陳美安姜建萍甄漢深馬文芳，張 翰

1.成都中醫(yī)藥大學，四川 成都 611137；2.廣西中醫(yī)藥大學，廣西 南寧 530001

滇桂艾納香乙酸乙酯提取物中總黃酮的含量測定

陳美安1姜建萍2甄漢深2馬文芳1，2張 翰2

1.成都中醫(yī)藥大學，四川 成都 611137；2.廣西中醫(yī)藥大學，廣西 南寧 530001

目的：建立滇桂艾納香乙酸乙酯提取物中總黃酮的含量測定方法，為其質(zhì)量控制標準提供依據(jù)。方法：采用紫外－可見分光光度法，以蘆丁為對照品，5%亞硝酸鈉溶液－10%硝酸－4%氫氧化鈉溶液為顯色系統(tǒng)，測定滇桂艾納香乙酸乙酯提取物中總黃酮的含量，測定波長為510nm。結(jié)果：蘆丁在0.0108～0.0645mg/ml范圍內(nèi)呈良好的線性關系，其回歸方程為：A＝12.363C＋0.0055（r＝0.9996）；平均加樣回收率為99.17%（RSD為0.66%）。結(jié)論：該方法快速簡便、結(jié)果準確，可作為滇桂艾納香乙酸乙酯提取物中總黃酮含量測定的有效方法。

滇桂艾納香；乙酸乙酯提取物；總黃酮；紫外－可見分光光度法

滇桂艾納香（Blumeariparia（Bl.）DC.），屬于菊科艾納香屬植物，為廣西民間常用壯藥，具有活血、止血、利水作用，用于經(jīng)期提前、產(chǎn)后血崩、產(chǎn)后浮腫、不孕癥等［1］。目前，有文獻報道［2］在滇桂艾納香的預試驗研究中發(fā)現(xiàn)其可能含有黃酮類或其苷類物質(zhì)。在其化學成分研究中，已分離得到芹菜素、小麥黃素、木犀草素、山奈酚、鼠李檸檬素等多種黃酮類化合物［3－5］。黃酮類化合物是一類存在于多種植物中的多酚類化合物，具有多種潛在的藥理活性。已有文獻報道了［6］不同產(chǎn)地滇桂艾納香中總黃酮的含量測定，但對其乙酸乙酯提取物中總黃酮的含量測定未見文獻報道，故本文采用紫外－可見分光光度法對滇桂艾納香乙酸乙酯提取物進行總黃酮含量測定，為其質(zhì)量控制提供科學依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器與試劑 Agilent 8453紫外－可見分光光度儀（美國安捷倫公司）；METTLER－AE100電子分析天平（瑞士METTLER公司）；蘆丁對照品（中國藥品生物檢定所，供含量測定用）；水為蒸餾水，亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉、甲醇、乙醇等試劑均為分析純。

1.2 藥材 滇桂艾納香藥材，分別采自廣西百色地區(qū)那坡縣、德保縣、凌云縣及龍州縣，經(jīng)廣西中醫(yī)藥大學藥用植物教研室劉壽養(yǎng)副教授鑒定為菊科艾納香屬植物滇桂艾納香（Blumeariparia（Bl.）DC.）的干燥全草。

表1 不同產(chǎn)地滇桂艾納香藥材

2 方法與結(jié)果

2.1 供試品溶液制備 取滇桂艾納香干燥藥材粗粉適量，加10倍量70%乙醇滲漉提取，減壓濃縮得到乙醇濃縮液。再依次用石油醚（60～90℃）、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇進行萃取，減壓濃縮得到各部位提取物。取乙酸乙酯提取物約2.0mg，精密稱定，用70%乙醇超聲溶解，放冷，定量轉(zhuǎn)移至25ml容量瓶中，加70%乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2 對照品溶液制備 稱取105℃干燥至恒重的蘆丁對照品約26mg，精密稱定，置100ml容量瓶中，加70%乙醇約20ml超聲溶解，放冷，加70%乙醇至刻度，搖勻，即得。2.3 黃酮的定性檢識 取同一批滇桂艾納香乙酸乙酯提取物3份，適量，加甲醇稀釋溶解，分別進行鹽酸－鎂粉反應、三氯化鋁－乙醇反應、氨熏試驗。結(jié)果表明滇桂艾納香乙酸乙酯提取物中含有黃酮類化合物。

2.4 檢測波長的選擇 精密吸取蘆丁對照品溶液和供試品溶液，各2m l，分別用5%亞硝酸鈉溶液－10%硝酸－4%氫氧化鈉溶液顯色系統(tǒng)顯色后，以相應的試劑作空白，在400～800nm波長范圍內(nèi)測定吸光度，尋求最大吸收波長。結(jié)果表明顯色后的對照品溶液和供試品溶液均在510nm處有最大吸收，故選擇測定吸收波長為510nm。

2.5 標準曲線的繪制 精密吸取蘆丁對照品溶液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0 ml，分別置于25ml容量瓶中，加水至10ml，加5%亞硝酸鈉溶液1.0ml，搖勻，放置5min，加10%硝酸鋁溶液1.0ml，搖勻，放置5min，加4%氫氧化鈉溶液10.0ml，再加水至刻度，搖勻，放置15min。以相應的試劑作空白，在510nm波長處測定吸收值。以對照品溶液濃度（C）為橫坐標，吸光度（A）為縱坐標，繪制標準曲線，求得回歸方程：A＝12.363C＋0.0055，r＝0.9996。結(jié)果表明蘆丁在0.0108～0.0645mg/ml范圍內(nèi)呈良好的線性關系。標準曲線見圖1。

