楊曉峰 陳文學 張鳳霞 楊 明*
(1吉林省通化興華藥業(yè)有限責任公司,通化134008;2吉林省中醫(yī)藥科學院新藥研究開發(fā)中心,長春130021)
六年生鮮人參毒理學實驗研究※
楊曉峰1陳文學2張鳳霞1楊 明2*
(1吉林省通化興華藥業(yè)有限責任公司,通化134008;2吉林省中醫(yī)藥科學院新藥研究開發(fā)中心,長春130021)
目的 觀察六年生鮮人參急性毒性及長期毒性,評價其食用安全性。方法 急性毒性試驗以最大給藥體積(0.35g/ml)給予大鼠,24h內灌胃給藥3次,連續(xù)觀察14d;長期毒性試驗采用灌胃給予大鼠高、中、低3個劑量(8.0、4.0、2.0g/kg)的六年生鮮人參,連續(xù)給藥30d,進行血液學、血液生化、臟體比、組織病理學檢查、常規(guī)檢查以及可逆性觀察。結果 急性毒性試驗未見明顯中毒癥狀,不同性別大鼠經(jīng)口最大耐受劑量(MTD)均大于20.4g/kg。長期毒性試驗結果表明,3個六年生鮮人參劑量組大鼠的外觀體征、行為活動、體質量、食物利用率、血液學、血液生化學、臟體比及病理組織學檢查均未見異常,可逆性觀察表明六年生鮮人參對大鼠未引起延遲毒性,與空白對照組比較差異均無顯著性(P>0.05)。結論 六年生鮮人參屬于實際無毒物,長期服用是安全的。
六年生鮮人參;急性毒性;長期毒性試驗
鮮人參為五加科人參屬植物人參(Panax ginseng C.A.Mey.)經(jīng)過清洗的新鮮根及根莖,具有大補元氣、補脾益肺、安神益智、生津等功效[1]。本文參照《GB 15193.1-2003食品安全性毒理學評價程序》及《新資源食品安全評價規(guī)程》的要求,通過急性毒性試驗,長期毒性試驗對六年生鮮人參的毒理學進行了初步的研究,為其食用的安全性依據(jù)。
1.1受試物六年生鮮人參(含水量71.03%)由中國農(nóng)業(yè)科學院左家特產(chǎn)研究所提供,試驗時粉碎,用蒸餾水配制成所需濃度。
1.2試驗動物及環(huán)境清潔級Wistar大鼠,均購自吉林大學基礎醫(yī)學院動物實驗中心。動物合格證號為:SCXK(吉)-2003-0001。根據(jù)相應試驗選擇性別、體質量和數(shù)量的動物。動物飼養(yǎng)環(huán)境:溫度為(23±1)℃;相對濕度50%±10%。
2.1大鼠急性毒性試驗取大鼠40只,體質量130~ 140g,雌雄各半,按體質量隨機分為2組(對照組及六年生鮮人參組),試驗前禁食16小時,自由飲水,于24小時內灌胃給予六年生鮮人參3次,累計給藥量20.4 g/kg,對照組給予同體積蒸餾水。給藥后連續(xù)觀察14d內大鼠的外觀體征、行為活動、精神狀態(tài)、腺體分泌、呼吸、排尿、糞便、體質量變化以及死亡等情況。
2.2長期毒性試驗取清潔級Wistar大鼠80只,按體質量隨機分為正常對照組,六年生鮮人參8.0、4.0和2.0g/kg三個服用劑量組,每組20只,雌雄各半。服用前,將六年生鮮人參用水果疏菜榨汁攪拌機粉細,蒸餾水配制成20g六年生鮮人參/100ml、10g六年生鮮人參/100ml和5g六年生鮮人參/100ml三個濃度的懸液,供動物灌服。每日上午8時和下午16時各口服灌胃一次,連續(xù)30d。灌胃體積為20ml/kg體質量/次,對照組動物灌胃給予等體積的蒸餾水。停用后,恢復性觀察2周。試驗期間對大鼠的外觀體征,行為活動、腺體分泌、呼吸、排尿、糞便等進行觀察、記錄,對體質量增長、體溫、攝食量等指標進行檢測,并分別于灌服30d后和2周恢復期結束后進行血液學[紅細胞計數(shù)(RBC)、平均紅細胞容積(MCV)、血紅蛋白(Hb)含量、紅細胞容積(HCT)、平均紅細胞血紅蛋白(MCH)含量、平均紅細胞血紅蛋白濃度(MCHC)、網(wǎng)織紅細胞計數(shù)(RET)、白細胞計數(shù)(WBC)、中性粒細胞(G)、淋巴細胞(L)、單核細胞(M)、血小板計數(shù)(PIT)、凝血酶原時間(PT)、活化部分凝血酶原時間(APTT)]、血液生化學[丙氨酸氨基轉換酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉換酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)、肌酐(CRE)、尿素氮(Urea)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、血糖(GLU)、總膽紅素(TBIL)、總膽固醇(CHOL)、甘油三脂(TG)]、檢測、臟體比和病理組織學檢查。
2.3統(tǒng)計學處理組間比較用t檢驗。
3.1急性毒性試驗試驗期間,各組大鼠外觀體征、行為活動、腺體分泌、呼吸、排尿、糞便等一般情況未見異常;2組大鼠體質量增長無顯著性差異(P>0.05);未見其他異常反應,且無一例死亡。給藥14d后處死動物,肉眼觀察實驗動物各臟器未見異常。因給藥體積,濃度均已達到最大限度,故六年生鮮人參灌胃給藥大鼠的最大耐受劑量大于20.4g/kg,表明其無急性毒性作用。
表1 六年生鮮人參對大鼠急性毒性體質量增長的影響
3.2大鼠長期毒性試驗
3.2.1對動物一般狀態(tài)情況在整個試驗期間,空白對照組及服用人參各劑量組動物行為活動正常,反應機敏,毛發(fā)正常,飲食、尿便正常。與對照組動物相比未見異常改變。無死亡動物。
3.2.2對體質量增長、體溫及攝食量的影響在30d服用人參期間與2周恢復觀察期間,各組大鼠生長狀態(tài)良好,服用人參各劑量組動物的體溫、攝食量和體質量增長均無異常,與對照組比較無明顯差異(P>0.05)。體質量增長部分數(shù)據(jù)見表2。
表2 六年生鮮人參對大鼠長期毒性試驗體質量增長的影響
3.2.3血液細胞學及血液生化學檢測結果連續(xù)服用六年生鮮人參30d和2周恢復期觀察結束,服用人參各劑量組動物的血液學及血液生化學各項指標的影響,與對照組比較均無明顯差異(P>0.05)。部分數(shù)據(jù)見表3、4。
表3 六年生鮮人參對大鼠長期毒性試驗(30d)血常規(guī)的影響(χ±S)n=10
