■季延濱 程民杰 孫學(xué)亮 謝永慶 陳成勛

（天津農(nóng)學(xué)院水產(chǎn)科學(xué)系，天津市水產(chǎn)生態(tài)及養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津 300384）

革胡子鯰（Clarias leather）俗稱埃及塘虱，分類上隸屬于硬骨魚綱，輻鰭亞綱，鯉形總目（Cypri?nomorpha），鯰形目（Siluriformes），胡子鯰科（Clari?idae）[1]。革胡子鯰具有生長(zhǎng)快、適應(yīng)性強(qiáng)、易繁殖、耐低氧、產(chǎn)量大、營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高、肉質(zhì)細(xì)嫩等優(yōu)點(diǎn)。隨著革胡子鯰在我國(guó)的全面推廣，國(guó)內(nèi)對(duì)其研究和報(bào)道日漸增多，主要報(bào)道有生物學(xué)特性[2]、飼料動(dòng)植物蛋白比[3]、人工繁育[4]、苗種培育[5]等。但不同蛋白源對(duì)其非特異性免疫和抗氧化性能的研究報(bào)道甚少。本文通過對(duì)革胡子鯰各項(xiàng)健康指標(biāo)的測(cè)定，分析各種蛋白源飼料對(duì)其影響，旨在為提高魚類免疫力，增強(qiáng)抗病能力，生產(chǎn)出配方更加科學(xué)的人工配合飼料提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)用魚

選取健康無病的革胡子鯰苗種[(84.5±2.4)g]共180尾。試驗(yàn)前所有苗種分組暫養(yǎng)在容積為75 L的塑料圓桶中，使其適應(yīng)養(yǎng)殖環(huán)境。

1.2 試驗(yàn)飼料

本試驗(yàn)采用兩種不同蛋白源的飼料，包括以魚粉和肉粉為蛋白源的兩種人工配合飼料以及冰鮮魚肉（鯉魚）做對(duì)照組。魚粉和肉粉在兩種人工配合飼料中各占50%，豆粕、玉米、次粉分別占15%、10%、20%，添加劑占5%。所有原料都經(jīng)過粉碎機(jī)粉碎并通過40目篩絹過篩，按比例稱重后均勻混合，制粒，晾曬后放在陰涼干燥處保存?zhèn)溆?。兩種飼料營(yíng)養(yǎng)成分見表1。

表1 兩種人工配合飼料的營(yíng)養(yǎng)成分(%)

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)共分為3組（魚粉組、肉粉組和冰鮮魚肉組），每組設(shè)3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)放魚20尾試驗(yàn)用魚，分別放養(yǎng)在6個(gè)白色75 L的塑料桶中。養(yǎng)殖時(shí)間為30 d，日投餌量按體重的3%。試驗(yàn)期間，每天撈取殘餌，換水1～2次，每次換掉1/4～1/5。試驗(yàn)結(jié)束后，停食1 d，每組隨機(jī)取出5尾試驗(yàn)用魚，采用尾柄靜脈采血法，抽取血液樣本，隨后對(duì)魚體進(jìn)行解剖，取出其肝臟、脾臟、頭腎備用。稱取組織樣本200 mg左右，將其放入勻漿管，再用移液管吸取9倍于組織質(zhì)量的生理鹽水倒入勻漿管中，將勻漿管置于冰水中，勻漿器由低速到高速勻漿，使組織被充分研磨直至漿狀且無明顯較大碎塊，將其倒入離心管，4 000 r/min離心15 min，取上清液備用。測(cè)定超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）、堿性磷酸酶（AKP）、酸性磷酸酶（ACP）活性及丙二醛（MDA）、總蛋白(以上試劑盒購于南京建成生物工程研究所)含量等指標(biāo)。

1.4 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)用SPSS13.0軟件做方差分析，差異顯著(P＜0.05)用Duncan's法作多重比較。表中數(shù)據(jù)用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示。

2 結(jié)果

2.1 超氧化物歧化酶（SOD）活性（見表2）

表2 各組革胡子鯰血清、肝臟、脾臟和頭腎SOD的活性

如表2所示，冰鮮魚肉組的血清和肝臟SOD活性顯著高于魚粉組和肉粉組，而其頭腎SOD活性和魚粉組測(cè)定結(jié)果相比差異顯著。同樣，肉粉組與魚粉組的頭腎SOD活性差異顯著。魚粉組和肉粉組的血清和肝臟的SOD活性差異不顯著，而三個(gè)組脾臟的SOD活性測(cè)定結(jié)果差異也不顯著。

2.2 過氧化氫酶（CAT）活性（見表3）

表3 各組革胡子鯰血清、肝臟、脾臟和頭腎CAT的活性

如表3所示，魚粉組和肉粉組的各組織和血清CAT活性差異不顯著，而二者與冰鮮魚肉相比，血清和肝臟的CAT活性測(cè)定結(jié)果差異顯著，其他結(jié)果比較差異均不顯著。

