20次使液體混和均勻,然后取25μL移入第2孔,混勻后取25μL移入第3孔,依次倍比稀釋到第11孔,第11孔中液體混勻后從中吸出25μL棄去。第12孔不加抗原,作對照(詳見表1)。
3)換一吸頭吸取1%紅細胞懸液依次加入1~12個孔中,每孔加25μL。
4)加樣完畢,將反應板置于微型振蕩器上振蕩1~2min,室溫(18~20℃)下作用45min,觀察結果。
結果判定:參照黃創(chuàng)科等[3]的判斷方法,觀察反應混合液,根據出現凝集的程度:紅細胞平鋪孔底,呈倒狀的傘狀,邊緣有卷起的趨向,特別顯著者判為:++++(100%);次之:+++(75%);凝集清楚可見:++(50%),再次之(25%);陰性是血球沉于孔底中心,呈紐扣狀。將板傾斜,觀察紅細胞有無凝集,及其凝集狀態(tài)。血凝達50%以上的抗原最高稀釋倍數代表一個血凝單位[4]。
(注:該標準是以畜流感抗體間接血凝試驗抗體效價≥25判為合格為依據的[4])
1.2.2 間接血凝(HI)試驗 以《口蹄疫防治技術規(guī)范》[5]為依據進行間接血凝(HI)試驗。
制備4個血凝單位的抗原液:根據HA試驗結果,確定抗原的血凝價,用間接血凝診斷試劑液稀釋,使之含4個血凝單位的抗原。稀釋倍數按下式計算:
表1 抗原標定試驗操作術式
操作方法:①用微量移液器加間接血凝診斷試劑,1~11孔各加25μL,第12孔加50μL;②換一吸頭取待檢血清25μL置于第1孔的間接血凝診斷試劑中,擠壓15~20次混勻,吸出25μL放入第2孔中,然后依次倍比稀釋至第10孔,并將第10孔的液體混勻后取25μL棄去。第11孔加入25μL口蹄疫H5HI血清做對照,第12孔為間接血凝診斷試劑對照(詳見表2);③用微量移液器吸取稀釋好的4個血凝單位的抗原液,向1~11孔中分別加25μL。然后,振蕩1~2min,室溫(18~20℃)下放置30min;④取出血凝板,用微量移液器向每一孔中各加入1%紅細胞懸液25μL,再將反應板置于微型振蕩器上振蕩1~2min,混和均勻;⑤將反應板置室溫(18~20℃)下作用40min,觀察結果。
表2 間接血凝試驗操作術式
陰性對照血清1∶32孔、稀釋液對照孔均應無凝集,陽性血清1∶2~256各孔應出現“++至++++”凝集為合格[5]。
在對照孔合格的前提下,再觀察待檢血清各孔以呈現“++”凝集的最大稀釋倍數為該份血清的抗體效價,以完全抑制4個HAU抗原的血清最高稀釋倍數作為HI滴度。只有陰性對照孔血清滴度不大于23,陽性對照孔血清誤差不超過1個滴度,試驗結果才有效。HI價小于或等于24判定HI試驗陰性。
以H5的間接血凝(HI)效價達到25及以上為合格[6]。接種口蹄疫疫苗的免疫抗體效價達到1∶32為免疫合格[6],有抗口蹄疫病毒感染的能力,低于1∶32時應接種疫苗。70%血凝集為該份血清的最高抗體效價判為合格。
根據農業(yè)部《2008年高致病性禽流感和口蹄疫等重大動物疫病免疫方案》的相關規(guī)定,口蹄疫免疫21d抗體效價≥32(25)且合格率必須≥70%為免疫合格[7]。
清水縣13個鄉(xiāng)鎮(zhèn)??谔阋呖贵w的血清學檢測結果如表3所示。在檢測的陽性結果中,清水縣??谔阋逴型最高抗體滴度為256(28),主要分布在紅堡鎮(zhèn)、永清鎮(zhèn)2個鄉(xiāng)鎮(zhèn);HI最低抗體滴度為8(23),主要分布在遠門鄉(xiāng)、新城鄉(xiāng)2個鄉(xiāng)鎮(zhèn)。清水縣總體血清抗體陽性率為79.38%,血清抗體陽性率以永清鎮(zhèn)和紅堡鎮(zhèn)最高,達89.61%和88.64%,血清抗體陽性率以遠門鄉(xiāng)最低,為68.75%;永清鎮(zhèn)、白沙鄉(xiāng)等11個鄉(xiāng)鎮(zhèn)??谔阋逴型疫苗的免疫合格,遠門鄉(xiāng)1個鄉(xiāng)鎮(zhèn)未達到標準,其余各鄉(xiāng)鎮(zhèn)抗體水平均處于70%~90%之間。其中,六個鄉(xiāng)鎮(zhèn)在70%~80%之間,五個鄉(xiāng)鎮(zhèn)在80%~90%之間。從分布來看,偏僻地方的口蹄疫抗體效價普遍偏低,應加強免疫。