2.6 精密度試驗 精密吸取對照品溶液2.0m l，按2.5標準曲線操作項下依法顯色后，連續(xù)測定6次，計算RSD值為0.11%（n＝6），結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗 分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液，各2.0m l，分別按2.5標準曲線操作項下依法顯色后，按0，20，40，80，120，160，200，240min測定吸收值，其測定值基本穩(wěn)定，RSD值分別為0.61%和0.10%（n＝6），結(jié)果表明對照品溶液和供試品溶液在240min內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 重復性試驗 取同一批樣品約2.0mg，6份，精密稱定，加入適量70%乙醇超聲溶解，放冷，定量轉(zhuǎn)移至25m l容量瓶中，按2.5標準曲線操作項下依法顯色后測定吸收值，含量平均值為58.61%，RSD值為0.15%（n＝6），結(jié)果表明重現(xiàn)性良好。

2.9 加樣回收率試驗 取已知含量的樣品約1.0mg，6份，精密稱定，分別加入一定量的蘆丁對照品溶液，用適量70%乙醇超聲溶解，放冷，定量轉(zhuǎn)移至25m l容量瓶中，按2.5標準曲線操作項下依法顯色后測定吸收值，測定平均回收率為99.17%，RSD值為0.66%（n＝6），結(jié)果見表2。

表2 加樣回收率試驗結(jié)果

2.10 樣品中總黃酮的含量測定 分別取四批滇桂艾納香乙酸乙酯提取物約2.0mg，精密稱定，加入適量70%乙醇超聲溶解，放冷，定量轉(zhuǎn)移至25ml容量瓶中，按2.5標準曲線操作項下依法顯色后測定吸收值，計算含量。結(jié)果見表3。

表3 樣品中總黃酮含量測定結(jié)果

3 討論

3.1 本文建立滇桂艾納香乙酸乙酯提取物中總黃酮的含量測定研究，方法簡便、快速、準確，適合作為滇桂艾納香乙酸乙酯提取物中總黃酮含量測定的方法，為控制其質(zhì)量提供科學數(shù)據(jù)。

3.2 本實驗參照紫外－可見分光光度法（《中國藥典》2010年版一部附錄ⅤA）［7］，以蘆丁為對照品，采用統(tǒng)一顯色方法，即5%亞硝酸鈉溶液－10%硝酸－4%氫氧化鈉溶液，使蘆丁的鄰二酚羥基官能團顯色，使其在510nm有明顯的吸收，且供試品溶液顯色后的最大吸收波長也為510nm。同時考察了5%亞硝酸鈉溶液－10%硝酸－4%氫氧化鈉溶液顯色系統(tǒng)的加入量，結(jié)果發(fā)現(xiàn)5%亞硝酸鈉溶液－10%硝酸－4%氫氧化鈉溶液的加入量分別為1.0m l、1.0m l、10.0m l時，供試品中的總黃酮含量最高。

3.3 在選擇樣品溶劑時，考察了30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇、乙醇、30%甲醇、50%甲醇、70%甲醇、甲醇作為溶劑，結(jié)果表明用70%乙醇作為樣品的溶劑，測得總黃酮含量最高。

3.4 從不同產(chǎn)地樣品的總黃酮含量測定中可看出，其含量有一定的差別，其中廣西百色市龍州縣的含量最高，而廣西百色市凌云縣的含量最低。

［1］廣西壯族自治區(qū)衛(wèi)生廳.廣西中藥材標準（第2冊）［S］.1996：274－278.

［2］姜建萍，陳晨，劉喜華等.滇桂艾納香化學成分預試研究［J］.廣西中醫(yī)學院學報，2009，12（13）：46－48.

［3］鄭丹，張曉琦，王英，等.滇桂艾納香地上部分的化學成分［J］.中國天然藥物，2007，5（6）：421－424.

［4］曹家慶，黨權(quán)，付紅偉，等.滇桂艾納香化學成分的分離與鑒定［J］.沈陽藥科大學學報，2007，24（10）：615－617.

［5］曹家慶，孫淑偉，陳歡，等.滇桂艾納香黃酮類化學成分的研究［J］.中國中藥雜志，2008，33（7）：782－784.

［6］姜建萍，杜秀，丘琴，等.不同產(chǎn)地滇桂艾納香中總黃酮的含量測定［J］.廣西中醫(yī)學院學報，2009，12（4）：44－46.

［7］國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典2010版（一部）［S］.北京：化學工業(yè)出版社，2010：附錄30.

R284.1

A

1007－8517（2013）07－0015－02

2013.02.23）

廣西自然科學基金項目（2010GXNSFA013195）。

陳美安（1984－），女，廣西玉林人，博士研究生，研究方向：中藥藥效物質(zhì)基礎與質(zhì)量標準化研究。

姜建萍（1965－），女，江蘇溧陽人，教授，博士，研究方向：中藥、民族藥質(zhì)量與成分分析研究。