2.3 丙二醛（MDA）含量（見表4）

如表4所示，冰鮮魚肉組的血清和各組織MDA含量與另外兩組相比，測(cè)定結(jié)果均差異顯著。肉粉組與魚粉組和冰鮮魚肉組頭腎中的MDA含量各組間差異均顯著。魚粉組和肉粉組的血清、肝臟和脾臟的MDA含量測(cè)定結(jié)果差異均不顯著。

表4 各組革胡子鯰血清、肝臟、脾臟和頭腎MDA的含量

2.4 堿性磷酸酶（AKP）活性（見表5）

如表5所示，冰鮮魚肉組與魚粉組的AKP活性測(cè)定結(jié)果相比較，血清和肝臟的結(jié)果差異均顯著，脾臟和頭腎則不顯著。肉粉組的肝臟和脾臟的AKP活性與魚粉組相比，差異顯著，而其血清和頭腎中的AKP活性和冰鮮魚肉組的測(cè)定結(jié)果比較，差異顯著。

2.5 酸性磷酸酶（ACP）活性（見表6）

表5 各組革胡子鯰血清、肝臟、脾臟和頭腎AKP的活性

表6 各組革胡子鯰血清、肝臟、脾臟和頭腎ACP的活性

如表6所示，冰鮮魚肉的血清ACP活性與肉粉組相比，差異顯著；而魚粉組則與冰鮮魚肉組和肉粉組差異不顯著。肝臟、脾臟和頭腎的ACP活性，3個(gè)組之間差異均不顯著。

3 討論

3.1 不同蛋白源飼料對(duì)革胡子鯰SOD活性的影響

超氧化物歧化酶（SOD）存在于幾乎所有的動(dòng)物、植物以及微生物體內(nèi)，催化超氧陰離子自由基（·O2-）發(fā)生歧化反應(yīng),清除超氧陰離子自由基，保護(hù)細(xì)胞免受損傷，是抗氧化酶系統(tǒng)的組成部分，成為衡量機(jī)體健康及免疫調(diào)節(jié)能力大小的重要指標(biāo)之一。SOD在生物體內(nèi)的水平高低是自由基損害細(xì)胞程度的直觀指標(biāo)，目前眾多研究表明，魚類SOD活性與各種環(huán)境因子有關(guān)，當(dāng)水體內(nèi)氨氮濃度升高時(shí)，魚類體內(nèi)產(chǎn)生大量·O2-、H2O2等有害物質(zhì)，SOD活性會(huì)隨即上升[6]。而為了提高魚類機(jī)體免疫力和抗病力，向飼料中添加中草藥等添加劑可有效提升SOD活性[7]。在飼料中添加高劑量維生素E（400、600 mg/kg飼料）會(huì)升高羅氏沼蝦肝臟的SOD活性[8]。本試驗(yàn)比較投喂不同蛋白源飼料后，對(duì)革胡子鯰的健康影響。結(jié)果顯示，投喂冰鮮魚肉的革胡子鯰幼魚的血清和肝臟SOD活性明顯高于另外兩組，這可能是由于冰鮮魚肉中含有豐富的維生素、脂類等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和活性物質(zhì)，而且冰鮮魚肉本身營(yíng)養(yǎng)組成更接近革胡子鯰，對(duì)革胡子鯰的生長(zhǎng)和提高免疫活力有很大幫助，在不良環(huán)境中，SOD的活性會(huì)大大增加，清除體內(nèi)濃度過高的超氧陰離子自由基，保持體內(nèi)自由基的代謝平衡，提高機(jī)體免疫能力，降低疾病發(fā)生的可能。

3.2 不同蛋白源飼料對(duì)革胡子鯰CAT的影響

過氧化氫酶（CAT）是一種酶類清除劑，它可將細(xì)胞代謝產(chǎn)生的毒性物質(zhì)H2O2迅速催化分解為H2O和O2，從而使細(xì)胞免于遭受H2O2的毒害，防止羥自由基的形成，是生物防御體系的關(guān)鍵酶之一。F.I.Achuba研究發(fā)現(xiàn)，石油烴類物質(zhì)可以誘導(dǎo)脂質(zhì)過氧化，而機(jī)體會(huì)增加CAT和SOD的活性以保護(hù)魚類免受石油烴類物質(zhì)所引發(fā)的自由基毒性的傷害[9]。在CAT和SOD的共同作用下使機(jī)體保持自由基的代謝平衡，其中SOD可催化·O2-生成H2O2，從而清除·O2-，而CAT能催化H2O2分解成水和氧氣[10]。通過試驗(yàn)得知，投喂冰鮮魚肉的革胡子鯰幼魚血清和肝臟的CAT活性顯著高于魚粉組和肉粉組，而脾臟和頭腎的CAT活性，三組差異均不顯著。由于冰鮮魚肉和魚粉、肉粉為蛋白源的人工配合飼料相比，提高了SOD的活性，SOD催化·O2-生成H2O2,從而清除了·O2-，使得H2O2的含量增多，為保護(hù)機(jī)體免受過氧化氫的侵害，CAT的活性明顯增大。