表3 2013年清水縣13鄉(xiāng)鎮(zhèn)口蹄疫抗體血清學檢測結果
從總體監(jiān)測結果來看,清水縣的口蹄疫免疫抗體效價水平總體水平較高,保持在70%~80%左右,基本達到農業(yè)部《2008年高致病性畜流感和口蹄疫等主要動物疫病監(jiān)測方案》中規(guī)定的口蹄疫抗體效價以大于等于32為合格,且合格率大于等于70%的總體要求[8]。說明清水縣家畜口蹄疫強制免疫密度大,效果較好。2013年以來,雖然本地家畜飼養(yǎng)量大、交易頻繁,但未發(fā)生一例口蹄疫疫情,更說明了免疫工作對于預防口蹄疫疫情的極端重要性。
雖然清水縣的口蹄疫免疫抗體效價水平總體水平較高,但是還有部分鄉(xiāng)鎮(zhèn)免疫率較低,究其原因,有以下幾種可能①打飛針,注射淺。疫苗的注射部位不準確、劑量不足。抽針時也存在疫苗回流耗損現象,導致有效注射劑量不足;②免疫密度未達到要求。病畜、瘦弱畜、臨產畜、幼畜等不能注射疫苗,而此次防疫在2月底3月初進行,部分牲畜處于臨產期而未注射疫苗;③疫苗保存及運輸要求在2~8℃環(huán)境下,避光保存,使用過程中未完全按照要求操作,影響了疫苗質量;④口蹄疫疫苗放置時間過長,容易出現沉淀,在使用前應搖勻。疫苗注射14~21 d后動物機體產生免疫抗體,在未產生抗體或抗體才開始產生水平不高時采集血清會影響到抗體效價;⑤各種應激,如藥物干擾、疾病感染以及抗原間相互反作用等都可能影響機體免疫球蛋白的產生;⑥一針多用在注射時不換針頭,個針頭注射多頭牛。如果遇到帶毒牛或有傳染病的牛,會傳染其它的牛,所以注射頭牛后要換個針頭;⑦家畜自身的原因,個別牛在注苗后沒有產生免疫力。另外,抗體變化中的反彈現象對抗體上升與下降規(guī)律的影響,在指導監(jiān)測的時間及對監(jiān)測結果的分析過程中,也會引起效價波動[9]。
口蹄疫(FMD)是由口蹄疫病毒(FMDV)引起的偶蹄動物一種急性、烈性、高度接觸性傳染病,對人類也有一定的感染性??谔阋叩牧餍薪o世界畜牧業(yè)造成極大危害和巨大經濟損失,同時也成為影響人類公眾衛(wèi)生健康的重要源頭之一,口蹄疫的危害在于其傳播途徑多,傳染性強,近年來,在我國相繼發(fā)生流行,嚴重影響了畜牧業(yè)的發(fā)展和動物及動物產品的國際貿易。國際獸醫(yī)局(OIE)將其列為A類傳染病首位,我國也將其列一類傳染病。為了盡快撲滅此病,國家對口蹄疫實行強制免疫 。
做好口蹄疫的預防工作,不僅對促進清水地區(qū)畜牧業(yè)的發(fā)展,而且對搞好全縣公共衛(wèi)生事業(yè)都具有重要意義,不可忽視。方法有:①一般措施:加強飼養(yǎng)管理,保持畜舍衛(wèi)生,經常進行消毒,對購進動物及產品、飼料、生物制品等進行嚴格檢疫,平時減少機體應激反應;②預防接種:適時對健康畜進行注射口蹄疫滅苗。每頭牛肌肉注射5mL,必要時加量注射。注射半個月后產生免疫力。每年免疫2~4次,同型保護一年;③消毒:糞便進行堆積發(fā)酵處理或用5%氨水消毒,畜舍、場地和用具以2%~4%燒堿液、10%石灰乳、0.2%~0.5%過氧乙酸或1%~2%福爾馬林噴灑消毒,毛、皮張用環(huán)氧乙烷、溴甲烷或甲醛消毒,肉品以2%乳酸或自然熟化處理。
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S823.2
A
1001-9111(2013)06-0084-03
2013-08-14
2013-10-26
吳小娟(1972-),女,甘肅省清水縣人,助理畜牧師,主要從事畜牧技術推廣工作。
*通訊作者:單有全(1976-),男,甘肅清水縣人,獸醫(yī)師,主要從事動物疫病防控與畜牧技術工作。