表4 六年生鮮人參對大鼠長期毒性試驗(30d)血液生化學指標的影響(χ±S)n=10
3.2.4臟體比及病理組織學檢查分別在服用人參30d和2周恢復期觀察結束時,經(jīng)系統(tǒng)解剖、肉眼觀察,對照組與服用人參各劑量組動物主要臟器的外觀形態(tài)、表面色澤、輪廓體積、所處位置等均未見異常病理改變。服用人參劑量組與對照組動物間主要臟體比值也均無顯著差異(P>0.05)。對照組與高劑量組動物組織器官的病理組織學檢查也未發(fā)現(xiàn)與受試品相關的毒性反應發(fā)生。臟體比部分數(shù)據(jù)見表5。
表5 六年生鮮人參對大鼠長期毒性試驗(30d)主要臟器指數(shù)的影響(χ±S)n=10
3.2.5可逆性觀察停藥后觀察2周,六年生鮮人參各劑量組生長與攝食情況,同對照組比較無顯著性差異(P>0.05)。剖殺余下的動物作以上各指標的檢測,結果為六年生鮮人參各劑量組動物各項指標與對照組相比均無明顯差異(P>0.05)。表明,連續(xù)給予30d六年生鮮人參,未引起延遲毒性。
安全性毒理學評價是通過快速、經(jīng)濟的方法對藥物安全性作出評價,通常采用組合的試驗對受試物進行檢測。急性毒性試驗可了解受試物的毒性強度性質及可能的靶器官,六年生鮮人參急性毒性試驗表明:給藥后實驗動物無明顯中毒反應,雌雄大鼠經(jīng)口最大耐受劑量(MTD)均大于20.4g/kg,根據(jù)急性毒性分級標準,其屬于無毒級;長期毒性試驗結果表明六年生鮮人參無明顯毒性作用,受試大鼠生長情況良好,血液學、血液生化學等各指標均未見異常。臟體比及病理組織學檢查均未見明顯病變。綜上所述,我們認為以上試驗結果可以為六年生鮮人參的食用安全性提供一定的理論依據(jù),但由于其具有一定的藥理作用,而且作為食品服用周期較長,還需要進行相應的毒副作用觀察及慢性毒性研究。
[1]國家國藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[S].2010年版.北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:8.
[2]常曉紅,李靜.淺談中國六年生鮮人參、韓國六年生鮮人參之異同[J].中國藥業(yè),2010,19(16):68-69.
To xic ologic al Se c u rit y St u d y o f 6 Yea r-old Fr e s h Gin s en g
Yang Xiaofeng1Chen Wenxue2Zhang fengxia1Yang M ing2?(1 Tonghua Xinghua p harm aceutical Co.,Ltd.,Jilin p rovince,Changchun,130008,China; 2 Center for the Study of D rug Developm ent,Jilin Academ y of Traditional Chinese M edicine,Jilin p rovince,Changchun,130021,China)
Objective To evaluate the toxicological characterization of 6 year-old ginseng in edible safety.Motheds Test of the maximum dose(MTD)was used to detect the acute toxicity.The Rats were divided into four groups:the treatment groups(minimum,middle,maximum dose of 6 year-old ginseng)and the control group.After continuously orally being administrated for 1 month,we began to reversibility study.Results There was no obvious toxic symptom in the acute toxicity trial(the acute toxicity of the different sexual mice,MTD>20.4g/kg-1dose of ginseng decoction).The results of long-term toxicity trial indicated that there were no significant differences in appearance,behavior,body weight,food exploitation rate,blood cytology indexes,blood biochemical indexes,organ/body ratio,and hematology examination in the rats of the three dosage groups as compared to the control group.The reversibility study demonstrated that there was no delayed toxicity in the rats of the three dosage groups as compared to the control group(P>0.05).Conclusion 6 year-old ginseng decoction is a nontoxic drug and it is safe to long-term use.
6 year-old Fresh Ginseng;Acute toxicity test;Long-erm toxicity trial
10.3969/j.issn.1672-2779.2013.16.115
1672-2779(2013)-16-0157-02
吳義紅
2013-06-16)
吉林省科技支撐計劃項目[No:20086042]
*通訊作者