3.3 不同蛋白源飼料對(duì)革胡子鯰MDA含量的影響

丙二醛（MDA）是脂質(zhì)過氧化作用的最終分解產(chǎn)物，會(huì)引起蛋白質(zhì)、核酸等生命大分子的交聯(lián)聚合，且具有細(xì)胞毒性，其含量標(biāo)志著機(jī)體的活性氧自由基和脂質(zhì)過氧化水平。自由基是生物體內(nèi)具有高度活性的物質(zhì)，能參與多種化學(xué)反應(yīng)，一旦自由基含量增加，則會(huì)引發(fā)脂質(zhì)過氧化，形成MDA等新的氧化自由基，對(duì)魚體造成損傷[11]。通過檢測(cè)MDA的含量可間接反映出細(xì)胞受損傷的程度。彭士明等研究了飼料中添加維生素E可顯著降低黑鯛幼魚肝臟中MDA的含量[12]。從試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果看，冰鮮魚肉組的血清、肝臟和脾臟中的MDA含量均顯著少于魚粉組和肉粉組，由于冰鮮魚肉中可能含有革胡子鯰所需要的必需氨基酸和多種抗氧化活性物質(zhì)，且這些營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的活性高于魚粉和肉粉制成的人工配合飼料，所以冰鮮魚肉更能顯著抑制MDA的產(chǎn)生，并且可有效地防止生物膜的脂質(zhì)發(fā)生過氧化作用，避免其生物活性喪失，從而減少脂質(zhì)過氧化作用的最后產(chǎn)物MDA的含量，阻止其與蛋白質(zhì)的巰基反應(yīng)，蛋白質(zhì)和酶將保持他們的生物活性，從而進(jìn)行正常的代謝活動(dòng)。另外，SOD、CAT活性的增強(qiáng)，形成了聯(lián)合作用，清除機(jī)體內(nèi)的活性氧自由基和脂質(zhì)氧化代謝產(chǎn)物，使得MDA的含量大大降低，并提高了魚體的免疫能力。

3.4 不同蛋白源飼料對(duì)革胡子鯰AKP的影響

堿性磷酸酶（AKP）是一種磷酸單酯水解酶，在機(jī)體內(nèi)直接參與磷酸基團(tuán)的轉(zhuǎn)移和代謝，有助于吸收脂類、葡萄糖、鈣和無機(jī)磷。在免疫方面，它是溶酶體酶的重要組成部分，當(dāng)異物被吞入細(xì)胞后與溶酶體酶融合，最終被包括AKP、ACP在內(nèi)的各種水解酶分解，從而在免疫反應(yīng)中發(fā)揮重要作用。有研究表明，許多理化因子能通過調(diào)控堿性磷酸酶活性而調(diào)節(jié)動(dòng)物的新陳代謝，在飼料中添加維生素C，可使機(jī)體中AKP、ACP活性顯著增高，促進(jìn)新陳代謝并提高免疫力[13]。本試驗(yàn)則驗(yàn)證不同蛋白源的飼料也會(huì)影響AKP的活性。試驗(yàn)結(jié)果表明，冰鮮魚肉組的血清中AKP活性顯著高于其他兩組，而肝臟的AKP活性卻顯著低于魚粉組。魚粉組脾臟的AKP含量與冰鮮魚肉組差異不顯著，但顯著高于肉粉組?？赡苁囚~粉的蛋白組成以及含量與冰鮮魚肉相似，且符合革胡子鯰的需要，所以魚粉組的AKP活性要高于肉粉組，與冰鮮魚肉組接近。

3.5 不同蛋白源飼料對(duì)革胡子鯰ACP的影響

酸性磷酸酶（ACP）廣泛分布于生物界，同AKP一樣是一種磷酸酯酶，存在于溶酶體內(nèi)，也見于溶酶體外的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和胞漿基質(zhì)內(nèi)，除了參與磷酸酯的代謝外，還參與代謝調(diào)節(jié)、能量轉(zhuǎn)換及信號(hào)傳導(dǎo)等重要生命活動(dòng)。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，冰鮮魚肉組的血清ACP活性顯著高于肉粉組，與魚粉組差異不顯著；其他組織的ACP活性，三組的測(cè)定結(jié)果接近，差異不顯著。

4 結(jié)論

綜合顯示，投喂冰鮮魚肉后革胡子鯰的健康指標(biāo)要好于投喂以魚粉和肉粉為動(dòng)物蛋白源的兩種人工配合飼料。魚粉和肉粉在兩種人工配合飼料中對(duì)革胡子鯰的健康影響差異不大，可見以肉粉為動(dòng)物蛋白源的人工配合飼料對(duì)革胡子鯰的健康沒有副作用，而肉粉和魚粉相比，更為廉價(jià)，所以部分或完全代替魚粉是可行的。